【概要描(miao)述(shu)】鼠(shu)抗(kang)人(ren)骨形(xing)成蛋(dan)白(bai)4單(dan)克(ke)隆(long)抗(kang)體(ti) Bone Morphogenetic Protein 4 Western 免疫(yi)印(yin)跡對已(yi)知表達(da)蛋(dan)白，可(ke)用相(xiang)應抗(kang)體(ti)作(zuo)為(wei)壹抗(kang)進(jin)行(xing)檢(jian)測(ce)，對新基因(yin)的(de)表達(da)產(chan)物(wu)，可(ke)通過(guo)融合部分的(de)抗(kang)體(ti)檢(jian)測(ce)。

鼠抗(kang)人(ren)骨形(xing)成蛋(dan)白(bai)4單(dan)克(ke)隆(long)抗(kang)體(ti)    Bone Morphogenetic Protein 4    Western Blot技(ji)術(shu):
壹(yi)、 原(yuan)理
與(yu)Southern或(huo)Northern雜交(jiao)方法(fa)類似，但Western Blot采(cai)用的(de)是(shi)聚(ju)丙(bing)烯酰(xian)胺(an)凝膠(jiao)電泳，被(bei)檢測(ce)物(wu)是(shi)蛋白質(zhi)，“探針”是抗(kang)體(ti)，“顯(xian)色”用標(biao)記(ji)的(de)二(er)抗(kang)。經(jing)過(guo)PAGE分離(li)的(de)蛋(dan)白(bai)質(zhi)樣品(pin)，轉移到固相(xiang)載體(ti)（例如硝(xiao)#纖(xian)維素薄膜）上，固相(xiang)載體(ti)以非共(gong)價(jia)鍵形(xing)式(shi)吸(xi)附(fu)蛋(dan)白(bai)質(zhi)，且(qie)能(neng)保持(chi)電(dian)泳分離(li)的(de)多(duo)肽(tai)類型及(ji)其生物(wu)學(xue)活性不變。以(yi)固(gu)相(xiang)載體(ti)上的(de)蛋(dan)白(bai)質(zhi)或(huo)多(duo)肽(tai)作(zuo)為(wei)抗(kang)原(yuan)，與對應的(de)抗(kang)體(ti)起免疫(yi)反(fan)應，再與酶(mei)或(huo)同位素標記(ji)的(de)第(di)二(er)抗(kang)體(ti)起反應(ying)，經(jing)過(guo)底(di)物(wu)顯(xian)色或(huo)放(fang)射自(zi)顯(xian)影以檢(jian)測(ce)電(dian)泳(yong)分離(li)的(de)特異性目(mu)的(de)基(ji)因(yin)表達(da)的(de)蛋(dan)白(bai)成(cheng)分。該(gai)技術(shu)也廣泛(fan)應用於(yu)檢測(ce)蛋(dan)白(bai)水(shui)平的(de)表達(da)。
二(er)、分類
現常用的(de)有(you)底(di)物(wu)化(hua)學(xue)發(fa)光(guang)ECL和(he)底(di)物(wu)DAB呈色，體同水(shui)平和(he)實驗(yan)條(tiao)件(jian)的(de)是(shi)用*種(zhong)方法(fa)，目(mu)前(qian)發(fa)表文章通常是用底(di)物(wu)化(hua)學(xue)發(fa)光(guang)ECL。只(zhi)要(yao)買現成的(de)試(shi)劑(ji)盒就行(xing)，操(cao)作(zuo)也(ye)比(bi)較簡(jian)單(dan)，原(yuan)理如(ru)下(xia)（二(er)抗(kang)用HRP標(biao)記(ji)）：反應(ying)底(di)物(wu)為(wei)過(guo)氧(yang)化(hua)物(wu)+魯米諾(nuo)，如遇到HRP，即發(fa)光(guang)，可(ke)使(shi)膠(jiao)片(pian)曝(pu)光(guang)，就可(ke)洗出條(tiao)帶(dai)。
