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轉(zhuan)錄(lu)因子E2F-抗(kang)體樣(yang)本(ben)的物種 應選擇(ze)物種相(xiang)同或有交叉反(fan)應(ying)的抗體,抗(kang)體可(ke)能與不(bu)同物(wu)種的同種靶(ba)蛋(dan)白有(you)交叉反(fan)應(ying),因(yin)其(qi)氨(an)基(ji)酸(suan)序(xu)列同源性較(jiao)高(gao),如(ru)果(guo)樣(yang)本(ben)的種類未列入抗體說(shuo)明(ming)書(shu)上的交叉反(fan)應(ying)種屬表(biao)中,並(bing)不(bu)意味(wei)著該(gai)抗(kang)體不(bu)適用(yong)於(yu)檢(jian)測(ce)該(gai)物種的蛋(dan)白,而(er)只是表示(shi)該(gai)物(wu)種尚未用此(ci)抗(kang)體檢(jian)測(ce)驗(yan)證過,應通過序(xu)列比對(dui)的方(fang)法來預(yu)測(ce)交叉反(fan)應(ying),可(ke)應用Expasy 和(he) NCBI BLAST 來進(jin)行不同(tong)物(wu)種蛋(dan)白同(tong)源性(xing)比對(dui)。
轉(zhuan)錄(lu)因子E2F-抗(kang)體壹抗(kang)宿(xiu)主物(wu)種的選擇(ze)壹般(ban)說(shuo)來,在使用偶聯(lian)二抗(kang)結合無偶聯(lian)物(wu)的壹抗(kang)時,壹抗(kang)宿(xiu)主動(dong)物的物種選擇(ze)較為(wei)重(zhong)要,對(dui)於(yu)免(mian)疫組化而(er)言,盡(jin)可(ke)能選擇(ze)與樣(yang)本(ben)不(bu)同種系物種的壹抗(kang),從(cong)而(er)避免二抗(kang)與(yu)樣(yang)本(ben)內(nei)源性免疫(yi)球蛋(dan)白產(chan)生交叉反(fan)應(ying),例如(ru):檢(jian)測(ce)小(xiao)鼠樣(yang)本(ben)蛋(dan)白,則不應(ying)選擇(ze)小(xiao)鼠或(huo)大(da)鼠(shu)源(yuan)的壹抗(kang),選兔源(yuan)的壹抗(kang),則二抗(kang)則可(ke)選擇(ze)偶聯(lian)了(le)檢(jian)測(ce)分(fen)子(酶、熒光素、等)的抗兔IgG。
如(ru)果(guo)選擇(ze)有偶聯(lian)物(wu)的壹抗(kang)則不適(shi)用上述(shu)情況(kuang),除(chu)免疫(yi)組化外(wai)的其(qi)它(ta)對(dui)不含(han)內(nei)源(yuan)性(xing)免(mian)疫球蛋(dan)白樣(yang)本(ben)的檢(jian)測(ce)方(fang)法,則抗體宿(xiu)主物(wu)種的影響不大(da),如(ru)對(dui)不含(han)IgG 的細胞裂(lie)解物(wu)樣(yang)本(ben)的western blotting檢(jian)測(ce),盡(jin)管如(ru)此(ci),含(han)有(you)血(xue)清的組織裂(lie)解物(wu)和組織培(pei)養上清中含(han)有(you)免(mian)疫(yi)球蛋(dan)白,還原(yuan)變(bian)性(xing)樣(yang)本(ben)中(zhong)含(han)IgG,在(zai)western blot 檢(jian)測(ce)中(zhong)則結合出現IgG 分(fen)子50 and 25 kDa 的重(zhong)鏈(lian)和輕鏈條帶(dai)。
二抗(kang)的選擇(ze) 二抗(kang)應(ying)選用(yong)與(yu)使用的壹抗(kang)相(xiang)同的物種來源,例如(ru):如(ru)果(guo)妳的壹抗(kang)是小(xiao)鼠的單克(ke)隆(long)抗(kang)體,二抗(kang)則選抗(kang)小(xiao)鼠的二抗(kang)anti-mouse secondary。建(jian)議(yi)檢(jian)查(zha)二抗(kang)說(shuo)明(ming)書(shu)確(que)保(bao)該(gai)抗(kang)體適(shi)用於(yu)妳的檢(jian)測(ce)應(ying)用, 二抗(kang)壹般(ban)連(lian)接熒光素FITC 或發(fa)光團。
上海谷(gu)研生物科(ke)技有(you)限(xian)公(gong)司(si)特殊抗體的保存條件:
. 酶聯(lian)抗(kang)體:永(yong)遠保存(cun)在4 度(du),避免凍(dong)起來。否則會(hui)導致(zhi)酶活性的下降或者喪(sang)失
2. 偶聯(lian)抗(kang)體:所有(you)偶聯(lian)抗(kang)體都(dou)是在棕色(se)管(guan)中(zhong)或使用錫(xi)箔紙(zhi)避光保存。尤其(qi)是熒光抗體,對(dui)
光極為(wei)敏(min)感,因(yin)此(ci)在(zai)所有(you)的實驗階(jie)段也是要避光操作的!
