【概(gai)要(yao)描(miao)述】人(ren)食(shi)管(guan)平(ping)滑肌(ji)細胞(bao)公司正(zheng)在(zai)出(chu)售(shou)的產品(pin)：TCCSUP人(ren)膀胱癌(ai)細(xi)胞(bao)小鼠(shu)黑色(se)瘤細胞(bao)B16（種(zhong)屬(shu)鑒(jian)定）人(ren)支氣管(guan)上皮樣細(xi)胞(bao) 16HBE HBE135-E6E7(STR鑒(jian)定正(zheng)確(que))人(ren)肝癌細(xi)胞(bao)BEL-7402 (STR鑒(jian)定正(zheng)確(que))人(ren)逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)病毒包(bao)裝(zhuang)細(xi)胞(bao)系(xi)Phoenix-ECO (STR鑒(jian)定正(zheng)確(que))小鼠(shu)乳腺(xian)癌(ai)細(xi)胞(bao)4T1（種(zhong)屬(shu)鑒(jian)定）人(ren)乳(ru)腺(xian)癌(ai)細(xi)胞(bao)MDA-MB-175 VII(STR鑒(jian)定正(zheng)確(que))人(ren)皮膚(fu)黑色(se)瘤(liu)細(xi)胞(bao)SK-MEL-1(S

本(ben)公司所有(you)產品(pin)僅(jin)供(gong)科學實(shi)驗，不做(zuo)其(qi)他科學實(shi)驗外的使(shi)用(yong)！

人(ren)食(shi)管(guan)平(ping)滑肌(ji)分離(li)自(zi)食(shi)管(guan)組織(zhi)；食(shi)管(guan)可分為(wei)頸(jing)段(duan)、胸(xiong)段(duan)和(he)腹段(duan)，脊(ji)椎(zhui)動物(wu)食(shi)管(guan)的頸(jing)段(duan)位(wei)於氣管(guan)背(bei)後(hou)和(he)脊(ji)柱(zhu)前(qian)端(duan)，胸(xiong)段(duan)位(wei)於左、右(you)肺(fei)之(zhi)間(jian)的縱膈內(nei)，胸(xiong)段(duan)通(tong)過膈孔(kong)與腹腔(qiang)內(nei)腹相(xiang)連(lian)，腹段(duan)很短(duan)與胃相(xiang)連(lian)。哺乳動物(wu)的食(shi)管(guan)結構(gou)上由內(nei)向外分四層：黏膜(mo)層、黏膜(mo)下(xia)層、肌(ji)層和(he)外膜(mo)。其(qi)中，肌(ji)層上1/3段(duan)為(wei)骨骼(ge)肌(ji)，下(xia)1/3為(wei)平(ping)滑肌(ji)，中段(duan)為(wei)骨骼(ge)肌(ji)和平(ping)滑肌(ji)混合(he)組(zu)成。其(qi)中，肌(ji)纖維(wei)的排(pai)列方式分(fen)為(wei)內環形(xing)和(he)外縱形(xing)兩層。食(shi)管(guan)的蠕(ru)動是由食(shi)管(guan)平(ping)滑肌(ji)收縮(suo)嚴格(ge)控制，食(shi)管(guan)還有(you)括(kuo)約(yue)肌(ji)，位(wei)於環狀軟骨(gu)水(shui)平(ping)的，稱為(wei)食(shi)管(guan)上括約(yue)肌(ji)；位(wei)於食(shi)管(guan)下(xia)端(duan)，壹部(bu)分在(zai)膈上，穿過膈孔(kong)，另(ling)壹部(bu)分在(zai)膈下(xia)的高壓(ya)帶(dai)，稱為(wei)食(shi)管(guan)下(xia)括(kuo)約肌(ji)。食(shi)管(guan)平(ping)滑肌(ji)細胞(bao)原(yuan)代(dai)分離(li)培(pei)養3天(tian)後(hou)，可見細(xi)胞(bao)貼(tie)壁(bi)伸(shen)展，細胞(bao)形(xing)態(tai)大小不壹(yi)，呈(cheng)梭形(xing)、不規則形(xing)、三角(jiao)形(xing)或(huo)扇形(xing)，核(he)卵(luan)圓(yuan)形(xing)、居(ju)中(zhong)；2周(zhou)後(hou)細(xi)胞(bao)匯(hui)合，多(duo)數(shu)細胞(bao)伸(shen)展(zhan)呈(cheng)長梭(suo)形(xing)，胞(bao)漿(jiang)豐(feng)富(fu)，有分(fen)枝狀突起(qi)，細胞(bao)平(ping)行(xing)排(pai)列成單層或(huo)部分(fen)區域(yu)多層重疊生(sheng)長(chang)，高低(di)起(qi)伏(fu)；細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)低(di)時(shi)，常交織(zhi)成(cheng)網狀；密度(du)高時(shi)，則排(pai)列為(wei)旋渦狀或(huo)柵(zha)欄(lan)狀。傳代(dai)後(hou)細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)較(jiao)快，4-6天(tian)即(ji)可匯(hui)合，並(bing)保持上述形(xing)態(tai)學特征和生(sheng)長(chang)特點(dian)。
方法簡(jian)介(jie)：