三(san)、主要(yao)試(shi)劑(ji)鼠(shu)抗(kang)人(ren)骨形(xing)成蛋(dan)白(bai)4單(dan)克(ke)隆(long)抗(kang)體(ti)    Bone Morphogenetic Protein 4  、 丙(bing)烯酰(xian)胺(an)和(he)N，N’-亞甲(jia)雙(shuang)丙烯酰(xian)胺(an)，應(ying)以(yi)溫熱（以利於(yu)溶(rong)解(jie)雙(shuang)丙稀酰(xian)胺(an)）的(de)去(qu)離(li)子水(shui)配制(zhi)含(han)有(you)29%（w/v）丙稀酰(xian)胺(an)和(he)%（w/v）N，N’-亞甲(jia)雙(shuang)丙烯酰(xian)胺(an)儲(chu)存(cun)液(ye)丙稀酰(xian)胺(an)29g，N，N-亞(ya)甲(jia)叉(cha)雙(shuang)丙稀酰(xian)胺(an)g，加(jia)H2O至(zhi) 00ml。）儲(chu)於(yu)棕(zong)色(se)瓶，4℃避(bi)光保(bao)存(cun)。嚴格(ge)核(he)實PH不得(de)超(chao)過(guo)7.0，因可(ke)以(yi)發(fa)生脫(tuo)氨(an)基(ji)反應(ying)是(shi)光催(cui)化(hua)或堿催(cui)化(hua)的(de)。使(shi)用期(qi)不得(de)超(chao)過(guo)兩(liang)個月，隔(ge)幾個月須(xu)重新(xin)配(pei)制(zhi)。如(ru)有(you)沈澱，可(ke)以(yi)過(guo)濾(lv)。
2、 十(shi)二(er)烷基(ji)硫(liu)#鈉SDS溶(rong)液:0%（w/v）0.gSDS，mlH2O去(qu)離(li)子水(shui)配制(zhi)，室(shi)溫保存。
3、 分離(li)膠緩(huan)沖(chong)液:.5mmol/L Tris-HCl （pH8.8）:8.5gTris和(he)48mlmol/L HCl 混合，加(jia)水(shui)稀釋(shi)到兔(tu)    Bone Morphogenetic Protein 4   4、 濃(nong)縮膠緩(huan)沖(chong)液:0.5mmol/L Tris-HCl （pH6.8）:6.05gTris溶(rong)於40mlH2O中，用約(yue)48ml mol/L HCl調(tiao)至(zhi)pH6.8加(jia)水(shui)稀釋(shi)到00ml終體(ti)積(ji)。過(guo)濾(lv)後(hou)40C保(bao)存(cun)。這兩(liang)種緩(huan)沖(chong)液必須(xu)使(shi)用Tris堿制(zhi)備(bei)，再用HCL調(tiao)節(jie)PH值，而不用 Tris.CL。
5、 TEMED原(yuan)溶(rong)液N，N，N’N’四(si)甲基(ji)乙(yi)二(er)胺催(cui)化(hua)過(guo)硫(liu)#銨(an)形成(cheng)自(zi)由(you)基(ji)而加(jia)速(su)兩(liang)種丙稀酰(xian)胺(an)的(de)聚(ju)合。PH太(tai)低(di)時，聚合反應(ying)受(shou)到抑制(zhi)。0%（w/v）過(guo)硫(liu)#胺(an)溶(rong)液。提(ti)供兩(liang)種丙稀酰(xian)胺(an)聚(ju)合所(suo)必須(xu)的(de)自(zi)由(you)基(ji)。去(qu)離(li)子水(shui)配制(zhi)數ml，臨(lin)用前(qian)配制(zhi).
