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CD0抗體(ti)抗體(ti)選(xuan)擇(ze)指南(nan):
檢(jian)測(ce)任(ren)何目的(de)靶(ba)蛋(dan)白都(dou)有不(bu)止壹(yi)種(zhong)抗體(ti)可(ke)供選(xuan)擇(ze),為縮小(xiao)抗體(ti)的(de)選(xuan)擇(ze)範(fan)圍選(xuan)中合(he)適(shi)的(de)抗體(ti),需要考慮如(ru)下幾(ji)種(zhong)因(yin)素(su):
. 分(fen)析或(huo)應用的(de)類(lei)型(xing)
2. 樣(yang)本(ben)蛋(dan)白的(de)結(jie)構性質(zhi)
3. 樣(yang)本(ben)的(de)種(zhong)屬
4. 抗體(ti)宿(xiu)主(zhu)的(de)種(zhong)類
5. 抗體(ti)的(de)標(biao)記(ji)和(he)檢(jian)測(ce)
CD0抗體(ti)分(fen)析試驗(yan)的(de)應(ying)用類型(xing)壹(yi)般抗體(ti)說明書(shu)都(dou)列出(chu)該(gai)抗體(ti)經(jing)試驗(yan)驗(yan)證過(guo)適(shi)用於何(he)種(zhong)分析類型(xing),如(ru):
可(ke)以應用於WB IHC ICC ELASA 分(fen)析等,如(ru)果(guo)抗體(ti)說明書(shu)沒有提(ti)及的(de)應(ying)用類型(xing),並(bing)不(bu)意味(wei)
著該(gai)抗體(ti)不(bu)適(shi)用於此種(zhong)分析應用類型(xing),而僅是說明尚(shang)未經(jing)過(guo)此種(zhong)分析試驗(yan)驗(yan)證,如(ru)果(guo)抗體(ti)不(bu)適(shi)用某(mou)些分析試驗(yan),則(ze)會(hui)在抗體(ti)說明書(shu)上(shang)標註(zhu)出(chu)來(lai)不(bu)適(shi)於(yu)某(mou)分析試驗(yan)。
樣(yang)本(ben)蛋(dan)白的(de)結(jie)構性質(zhi)了解樣(yang)本(ben)蛋(dan)白的(de)結(jie)構性質(zhi)有助(zhu)於選(xuan)擇(ze)zui合適(shi)的(de)抗體(ti),至(zhi)少兩(liang)方(fang)面(mian)因(yin)素(su)需要考慮
()..待(dai)測(ce)樣(yang)本(ben)蛋(dan)白的(de)結(jie)構域:抗體(ti)是由各(ge)種(zhong)不(bu)同(tong)免疫(yi)原(yuan)免疫(yi)宿(xiu)主(zhu)而制備(bei)得來(lai),其(qi)中(zhong)的(de)免疫(yi)原(yuan)包括(kuo):
全長蛋(dan)白、蛋(dan)白片(pian)斷、多(duo)肽、全有機(ji)體(ti)(如(ru):細菌)或(huo)細胞,抗體(ti)說明書(shu)壹般都(dou)有免疫(yi)原(yuan)的(de)描述(shu),如(ru)果(guo)打算(suan)檢(jian)測(ce)的(de)是蛋(dan)白片(pian)斷或(huo)壹種(zhong)特殊的(de)同(tong)型(xing)物或(huo)蛋(dan)白全長的(de)某(mou)壹區(qu)域,則(ze)必須(xu)選(xuan)擇(ze)用含此片(pian)段(duan)域的(de)免疫(yi)原(yuan)制備(bei)出(chu)的(de)抗體(ti)。如(ru)果(guo)打算(suan)用FACS 流(liu)式(shi)檢(jian)測(ce)活細胞的(de)表(biao)面(mian)蛋(dan)白,則需要選(xuan)擇(ze)含該(gai)表(biao)面(mian)蛋(dan)白的(de)胞外域來(lai)免疫(yi)制備(bei)的(de)抗體(ti)。