公司實驗(yan)室(shi)分(fen)離(li)的人食(shi)管(guan)平(ping)滑肌(ji)采(cai)用(yong)yi蛋(dan)白酶-膠原(yuan)酶聯合消化法結(jie)合差(cha)速(su)貼(tie)壁法(fa)制備而(er)來(lai)，細胞(bao)總量(liang)約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶。
質(zhi)量(liang)檢(jian)測(ce)：

公司實驗(yan)室(shi)分(fen)離(li)的人食(shi)管(guan)平(ping)滑肌(ji)經(jing)α-SMA免(mian)疫(yi)熒(ying)光(guang)鑒(jian)定，純(chun)度可達90%以上，且不含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體(ti)、細菌(jun)、酵(jiao)母(mu)和(he)真菌(jun)等。

培(pei)養基 含(han)FBS、生(sheng)長(chang)添(tian)加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等

換液(ye)頻率(lv) 每2-3天(tian)換液(ye)壹次(ci)

生(sheng)長(chang)特性(xing) 貼(tie)壁

細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai) 成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞(bao)樣

傳(chuan)代(dai)特性(xing) 可傳5代(dai)左右(you)；3代(dai)以內狀態

消(xiao)化液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白酶

培(pei)養條(tiao)件 氣相(xiang)：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備工(gong)作(zuo)

1. 實(shi)驗器材(cai)準(zhun)備：準備無菌(jun)的培(pei)養皿(min)、培(pei)養瓶(ping)、移液(ye)管(guan)、離(li)心(xin)管(guan)、手術(shu)器械(xie)等，並進行(xing)高壓(ya)滅菌(jun)或(huo)其他(ta)合適(shi)的消毒處(chu)理(li)。

2. 試(shi)劑準(zhun)備：配(pei)制(zhi)或(huo)購買(mai)合適(shi)的培(pei)養基、消化(hua)酶（如(ru)、膠(jiao)原(yuan)酶等）、胎牛(niu)血(xue)清(qing)、雙(shuang)抗(kang)等試劑，確(que)保其(qi)無(wu)菌(jun)且(qie)在(zai)有(you)效(xiao)期(qi)內。

3. 實(shi)驗動物(wu)或(huo)組織(zhi)來(lai)源準備：根據實驗(yan)需(xu)求，選(xuan)擇(ze)合(he)適(shi)的動物(wu)並(bing)進(jin)行(xing)相(xiang)應(ying)的麻(ma)醉或(huo)處(chu)死(si)，獲(huo)取所需(xu)組織(zhi)；或(huo)從已(yi)有的組織(zhi)樣本(ben)庫(ku)中(zhong)獲(huo)取組織。

取材與處(chu)理(li)

1. 取材：在(zai)無(wu)菌(jun)條(tiao)件(jian)下(xia)，迅(xun)速取出目標組(zu)織(zhi)，盡(jin)量(liang)減(jian)少(shao)對組織(zhi)的損傷(shang)，並去(qu)除多余的脂肪(fang)、結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)等非(fei)目的組織(zhi)。

2. 清(qing)洗(xi)：將取出的組織(zhi)用(yong)預(yu)冷(leng)的無菌(jun)PBS沖(chong)洗(xi)數(shu)次(ci)，以去(qu)除血(xue)液(ye)和雜(za)質。

3. 剪(jian)切：將組(zu)織(zhi)剪(jian)成約1 - 2mm³的小塊(kuai)，以便後(hou)續(xu)消(xiao)化(hua)。

細(xi)胞(bao)分(fen)離(li)

1. 消(xiao)化：將剪(jian)碎(sui)的組織(zhi)塊(kuai)放入含有適(shi)量(liang)消(xiao)化酶的離(li)心(xin)管(guan)中，在(zai)37℃恒溫(wen)搖(yao)床或(huo)培(pei)養箱中消化(hua)壹(yi)段(duan)時(shi)間。期(qi)間(jian)可輕輕(qing)搖晃離(li)心(xin)管(guan)，使(shi)消化(hua)更均(jun)勻。

2. 終(zhong)止消化(hua)：當(dang)組織塊(kuai)大部分被消化成(cheng)單細胞(bao)懸液(ye)或(huo)小細胞(bao)團(tuan)時(shi)，加(jia)入含(han)血(xue)清(qing)的培(pei)養基終(zhong)止消化(hua)。

3. 過濾與離(li)心(xin)：用(yong)細(xi)胞(bao)篩過濾細胞(bao)懸液(ye)，去(qu)除未消化的組織(zhi)碎(sui)片(pian)，然後(hou)將濾液(ye)以適(shi)當(dang)的轉速(su)離(li)心(xin)，收(shou)集細胞(bao)沈(chen)澱。

細(xi)胞(bao)觀察與檢(jian)測(ce)

