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Anti-4-3-3 4-3-3 蛋(dan)白抗體抗體選擇(ze)指(zhi)南(nan):
檢(jian)測任何(he)目(mu)的靶蛋(dan)白(bai)都有(you)不(bu)止壹種抗體可供(gong)選(xuan)擇(ze),為(wei)縮(suo)小(xiao)抗體的選擇(ze)範(fan)圍(wei)選(xuan)中(zhong)合適的抗體,需要考慮(lv)如下幾種(zhong)因(yin)素:
. 分析或應(ying)用(yong)的類(lei)型(xing)
2. 樣(yang)本蛋白(bai)的結構(gou)性(xing)質(zhi)
3. 樣(yang)本的種(zhong)屬
4. 抗體宿主(zhu)的種(zhong)類(lei)
5. 抗體的標記和(he)檢(jian)測
Anti-4-3-3 4-3-3 蛋(dan)白抗體 分析試(shi)驗(yan)的應(ying)用類(lei)型(xing)壹般抗體說明書(shu)都列(lie)出(chu)該(gai)抗體經試(shi)驗(yan)驗(yan)證過適用(yong)於(yu)何(he)種(zhong)分析類(lei)型(xing),如:
可以應用於(yu)WB IHC ICC ELASA 分析等,如果(guo)抗體說明書(shu)沒(mei)有提及(ji)的應用類(lei)型(xing),並(bing)不(bu)意味(wei)
著(zhe)該(gai)抗體不適用(yong)於此種(zhong)分析應用(yong)類(lei)型(xing),而僅(jin)是(shi)說明尚(shang)未(wei)經過此種(zhong)分析試(shi)驗(yan)驗(yan)證,如果(guo)抗體不適用(yong)某些分析試(shi)驗(yan),則(ze)會在抗體說明書(shu)上(shang)標註出(chu)來不(bu)適(shi)於(yu)某分析試(shi)驗(yan)。
樣(yang)本蛋白(bai)的結構(gou)性(xing)質(zhi)了(le)解樣本蛋白(bai)的結構(gou)性(xing)質(zhi)有(you)助於選(xuan)擇(ze)zui合(he)適(shi)的(de)抗體,至少(shao)兩方面因素需(xu)要考慮(lv)
()..待測(ce)樣本蛋白(bai)的結構(gou)域(yu):抗體是(shi)由各種(zhong)不同免疫原免疫宿主(zhu)而制備(bei)得來(lai),其中(zhong)的免疫原包(bao)括:
全(quan)長蛋白(bai)、蛋白(bai)片(pian)斷(duan)、多(duo)肽、全有機體(如:細菌)或細(xi)胞,抗體說明書(shu)壹般都有(you)免疫原的描述,如果(guo)打算(suan)檢(jian)測的(de)是(shi)蛋(dan)白片(pian)斷(duan)或(huo)壹種特(te)殊的同型物(wu)或蛋(dan)白全(quan)長的某壹區域(yu),則(ze)必須(xu)選(xuan)擇(ze)用(yong)含(han)此(ci)片(pian)段(duan)域(yu)的(de)免疫原制備(bei)出(chu)的抗體。如果(guo)打算(suan)用FACS 流式(shi)檢(jian)測活(huo)細胞的(de)表(biao)面蛋白,則(ze)需要選擇(ze)含(han)該(gai)表(biao)面蛋白的胞外(wai)域(yu)來(lai)免疫制備(bei)的抗體。
(2)樣(yang)本的提(ti)取或(huo)處(chu)理過程:某些抗體要求樣(yang)本經過某些特(te)殊處理,例如:許(xu)多抗體只識別還原和(he)變性(xing)的、表(biao)位(wei)已(yi)暴(bao)露不受(shou)二(er)級四級結構(gou)阻(zu)礙(ai)的(de)蛋(dan)白(bai)樣(yang)本,另壹方面,某些抗體僅(jin)識別天然(ran)折(zhe)疊(die)狀態的蛋(dan)白。當選擇(ze)免疫組化的(de)抗體時(shi),應(ying)註意某些抗體只識別未(wei)固定的(de)冷(leng)凍(dong)的組(zu)織,而(er)另壹些抗體則(ze)適用於無需抗原修(xiu)復解(jie)交聯(lian)步(bu)聚的(de)甲(jia)醛固定石(shi)蠟包(bao)埋的(de)組(zu)織,這些(xie)都會在抗體說明書(shu)上(shang)應用部分標示(shi)出(chu)來