(2)樣(yang)本(ben)的(de)提(ti)取或(huo)處理(li)過(guo)程(cheng):某(mou)些抗體(ti)要(yao)求樣(yang)本(ben)經(jing)過(guo)某(mou)些特殊處(chu)理,例如(ru):許多(duo)抗體(ti)只識別(bie)還原(yuan)和(he)變性的(de)、表(biao)位已(yi)暴露(lu)不(bu)受二(er)級四級結(jie)構阻礙的(de)蛋(dan)白樣(yang)本(ben),另(ling)壹(yi)方(fang)面(mian),某(mou)些抗體(ti)僅識別(bie)天然(ran)折疊狀態(tai)的(de)蛋(dan)白。當選(xuan)擇(ze)免疫(yi)組(zu)化(hua)的(de)抗體(ti)時(shi),應註(zhu)意某(mou)些抗體(ti)只識別(bie)未固(gu)定的(de)冷(leng)凍(dong)的(de)組(zu)織(zhi),而另(ling)壹(yi)些(xie)抗體(ti)則(ze)適(shi)用於無需抗原(yuan)修(xiu)復解(jie)交聯步聚(ju)的(de)甲(jia)醛固(gu)定石(shi)蠟(la)包埋(mai)的(de)組(zu)織(zhi),這(zhe)些都(dou)會(hui)在抗體(ti)說明書(shu)上(shang)應用部分(fen)標示出(chu)來(lai)
樣(yang)本(ben)的(de)物種(zhong) 應(ying)選(xuan)擇(ze)物種(zhong)相同(tong)或(huo)有交叉(cha)反應(ying)的(de)抗體(ti),抗體(ti)可(ke)能與不(bu)同(tong)物種(zhong)的(de)同(tong)種(zhong)靶蛋(dan)白有交叉(cha)反應(ying),因(yin)其(qi)氨(an)基(ji)酸序(xu)列同(tong)源(yuan)性較高(gao),如(ru)果(guo)樣(yang)本(ben)的(de)種(zhong)類未(wei)列入抗體(ti)說明書(shu)上(shang)的(de)交叉(cha)反應(ying)種(zhong)屬表(biao)中,並(bing)不(bu)意味(wei)著該(gai)抗體(ti)不(bu)適(shi)用於檢(jian)測(ce)該(gai)物種(zhong)的(de)蛋(dan)白,而只是表(biao)示該(gai)物種(zhong)尚未(wei)用此抗體(ti)檢(jian)測(ce)驗(yan)證過(guo),應(ying)通過(guo)序(xu)列比對的(de)方(fang)法(fa)來(lai)預(yu)測(ce)交叉(cha)反應(ying),可應(ying)用Expasy 和(he) NCBI BLAST 來(lai)進行(xing)不(bu)同(tong)物種(zhong)蛋(dan)白同(tong)源(yuan)性比(bi)對。
壹(yi)抗宿(xiu)主(zhu)物種(zhong)的(de)選(xuan)擇(ze)壹(yi)般說來(lai),在使(shi)用偶聯(lian)二(er)抗結(jie)合無偶聯物的(de)壹(yi)抗時,壹抗宿(xiu)主(zhu)動物的(de)物種(zhong)選(xuan)擇(ze)較為(wei)重(zhong)要(yao),對於免疫(yi)組(zu)化(hua)而言,盡(jin)可(ke)能(neng)選(xuan)擇(ze)與樣(yang)本(ben)不(bu)同(tong)種(zhong)系(xi)物種(zhong)的(de)壹(yi)抗,從(cong)而避免二(er)抗與樣(yang)本(ben)內(nei)源(yuan)性免疫(yi)球蛋(dan)白產(chan)生(sheng)交叉(cha)反應(ying),例如(ru):檢(jian)測(ce)小(xiao)鼠樣(yang)本(ben)蛋(dan)白,則不(bu)應選(xuan)擇(ze)小鼠或(huo)大鼠源的(de)壹(yi)抗,選(xuan)兔(tu)源(yuan)的(de)壹(yi)抗,則二抗則可選(xuan)擇(ze)偶聯(lian)了檢(jian)測(ce)分(fen)子(zi)(酶(mei)、熒(ying)光(guang)素(su)、等)的(de)抗兔(tu)IgG。
