【概要描述】鼠抗人單克(ke)隆(long)抗體 BLA.36 免疫印(yin)跡(ji)對(dui)已(yi)知(zhi)表達(da)蛋(dan)白，可(ke)用(yong)相應抗體作為(wei)壹(yi)抗進行(xing)檢(jian)測，對(dui)新(xin)基(ji)因(yin)的表達(da)產(chan)物，可(ke)通(tong)過(guo)融(rong)合(he)部分(fen)的(de)抗體檢(jian)測。

鼠抗人單克(ke)隆(long)抗體    BLA.36    Western Blot技(ji)術(shu):
壹、 原(yuan)理
與Southern或Northern雜交方(fang)法(fa)類(lei)似，但(dan)Western Blot采用的(de)是(shi)聚(ju)丙烯(xi)酰胺(an)凝(ning)膠電(dian)泳，被檢(jian)測物是(shi)蛋(dan)白質(zhi)，“探針(zhen)”是抗體，“顯色(se)”用(yong)標記(ji)的(de)二抗。經過(guo)PAGE分(fen)離(li)的蛋(dan)白質(zhi)樣(yang)品，轉(zhuan)移(yi)到(dao)固(gu)相載(zai)體（例(li)如(ru)硝(xiao)#纖維(wei)素(su)薄(bo)膜）上，固(gu)相載(zai)體以非(fei)共價(jia)鍵形式吸(xi)附(fu)蛋(dan)白質(zhi)，且能保持(chi)電(dian)泳(yong)分(fen)離(li)的多(duo)肽類(lei)型(xing)及(ji)其生物學(xue)活(huo)性(xing)不(bu)變。以固(gu)相載(zai)體上(shang)的(de)蛋(dan)白質(zhi)或多(duo)肽作為(wei)抗原，與對(dui)應的抗體起免(mian)疫反(fan)應，再與酶或同(tong)位素(su)標記(ji)的(de)第二抗體起反(fan)應，經過(guo)底物顯(xian)色(se)或(huo)放(fang)射自顯(xian)影(ying)以檢(jian)測電(dian)泳(yong)分(fen)離(li)的特(te)異(yi)性目(mu)的基(ji)因(yin)表達(da)的(de)蛋(dan)白成(cheng)分(fen)。該(gai)技(ji)術(shu)也廣(guang)泛(fan)應用於檢(jian)測蛋(dan)白水平(ping)的(de)表達(da)。
二、分(fen)類(lei)
現常(chang)用的(de)有(you)底物化學(xue)發(fa)光ECL和(he)底物DAB呈(cheng)色(se)，體(ti)同(tong)水平(ping)和(he)實驗條件的是用(yong)*種方(fang)法(fa)，目(mu)前發(fa)表文(wen)章(zhang)通常(chang)是(shi)用底物化學(xue)發(fa)光ECL。只要買現成(cheng)的試劑盒就行(xing)，操(cao)作也(ye)比(bi)較(jiao)簡單，原(yuan)理(li)如下（二抗用HRP標記(ji)）：反(fan)應底物為(wei)過(guo)氧化物+魯(lu)米諾，如(ru)遇(yu)到(dao)HRP，即發(fa)光，可(ke)使(shi)膠片(pian)曝光(guang)，就可(ke)洗(xi)出條帶。
三、主要(yao)試劑鼠(shu)抗人單克(ke)隆(long)抗體    BLA.36 、 丙烯(xi)酰胺(an)和(he)N，N’-亞甲雙(shuang)丙(bing)烯(xi)酰胺(an)，應以溫熱（以利(li)於溶(rong)解(jie)雙丙(bing)稀(xi)酰胺(an)）的去離(li)子水配制含有(you)29%（w/v）丙稀(xi)酰胺(an)和(he)%（w/v）N，N’-亞甲雙(shuang)丙(bing)烯(xi)酰胺(an)儲(chu)存液(ye)丙(bing)稀(xi)酰胺(an)29g，N，N-亞甲叉雙丙(bing)稀(xi)酰胺(an)g，加H2O至 00ml。）儲(chu)於棕色(se)瓶(ping)，4℃避光保(bao)存。嚴(yan)格(ge)核實PH不得(de)超過(guo)7.0，因(yin)可(ke)以發(fa)生脫氨(an)基(ji)反(fan)應是光催(cui)化或(huo)堿(jian)催(cui)化的(de)。使(shi)用期(qi)不(bu)得(de)超過(guo)兩(liang)個月，隔(ge)幾(ji)個月須(xu)重新配制。如有(you)沈澱(dian)，可(ke)以過(guo)濾(lv)。