3. IgG3 的同型對(dui)照:永(yong)遠保存(cun)在4 度(du),避免凍(dong)起來。因為(wei)如(ru)果(guo)出現凍(dong)融過程,該(gai)抗(kang)體非(fei)常(chang)
容(rong)易(yi)形成多(duo)聚體無論(lun)是保存還是運輸,避免反(fan)復(fu)凍(dong)融!
反(fan)復(fu)凍(dong)融會(hui)導致(zhi)抗體變(bian)性(xing),導致(zhi)多聚體形(xing)成,從(cong)而(er)降低(di)抗(kang)體的結合能力!
其(qi)它(ta)相(xiang)關信(xin)息:
Agar 瓊(qiong)脂(zhi)粉(fen)
Agar A 瓊(qiong)脂(zhi)A
Agar A 瓊脂(zhi)A
Agar D (Purified Agar) 純化瓊(qiong)脂(zhi)
Agar D (Purified Agar) 純化瓊(qiong)脂(zhi)
Casamino Acid 酪蛋(dan)氨(an)基(ji)酸(suan)(酪蛋(dan)白水(shui)解物(wu))
Casamino Acid 酪蛋(dan)氨(an)基(ji)酸(suan)(酪蛋(dan)白水(shui)解物(wu))
Casamino Acid 酪蛋(dan)氨(an)基(ji)酸(suan)(酪蛋(dan)白水(shui)解物(wu))
Casamino Acid 酪蛋(dan)氨(an)基(ji)酸(suan)(酪蛋(dan)白水(shui)解物(wu))
Malt Extract 麥(mai)芽浸(jin)膏
Malt Extract 麥(mai)芽浸(jin)膏
Tryptone 胰(yi)蛋(dan)白腖(dong)
Yeast Extract 酵(jiao)母浸(jin)膏
Yeast Extract 酵(jiao)母提取(qu)物
Yeast Nitrogen Base, without Amino Acids 培(pei)養基(ji)
HYLB-Capsules 培(pei)養基(ji)
Peptone 40 (Soytone) 蛋(dan)白腖(dong)-40
Peptone 40 (Soytone) 蛋(dan)白腖(dong)-40
關於(yu)加(jia)入甘(gan)油保(bao)存(cun):有些(xie)人會(hui)加50%的甘油到抗體中(zhong)來避免反(fan)復(fu)凍(dong)融,甘油(you)在(zai)-20 度(du) 會(hui)降低(di)冰(bing)點。這(zhe)對(dui)很多抗體可(ke)能是可(ke)行的。但是abcam 僅對(dui)非(fei)常(chang)小(xiao)的壹部(bu)分(fen)抗體檢(jian)測(ce)過其(qi)在這(zhe)種條件下的穩(wen)定性;而(er)abcam 只對(dui)按照條件保(bao)存(cun)的抗體提供(gong)質量(liang)保(bao)證(zheng)!加入甘(gan)油的溶液不建(jian)議(yi)在-80 度(du)保(bao)存(cun),因(yin)為(wei)這已經(jing)超過了甘油的冰點。如(ru)果(guo)您要加(jia)入(ru)甘油(you)來保存(cun)抗(kang)體的話(hua),請(qing)謹(jin)慎(shen)註(zhu)意無菌(jun)操作,避免汙染(ran)!
關於(yu)蛋(dan)白保(bao)護劑:
蛋(dan)白在(zai)高濃(nong)度(du)時更(geng)不容(rong)易(yi)降解( mg/ml 或(huo)者更(geng)高),這(zhe)就(jiu)是為什麽(me)在(zai)抗(kang)體中(zhong)加入(ru)BSA 之(zhi)類作為(wei)穩(wen)定劑的原(yuan)因了(le);另(ling)壹方(fang)面,加入(ru)的蛋(dan)白也可(ke)以減少抗體由(you)於(yu)管(guan)壁吸(xi)附(fu)所造(zao)成的損(sun)失。但是如(ru)果(guo)抗體要用(yong)來標記的話(hua),則不能加入(ru)蛋(dan)白穩(wen)定劑,因為這些(xie)穩(wen)定劑會(hui)和抗(kang)體壹起(qi)競爭結合標記物。
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