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成(cheng)骨特(te)異(yi)性轉(zhuan)錄(lu)因(yin)子(zi)抗體(ti)樣(yang)本的物(wu)種(zhong) 應選擇(ze)物(wu)種相同或(huo)有交(jiao)叉(cha)反(fan)應的抗體(ti),抗體(ti)可能與(yu)不同(tong)物(wu)種(zhong)的同(tong)種(zhong)靶蛋(dan)白(bai)有交(jiao)叉(cha)反(fan)應,因(yin)其(qi)氨基(ji)酸(suan)序列同源(yuan)性(xing)較(jiao)高(gao),如(ru)果樣(yang)本的種(zhong)類(lei)未列入(ru)抗體(ti)說明(ming)書上的交(jiao)叉(cha)反(fan)應種(zhong)屬(shu)表(biao)中(zhong),並不意味著(zhe)該抗體(ti)不適用於檢測該(gai)物(wu)種的蛋(dan)白(bai),而只(zhi)是(shi)表示(shi)該物(wu)種尚未用此抗體(ti)檢測驗證過,應通(tong)過序(xu)列比對的方(fang)法(fa)來預(yu)測交(jiao)叉(cha)反(fan)應,可(ke)應用Expasy 和(he) NCBI BLAST 來進行不同(tong)物(wu)種(zhong)蛋白(bai)同源(yuan)性(xing)比對。
成(cheng)骨特(te)異(yi)性轉(zhuan)錄(lu)因(yin)子(zi)抗體(ti)壹抗宿主物(wu)種(zhong)的選擇(ze)壹(yi)般(ban)說(shuo)來,在(zai)使(shi)用偶聯二抗結合(he)無(wu)偶聯物的壹(yi)抗時,壹(yi)抗宿主動(dong)物(wu)的物(wu)種(zhong)選擇(ze)較(jiao)為(wei)重要(yao),對於(yu)免(mian)疫(yi)組(zu)化而(er)言(yan),盡(jin)可(ke)能選擇(ze)與(yu)樣(yang)本不同(tong)種(zhong)系(xi)物種的壹(yi)抗,從而避(bi)免(mian)二(er)抗與(yu)樣(yang)本內(nei)源(yuan)性(xing)免(mian)疫(yi)球(qiu)蛋白(bai)產生(sheng)交(jiao)叉(cha)反(fan)應,例(li)如:檢測小(xiao)鼠(shu)樣(yang)本蛋(dan)白(bai),則不應選擇(ze)小(xiao)鼠(shu)或(huo)大(da)鼠(shu)源(yuan)的壹(yi)抗,選兔(tu)源(yuan)的壹(yi)抗,則二(er)抗則可(ke)選擇(ze)偶(ou)聯了檢測分(fen)子(zi)(酶、熒光素(su)、等(deng))的抗兔IgG。
如(ru)果選擇(ze)有(you)偶聯物的壹(yi)抗則不適用上述(shu)情況(kuang),除免(mian)疫(yi)組(zu)化外(wai)的其(qi)它(ta)對不含(han)內源(yuan)性(xing)免(mian)疫(yi)球(qiu)蛋白(bai)樣(yang)本的檢測方(fang)法(fa),則抗體(ti)宿主物(wu)種(zhong)的影(ying)響不大(da),如(ru)對不含(han)IgG 的細(xi)胞(bao)裂(lie)解物樣(yang)本的western blotting檢測,盡(jin)管(guan)如(ru)此,含(han)有血(xue)清的組(zu)織(zhi)裂解物和(he)組(zu)織(zhi)培(pei)養上清中(zhong)含(han)有免(mian)疫(yi)球(qiu)蛋白(bai),還原變性樣(yang)本中(zhong)含(han)IgG,在western blot 檢測中(zhong)則結合(he)出(chu)現(xian)IgG 分(fen)子(zi)50 and 25 kDa 的重鏈和(he)輕鏈條(tiao)帶(dai)。
二抗的選擇(ze) 二(er)抗應選用與(yu)使(shi)用的壹(yi)抗相同的物(wu)種(zhong)來源(yuan),例(li)如(ru):如(ru)果妳(ni)的壹(yi)抗是(shi)小鼠(shu)的單克(ke)隆抗體(ti),二抗則選抗小鼠(shu)的二(er)抗anti-mouse secondary。建議(yi)檢查二抗說明(ming)書確保該(gai)抗體(ti)適用於妳(ni)的檢測應用, 二抗壹般(ban)連(lian)接(jie)熒(ying)光素(su)FITC 或(huo)發(fa)光團(tuan)。
上海(hai)谷(gu)研(yan)生(sheng)物(wu)科技(ji)有限(xian)公司(si)特(te)殊(shu)抗體(ti)的保存條(tiao)件:
. 酶聯抗體(ti):永遠(yuan)保存在4 度,避(bi)免(mian)凍起(qi)來。否則會導致酶活(huo)性的下(xia)降(jiang)或者(zhe)喪(sang)失
2. 偶(ou)聯抗體(ti):所有(you)偶聯抗體(ti)都是(shi)在棕(zong)色管(guan)中(zhong)或使(shi)用錫(xi)箔紙(zhi)避(bi)光保存。尤(you)其(qi)是(shi)熒光抗體(ti),對
光極(ji)為(wei)敏感(gan),因此在(zai)所有的實(shi)驗階段也是(shi)要(yao)避(bi)光操作的!