2、 十(shi)二烷(wan)基(ji)硫(liu)#鈉(na)SDS溶(rong)液(ye):0%（w/v）0.gSDS，mlH2O去(qu)離(li)子水配制，室溫保存。
3、 分(fen)離(li)膠緩(huan)沖液(ye):.5mmol/L Tris-HCl （pH8.8）:8.5gTris和(he)48mlmol/L HCl 混(hun)合(he)，加水稀(xi)釋到(dao)    BLA.36 4、 濃縮膠(jiao)緩(huan)沖液(ye):0.5mmol/L Tris-HCl （pH6.8）:6.05gTris溶(rong)於(yu)40mlH2O中(zhong)，用約(yue)48ml mol/L HCl調至pH6.8加水稀(xi)釋到(dao)00ml終體(ti)積(ji)。過(guo)濾(lv)後(hou)40C保(bao)存。這(zhe)兩種緩沖(chong)液(ye)必(bi)須(xu)使(shi)用Tris堿(jian)制備(bei)，再用HCL調(tiao)節(jie)PH值，而(er)不用(yong) Tris.CL。
5、 TEMED原溶(rong)液(ye)N，N，N’N’四(si)甲基(ji)乙(yi)二胺催(cui)化過(guo)硫(liu)#銨(an)形成自(zi)由(you)基(ji)而(er)加速兩(liang)種丙稀(xi)酰胺(an)的聚(ju)合(he)。PH太(tai)低時，聚(ju)合(he)反(fan)應受到(dao)抑(yi)制。0%（w/v）過(guo)硫(liu)#胺(an)溶(rong)液(ye)。提(ti)供(gong)兩種丙稀(xi)酰胺(an)聚(ju)合(he)所(suo)必(bi)須(xu)的(de)自(zi)由(you)基(ji)。去(qu)離(li)子水配制數ml，臨(lin)用(yong)前(qian)配制.
Anti-NT-4/NT-5（Neurotrophic factor 4/5）  神經生長因(yin)子4/5抗體
Anti-NTN（Neurturin ）  神經生長因(yin)子抗體
Anti-Nurr  核受(shou)體(ti)相關因(yin)子-抗體
Anti-OAS（2',5'-oligoadenylate synthetase ）  寡(gua)腺(xian)苷酸合(he)成酶-
Anti-Omgp （olyigodendrocyte myelin glycoprotein）  少突(tu)細(xi)胞(bao)髓(sui)磷脂(zhi)糖蛋(dan)白抗體
Anti-OPCML （opioid binding protein/cell adhesion molecule-like）  阿片(pian)樣(yang)物質(zhi)結(jie)合(he)蛋(dan)白/細(xi)胞(bao)粘附(fu)分(fen)子樣(yang)蛋(dan)白抗體
Anti-FGF-8/HBGF-8 （Fibroblast growth factor 8）  成纖維(wei)細(xi)胞(bao)生長因(yin)子-8/纖維(wei)母(mu)細(xi)胞(bao)生長因(yin)子-8抗體
anti-FGF-0（Fibroblast Growth Factor-0）  成纖維(wei)細(xi)胞(bao)生長因(yin)子-0/纖維(wei)母(mu)細(xi)胞(bao)生長因(yin)子-0抗體
Anti-KGFR（kilodalton growth factor receptors）  角(jiao)質(zhi)形成細(xi)胞(bao)生長因(yin)子受(shou)體抗體
Anti-FGFR（Fibroblast Growth Factor Receptor ）  纖維(wei)母(mu)細(xi)胞(bao)生長因(yin)子受(shou)體抗體
Anti-FGFR2（Fibroblast Growth Factor Receptor 2）  成纖維(wei)細(xi)胞(bao)生長因(yin)子受(shou)體2抗體
Anti-FGFR3（Fibroblast Growth Factor Receptor 3）  成纖維(wei)細(xi)胞(bao)生長因(yin)子受(shou)體3抗體