1. 日(ri)常觀察：每天(tian)用(yong)倒(dao)置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)觀察細(xi)胞(bao)的形(xing)態(tai)、生(sheng)長(chang)狀態、密(mi)度(du)等，記(ji)錄細(xi)胞(bao)的變化(hua)情(qing)況，如(ru)發現(xian)細胞(bao)汙(wu)染或(huo)異常，及時(shi)采(cai)取相(xiang)應(ying)措施。
2. 細胞(bao)計(ji)數(shu)與活(huo)力檢(jian)測(ce)：在(zai)需(xu)要(yao)時(shi)，可采(cai)用(yong)臺(tai)盼(pan)藍染色等方法對(dui)細胞(bao)進(jin)行(xing)計(ji)數(shu)和活(huo)力檢(jian)測(ce)，以了(le)解(jie)細(xi)胞(bao)的生(sheng)長(chang)情(qing)況(kuang)和(he)健(jian)康狀態。

壹(yi)、取材與分離(li)

1. 快速(su)操作(zuo)

- 組(zu)織取材後(hou)需(xu)立即(ji)處(chu)理(li)，避免(mian)長(chang)時(shi)間暴(bao)露(lu)於(yu)室(shi)溫(wen)或(huo)非(fei)營養環境(jing)。

- 使(shi)用(yong)無(wu)菌(jun) PBS 或(huo)生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)沖(chong)洗(xi)組(zu)織(zhi)，去(qu)除血(xue)液(ye)、雜質(zhi)。

2. 消(xiao)化酶選擇(ze)

- 根(gen)據組織(zhi)類型(xing)選(xuan)擇(ze)消(xiao)化(hua)酶，避免(mian)過度消(xiao)化導(dao)致細胞(bao)損(sun)傷(shang)。

- 消(xiao)化時(shi)間需(xu)嚴格(ge)控制（通(tong)常 10-30 分鐘(zhong)），可通過顯微(wei)鏡(jing)觀察細(xi)胞(bao)解(jie)離(li)狀態。

二(er)、培(pei)養條(tiao)件優(you)化(hua)

1. 培(pei)養基選擇(ze)

- 使(shi)用(yong)含(han)血(xue)清(qing)或(huo)特定生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)的培(pei)養基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部分細胞(bao)需(xu)添加(jia)胰(yi)島(dao)素(su)、EGF 等。

- 避(bi)免(mian)頻(pin)繁更換培(pei)養基品牌(pai)或(huo)批次，減(jian)少(shao)細胞(bao)適(shi)應(ying)壓力(li)。

2. 貼(tie)壁與傳代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細胞(bao)貼(tie)壁(bi)能(neng)力較(jiao)弱(ruo)，可能需(xu)要(yao)包被培(pei)養皿(min)（如(ru)膠(jiao)原(yuan)蛋(dan)白、多聚賴氨(an)酸）。

- 傳(chuan)代(dai)時(shi)密度(du)建(jian)議(yi)控制在(zai) 70%-80%，過度匯(hui)合會(hui)導(dao)致接(jie)觸抑(yi)制(zhi)和分(fen)化。

三、汙(wu)染控制

1. 無(wu)菌(jun)操作(zuo)

- 全程(cheng)在(zai)超凈臺(tai)操作(zuo)，使(shi)用(yong)壹(yi)次(ci)性(xing)耗材，避免(mian)交叉汙(wu)染。

- 培(pei)養基中可添加(jia)雙抗(kang)，但長(chang)期使(shi)用(yong)可能影(ying)響(xiang)細(xi)胞(bao)活(huo)性(xing)。

2. 支原(yuan)體(ti)檢(jian)測(ce)

- 定(ding)期檢(jian)測(ce)支原(yuan)體(ti)汙染（如(ru) PCR 法(fa)），汙(wu)染後(hou)需(xu)及時(shi)丟(diu)棄(qi)細胞(bao)。

四(si)、狀態監(jian)控

1. 日(ri)常觀察

- 每天(tian)檢(jian)查(zha)細胞(bao)形(xing)態(tai)、密(mi)度(du)及培(pei)養基顏色，及(ji)時(shi)更換培(pei)養基（通常每 2-3 天(tian)換液(ye)壹次(ci)）。

- 異(yi)常形(xing)態(tai)（如(ru)細(xi)胞(bao)變(bian)圓(yuan)、碎(sui)片(pian)增(zeng)多）可能提(ti)示汙(wu)染或(huo)營養不足。

2. 傳(chuan)代(dai)與凍存(cun)

- 原(yuan)代(dai)細胞(bao)分(fen)裂(lie)次(ci)數有限（壹般(ban) 5-10 代(dai)），需(xu)及時(shi)凍存(cun)早期(qi)代(dai)次細(xi)胞(bao)。

- 凍存(cun)液(ye)建(jian)議(yi)使(shi)用(yong) DMSO+血(xue)清(qing)（或(huo)專用(yong)凍存(cun)培(pei)養基），梯(ti)度(du)降溫(wen)後(hou)液(ye)氮保存(cun)。