如(ru)果(guo)選(xuan)擇(ze)有偶(ou)聯物的(de)壹(yi)抗則不(bu)適(shi)用上(shang)述情況,除(chu)免疫(yi)組(zu)化(hua)外的(de)其(qi)它(ta)對不(bu)含內(nei)源(yuan)性免疫(yi)球蛋(dan)白樣(yang)本(ben)的(de)檢(jian)測(ce)方(fang)法(fa),則(ze)抗體(ti)宿(xiu)主(zhu)物種(zhong)的(de)影(ying)響(xiang)不(bu)大,如(ru)對不(bu)含IgG 的(de)細胞裂解物樣(yang)本(ben)的(de)western blotting檢(jian)測(ce),盡(jin)管(guan)如(ru)此,含有血(xue)清的(de)組(zu)織(zhi)裂解物和組(zu)織(zhi)培養(yang)上(shang)清中(zhong)含有免疫(yi)球蛋(dan)白,還原(yuan)變(bian)性樣(yang)本(ben)中(zhong)含IgG,在western blot 檢(jian)測(ce)中(zhong)則(ze)結(jie)合出(chu)現(xian)IgG 分(fen)子(zi)50 and 25 kDa 的(de)重(zhong)鏈(lian)和(he)輕(qing)鏈(lian)條(tiao)帶(dai)。
二(er)抗的(de)選(xuan)擇(ze) 二(er)抗應選(xuan)用與使(shi)用的(de)壹(yi)抗相同(tong)的(de)物種(zhong)來(lai)源,例如(ru):如(ru)果(guo)妳的(de)壹(yi)抗是小鼠的(de)單(dan)克(ke)隆抗體(ti),二(er)抗則選(xuan)抗小鼠的(de)二(er)抗anti-mouse secondary。建(jian)議檢(jian)查(zha)二(er)抗說明書(shu)確(que)保該(gai)抗體(ti)適(shi)用於妳(ni)的(de)檢(jian)測(ce)應(ying)用, 二抗壹般連(lian)接(jie)熒光(guang)素(su)FITC 或(huo)發(fa)光(guang)團。
雙重染色(se)抗體(ti)的(de)選(xuan)擇(ze)用未偶(ou)聯(lian)壹抗進行細胞培養(yang)物或(huo)組織(zhi)切片(pian)的(de)雙重免疫(yi)染(ran)色(se)要(yao)求(qiu)壹(yi)抗來(lai)源於(yu)不(bu)同(tong)物種(zhong)並且二抗分別(bie)識別(bie)其(qi)中(zhong)之(zhi)壹(yi),二(er)抗說明書(shu)應描述(shu)其(qi)與(yu)其(qi)它(ta)物種(zhong)來(lai)源的(de)免疫(yi)球蛋(dan)有否(fou)有交叉(cha)吸(xi)附(fu)。
FMOC-Glu(5/6-TAMRA)-OH
FMOC-Glu(5-TAMRA)-OH
FMOC-Lys(DABCYL)-OH
FMOC-Lys(DABCYL)-OH
FMOC-Lys(5/6-FAM)-OH
FMOC-Lys(5-FAM)-OH
FMOC-Lys(5/6-TAMRA)-OH
FMOC-Lys(5-TAMRA)-OH
FMOC-Lys(Tide Fluor™ 2)-OH
FMOC-Lys(Tide Quencher™ 2)-OH
BOC-Statine [Boc-Sta(3S,4S)-OH]
BOC-Statine [Boc-Sta(3S,4S)-OH]
FMOC-Statine [Boc-Sta(3S,4S)-OH]
FMOC-Statine [Boc-Sta(3S,4S)-OH]
Statine
Stain-All
Amplite™ ADHP [0-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine]
ReadiUse™ hydrogen peroxide tablet
企業(ye)信息(xi)
ENTERPRISE INFORMATION上(shang)海谷(gu)研實業(ye)有限(xian)公司(si)
3004918891發(fa)送信件(jian)產(chan)品(pin)分(fen)類(lei)
CLASSIFICATION相(xiang)關(guan)文(wen)章
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