6、 SDS- PAGE加樣(yang)緩沖(chong)液(ye):pH6.8 0.5mol/L Tris緩(huan)沖(chong)液(ye)8ml，甘(gan)油(you)6.4ml，0%SDS 2.8ml，巰基(ji)乙(yi)醇(chun)3.2ml，0.05%溴酚藍(lan).6ml，H2O 32ml混(hun)勻(yun)備(bei)用(yong)。按(an):或(huo):2比例與蛋(dan)白質(zhi)樣(yang)品混(hun)合(he)，在沸(fei)水終(zhong)煮3min混(hun)勻(yun)後(hou)再上樣(yang)，壹般(ban)為(wei)20-25ul，總(zong)蛋(dan)白量(liang)00μg。
7、 Tris-甘氨(an)#電(dian)泳緩沖(chong)液(ye):30.3gTris，88g甘(gan)氨(an)#，0gSDS，用(yong)蒸(zheng)餾水溶(rong)解(jie)至000ml，得(de)0.25mol/L Tris-.92mol/L甘氨(an)#電(dian)極緩沖(chong)液(ye)。臨(lin)用(yong)前(qian)稀(xi)釋0倍。
8、 轉(zhuan)移(yi)緩(huan)沖(chong)液(ye)：配制L轉(zhuan)移(yi)緩(huan)沖(chong)液(ye)，需稱(cheng)取2.9g甘(gan)氨(an)#、5.8gTris堿(jian)、0.37g SDS，並加入200ml甲醇(chun)，加水至總(zong)量(liang)L。
9、 麗春(chun)紅染液(ye)儲(chu)存液(ye)：麗(li)春(chun)紅S 2g 三(san)#乙(yi)#30g 磺基(ji)水楊(yang)# 30g 加水至00ml 用(yong)時上(shang)述儲(chu)存液(ye)稀(xi)釋0倍即成(cheng)麗(li)春(chun)紅S使(shi)用液(ye)。使(shi)用後(hou)應予以廢(fei)棄(qi)。
0、 脫脂(zhi)奶粉5%（w/v）。
、 NaN3 0.02% 疊氮鈉(na)（有(you)毒(du)，戴(dai)手套操(cao)作），溶(rong)於(yu)磷(lin)#緩沖鹽(yan)溶(rong)液(ye)（PBS）。
2、 Tris緩(huan)沖(chong)鹽溶(rong)液(ye)（TBS）:20mmol/LTris/HCl（pH7.5），500mmol/LnaCl。
3、 Tween20（5）鼠(shu)抗人-MMP-9（6）鼠抗人-TIMP-。
4、 過(guo)氧化物酶標記(ji)的(de)第二抗體。
5、 NBT（溶於(yu)70%二甲基(ji)甲(jia)酰胺(an)，75mg/ml）。
6、 BCIP（溶於00%二甲基(ji)甲(jia)酰胺(an)，50mg/ml）。
7、 00mmol/LTris-HCl（pH9.5）。
8、 00mmol/L NaCl。
9、 50mmol/LTris-HCl（pH7.5），5mmol/L EDTA。（可(ke)以參看分(fen)子克(ke)隆）Anti-OAT- （Organic anion transporter ）human 陰(yin)離(li)子轉(zhuan)運蛋(dan)白-（抗人;RC-0607R 抗大、小(xiao)鼠(shu)）
Anti-OAT- （Organic anion transporter ）mouse、rat 陰離(li)子轉(zhuan)運蛋(dan)白-（抗大、小(xiao)鼠(shu)：RC-0606R 抗人）
Anti-OAT-3（Organic anion transporter 3） 陰離(li)子轉(zhuan)運蛋(dan)白-3抗體
Anti-OAT4L/URAT （Urate Transporter ） 尿酸(suan)鹽(yan)重吸收(shou)轉(zhuan)運子抗體
Anti-OCT （organic cat-ion transporter） 陽(yang)離(li)子轉(zhuan)運器(qi)抗體
Anti-OCT2 （organic cat-ion transporter2） B細(xi)胞(bao)特異(yi)性轉(zhuan)錄(lu)因(yin)子抗體
Anti-Oct-4 antibody 胚(pei)胎幹(gan)細(xi)胞(bao)關鍵蛋(dan)白抗體
anti-ODC（Ornithine decarboxylase） 抗脫羧(suo)酶抗體