 6、 SDS- PAGE加(jia)樣緩(huan)沖(chong)液:pH6.8 0.5mol/L Tris緩(huan)沖(chong)液8ml，甘油(you)6.4ml，0%SDS 2.8ml，巰基乙(yi)醇(chun)3.2ml，0.05%溴(xiu)酚(fen)藍(lan).6ml，H2O 32ml混(hun)勻備(bei)用。按(an):或:2比(bi)例與蛋(dan)白(bai)質(zhi)樣品(pin)混合，在(zai)沸(fei)水(shui)終煮3min混勻後再上樣，壹(yi)般(ban)為(wei)20-25ul，總蛋白量00μg。
7、 Tris-甘氨#電泳(yong)緩(huan)沖(chong)液:30.3gTris，88g甘氨#，0gSDS，用蒸(zheng)餾(liu)水(shui)溶(rong)解(jie)至(zhi)000ml，得(de)0.25mol/L Tris-.92mol/L甘氨#電極(ji)緩(huan)沖(chong)液。臨(lin)用前(qian)稀釋(shi)0倍(bei)。
8、 轉移緩(huan)沖(chong)液：配(pei)制(zhi)L轉移緩(huan)沖(chong)液，需稱取(qu)2.9g甘氨#、5.8gTris堿、0.37g SDS，並(bing)加(jia)入200ml甲醇，加(jia)水(shui)至總(zong)量L。
9、 麗春(chun)紅(hong)染(ran)液儲(chu)存液(ye)：麗(li)春(chun)紅(hong)S 2g 三(san)#乙(yi)#30g 磺(huang)基(ji)水(shui)楊# 30g 加(jia)水(shui)至00ml 用時上述(shu)儲(chu)存(cun)液稀釋(shi)0倍(bei)即(ji)成(cheng)麗春(chun)紅(hong)S使(shi)用液(ye)。使(shi)用後(hou)應予以(yi)廢棄。
0、 脫脂奶(nai)粉(fen)5%（w/v）。
、 NaN3 0.02% 疊氮鈉（有(you)毒(du)，戴手(shou)套操(cao)作(zuo)），溶(rong)於磷(lin)#緩(huan)沖(chong)鹽(yan)溶(rong)液（PBS）。
2、 Tris緩(huan)沖(chong)鹽(yan)溶(rong)液（TBS）:20mmol/LTris/HCl（pH7.5），500mmol/LnaCl。
3、 Tween20（5）鼠(shu)抗(kang)人(ren)-MMP-9（6）鼠抗(kang)人(ren)-TIMP-。
4、 過(guo)氧(yang)化(hua)物(wu)酶(mei)標記(ji)的(de)第(di)二(er)抗(kang)體(ti)。
5、 NBT（溶(rong)於70%二(er)甲基(ji)甲(jia)酰(xian)胺(an)，75mg/ml）。
6、 BCIP（溶(rong)於00%二(er)甲基(ji)甲(jia)酰(xian)胺(an)，50mg/ml）。
7、 00mmol/LTris-HCl（pH9.5）。
8、 00mmol/L NaCl。
9、 50mmol/LTris-HCl（pH7.5），5mmol/L 公(gong)司其(qi)他產(chan)品(pin)列(lie)表：Carmine 胭(yan)脂紅(hong) [390-65-4]
L-Carnitine T [54-5-]
L-Carnitine T [54-5-]
DL-Carnitine hydrochloride DL-肉堿鹽(yan)酸(suan)鹽(yan) [46-05-2]
L-Carnitine hydrochloride 左旋(xuan)肉堿鹽(yan)酸(suan)鹽(yan) [6645-46-]
L-Carnitine L-tartrate 左旋(xuan)肉堿酒(jiu)石酸鹽(yan) [36687-82-8]
L-Carnitine fumarate 左旋(xuan)肉堿富馬酸鹽(yan) [9047-79-7]
L-Carnosine L-肌肽(tai) [305-84-0]
（+）-Carvone 右(you)旋(xuan)香(xiang)芹(qin)酮(tong) [2244-6-8]
Castor oil [800-79-4]
Catalase, filtered 過(guo)氧(yang)化(hua)氫(qing)酶(mei) [900-05-2]
Catalase, suspension 過(guo)氧(yang)化(hua)氫(qing)酶(mei) [900-05-2]
Catechol 鄰(lin)苯(ben)二(er)酚 [20-80-9]
Chitin 幾(ji)丁(ding)質(zhi) [398-6-4]
Chlorazol black E 卡(ka)拉(la)唑(zuo)黑(hei)E [937-37-7]
Chloroform:isoamyl alcohol （24:） /
Catechol violet 鄰苯(ben)二(er)酚紫 [5-4-3]
Cedar wood oil 香(xiang)柏(bai)油(you) [8000-27-9]