3. IgG3 的同(tong)型(xing)對照:永(yong)遠(yuan)保存在4 度,避(bi)免(mian)凍起(qi)來。因(yin)為(wei)如果出(chu)現(xian)凍融過程(cheng),該(gai)抗體(ti)非(fei)常
容易形成(cheng)多聚(ju)體(ti)無論(lun)是(shi)保存還是(shi)運輸,避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍融!
反(fan)復(fu)凍融會導致抗體(ti)變性,導致多聚(ju)體(ti)形成(cheng),從而降低抗體(ti)的結合(he)能力(li)!
其(qi)它(ta)相關信(xin)息:
EDANS C2 maleimide
EDANS iodoacetamide [5-((((2-Iodoacetyl)amino)ethyl)amino)naphthalene--sulfonic acid]
APTS [8-Aminopyrene-,3,6-trisulfonic acid, trisodium salt]
mBBr [Monobromobimane]
bBBr [Dibromobimane]
Dansyl cadaverine [5-Dimethylaminonaphthalene--(N-(5-aminopentyl))sulfonamide]
Dansyl chloride [5-Dimethylaminonaphthalene--sulfonyl chloride]
Dansyl-X, acid
Dansyl-X, SE [6-((5-dimethylaminonaphthalene--sulfonyl)amino)hexanoic acid, succinimidyl ester]
Fluorescamine
NBD-F [4-Fluoro-7-nitrobenzofurazan]
NBD-Cl [4-Chloro-7-nitrobenzofurazan]
NBD-X [6-(N-(7-nitrobenz-2-oxa-,3-diazol-4-yl)amino)hexanoic acid]
關於(yu)加(jia)入(ru)甘油(you)保存:有些(xie)人會加(jia)50%的甘油(you)到抗體(ti)中來避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍融,甘油(you)在-20 度 會降低冰點(dian)。這(zhe)對很(hen)多(duo)抗體(ti)可能是(shi)可行(xing)的。但是(shi)abcam 僅對非(fei)常小的壹(yi)部分(fen)抗體(ti)檢測過其(qi)在(zai)這(zhe)種(zhong)條(tiao)件下的穩(wen)定性;而(er)abcam 只(zhi)對按照條(tiao)件保存的抗體(ti)提供質(zhi)量(liang)保證!加(jia)入(ru)甘油(you)的溶(rong)液(ye)不建議(yi)在-80 度保存,因為(wei)這已(yi)經(jing)超過了甘油(you)的冰(bing)點(dian)。如果您(nin)要(yao)加(jia)入(ru)甘油(you)來保存抗體(ti)的話(hua),請(qing)謹(jin)慎(shen)註意無菌(jun)操作,避(bi)免(mian)汙(wu)染!
關於(yu)蛋白(bai)保護劑(ji):
蛋白(bai)在高(gao)濃(nong)度時更(geng)不容易降(jiang)解( mg/ml 或者(zhe)更(geng)高(gao)),這(zhe)就(jiu)是(shi)為(wei)什(shen)麽在(zai)抗體(ti)中加(jia)入(ru)BSA 之(zhi)類(lei)作為(wei)穩(wen)定劑(ji)的原因了;另(ling)壹(yi)方(fang)面,加(jia)入(ru)的蛋(dan)白(bai)也可(ke)以(yi)減(jian)少(shao)抗體(ti)由於(yu)管(guan)壁(bi)吸附所(suo)造(zao)成(cheng)的損失。但是(shi)如果抗體(ti)要(yao)用來標記的話(hua),則不能加(jia)入(ru)蛋(dan)白(bai)穩(wen)定劑(ji),因為(wei)這些(xie)穩(wen)定劑(ji)會和(he)抗體(ti)壹起(qi)競爭(zheng)結合(he)標記物。
企(qi)業(ye)信(xin)息
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