樣(yang)本的物(wu)種 應(ying)選擇(ze)物(wu)種相(xiang)同或(huo)有交叉(cha)反(fan)應的(de)抗體,抗體可能與(yu)不同(tong)物(wu)種的(de)同種(zhong)靶蛋(dan)白(bai)有交叉(cha)反(fan)應,因(yin)其氨(an)基(ji)酸(suan)序(xu)列同源性較高(gao),如果(guo)樣本的種(zhong)類(lei)未(wei)列入抗體說明書(shu)上(shang)的交叉(cha)反(fan)應種(zhong)屬表(biao)中(zhong),並(bing)不(bu)意味(wei)著(zhe)該(gai)抗體不適用(yong)於檢(jian)測該(gai)物(wu)種的(de)蛋白(bai),而只是(shi)表(biao)示(shi)該(gai)物(wu)種尚(shang)未(wei)用此抗體檢(jian)測驗(yan)證過,應通(tong)過序列(lie)比(bi)對(dui)的方法來(lai)預測交叉(cha)反(fan)應,可應用Expasy 和(he) NCBI BLAST 來(lai)進行(xing)不同(tong)物(wu)種蛋(dan)白同(tong)源性比對(dui)。
壹抗宿主(zhu)物(wu)種的(de)選擇(ze)壹般說來,在(zai)使(shi)用偶聯(lian)二(er)抗結合無偶聯物(wu)的壹抗時(shi),壹抗宿主(zhu)動物(wu)的物(wu)種選(xuan)擇(ze)較為(wei)重(zhong)要,對於(yu)免疫組化而(er)言(yan),盡可能選擇(ze)與(yu)樣本不同(tong)種系(xi)物(wu)種的(de)壹抗,從(cong)而避免二(er)抗與(yu)樣本內源(yuan)性免疫球蛋白(bai)產生(sheng)交叉(cha)反(fan)應,例(li)如:檢(jian)測小(xiao)鼠樣本蛋白(bai),則(ze)不應選擇(ze)小(xiao)鼠或大鼠源的(de)壹抗,選兔源的(de)壹抗,則(ze)二(er)抗則(ze)可選擇(ze)偶(ou)聯(lian)了(le)檢(jian)測分子(酶、熒(ying)光素、等(deng))的(de)抗兔IgG。
如果(guo)選擇(ze)有(you)偶(ou)聯(lian)物(wu)的壹抗則(ze)不適用上(shang)述情況(kuang),除(chu)免疫組化外(wai)的其它對(dui)不含(han)內(nei)源(yuan)性(xing)免疫球蛋白(bai)樣本的檢(jian)測方法,則(ze)抗體宿主(zhu)物(wu)種的(de)影響不(bu)大,如對不(bu)含(han)IgG 的(de)細胞裂解物(wu)樣本的western blotting檢(jian)測,盡管如此,含(han)有(you)血(xue)清(qing)的(de)組織(zhi)裂解物(wu)和(he)組織(zhi)培(pei)養上(shang)清(qing)中(zhong)含(han)有(you)免疫球蛋白(bai),還原變性樣本中(zhong)含(han)IgG,在(zai)western blot 檢(jian)測中(zhong)則(ze)結合出(chu)現IgG 分子50 and 25 kDa 的(de)重鏈和(he)輕鏈(lian)條(tiao)帶(dai)。
二(er)抗的選擇(ze) 二(er)抗應選用與(yu)使用(yong)的壹抗相同的物(wu)種來(lai)源,例(li)如:如果(guo)妳(ni)的(de)壹抗是(shi)小(xiao)鼠的單克隆抗體,二(er)抗則(ze)選抗小(xiao)鼠的二(er)抗anti-mouse secondary。建(jian)議檢(jian)查二(er)抗說明書(shu)確(que)保該(gai)抗體適用於(yu)妳(ni)的(de)檢(jian)測應(ying)用, 二(er)抗壹般連接熒(ying)光素FITC 或(huo)發(fa)光團(tuan)。
雙(shuang)重染色抗體的選擇(ze)用(yong)未(wei)偶聯壹抗進行(xing)細胞培(pei)養物(wu)或組(zu)織切片(pian)的雙(shuang)重免疫染色要求壹抗來源於不(bu)同物(wu)種並(bing)且(qie)二(er)抗分別識別其中(zhong)之(zhi)壹,二(er)抗說明書(shu)應(ying)描述其與(yu)其它物(wu)種來(lai)源的(de)免疫球蛋有(you)否有交叉(cha)吸(xi)附。
羊(yang)抗小(xiao)鼠IgG-RBITC
羊抗小(xiao)鼠IgG-RBITC
羊抗大鼠IgG-FITC
羊抗大鼠IgG-FITC
羊抗大鼠IgG-FITC
羊抗大鼠IgG-RBITC
羊抗大鼠IgG-RBITC
羊抗大鼠IgG-RBITC
羊抗豬IgG-FITC
羊抗豬IgG-FITC
羊抗豬IgG-RBITC
羊抗豬IgG-RBITC
羊抗牛IgG-FITC
羊(yang)抗牛IgG-RBTIC
羊(yang)抗馬IgG-FITC
羊抗馬IgG-RBITC
羊抗雞IgG-FITC
羊(yang)抗雞IgG-RBITC
兔抗猴IgG-FITC
兔抗猴IgG-RBITC
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