【概(gai)要描(miao)述(shu)】大鼠(shu)脂肪(fang)幹(gan)細胞(bao)公司正在(zai)出(chu)售(shou)的(de)產(chan)品(pin)：NCI-H727 [H727]肺支氣(qi)管(guan)良(liang)性腫瘤(liu)人主動(dong)脈外膜成(cheng)纖維細胞(bao)人(ren)食管(guan)上皮細胞(bao)人(ren)食管(guan)平(ping)滑肌(ji)細胞(bao)人(ren)食管(guan)成(cheng)纖維細胞(bao)人(ren)胃黏(nian)膜上皮細胞(bao)人(ren)胃平(ping)滑肌(ji)細胞(bao)人(ren)胃成(cheng)纖維細胞(bao)人(ren)小腸(chang)粘(zhan)膜上皮細胞(bao)人(ren)小腸(chang)平(ping)滑肌(ji)細胞(bao)

本(ben)公司所有產(chan)品(pin)僅(jin)供科學實驗，不做(zuo)其(qi)他科學(xue)實驗外的(de)使(shi)用！

大(da)鼠(shu)脂肪(fang)幹(gan)分離(li)自脂肪(fang)組(zu)織；脂肪(fang)組(zu)織主要(yao)由(you)大量(liang)群集(ji)的(de)脂肪(fang)細胞(bao)構(gou)成，聚(ju)集(ji)成團(tuan)的(de)脂肪(fang)細胞(bao)由(you)薄(bo)層(ceng)疏(shu)松(song)結締組(zu)織分(fen)隔(ge)成小葉；貯(zhu)存(cun)的(de)脂肪(fang)，在(zai)需(xu)要(yao)時(shi)可(ke)迅(xun)速(su)分(fen)解成甘(gan)油(you)和(he)脂肪(fang)酸，經(jing)血(xue)液輸(shu)送到各(ge)組織以供(gong)利(li)用。它們(men)影(ying)響(xiang)胰(yi)島素敏感性、血(xue)壓(ya)水(shui)平(ping)、內皮(pi)功(gong)能(neng)、纖溶活(huo)動及(ji)炎(yan)癥(zheng)反(fan)應(ying)，參與多(duo)種(zhong)重(zhong)要病理(li)生(sheng)理(li)過(guo)程(cheng)；脂肪(fang)組(zu)織已(yi)由過(guo)去(qu)單純(chun)作(zuo)為(wei)能(neng)量(liang)儲存(cun)的(de)器官(guan)而成(cheng)為(wei)壹(yi)個極其重(zhong)要的(de)內(nei)分(fen)泌系(xi)統(tong)。脂肪(fang)幹(gan)細胞(bao)（ADSCs）是(shi)壹(yi)種(zhong)具有多(duo)向(xiang)分化(hua)潛能(neng)的(de)幹(gan)細胞(bao)，主要(yao)恢(hui)復組(zu)織細胞(bao)的(de)修(xiu)復功(gong)能，促(cu)進細胞(bao)的(de)再(zai)生，恢(hui)復年(nian)輕面容(rong)的(de)同(tong)時(shi)，身體(ti)機能也(ye)得到充(chong)分(fen)改善(shan)，有效改(gai)善(shan)亞健(jian)康、早(zao)衰(shuai)等疾(ji)病，由內(nei)而(er)外(wai)真正(zheng)的(de)有效抵(di)抗(kang)衰老(lao)。脂肪(fang)幹(gan)細胞(bao)具(ju)有很(hen)多(duo)優(you)點(dian)：①具有自(zi)我(wo)更新(xin)及多向分化(hua)的(de)潛(qian)能(neng)；②來(lai)源充(chong)足(zu)；③對供區的(de)創(chuang)傷(shang)較小；④獲得率及(ji)體(ti)外(wai)擴(kuo)增速(su)率高(gao)。脂肪(fang)幹(gan)細胞(bao)是(shi)目前(qian)被(bei)廣(guang)泛(fan)應(ying)用於(yu)組織工程(cheng)領域中(zhong)理(li)想(xiang)的(de)種(zhong)子細胞(bao)。
方(fang)法簡(jian)介(jie)：

公司實驗室分(fen)離(li)的(de)大(da)鼠(shu)脂肪(fang)幹(gan)采(cai)用膠原(yuan)酶(mei)消化(hua)法制(zhi)備而(er)來，細胞(bao)總(zong)量(liang)約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量(liang)檢(jian)測(ce)：

公司實驗室分(fen)離(li)的(de)大(da)鼠(shu)脂肪(fang)幹(gan)經CD90免疫(yi)熒光(guang)鑒定，純(chun)度(du)可(ke)達(da)90%以上，且不含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體(ti)、細菌(jun)、酵(jiao)母和(he)真菌等。

培(pei)養基 含(han)FBS、生(sheng)長(chang)添加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

換液頻(pin)率 每(mei)2-3天(tian)換液壹(yi)次

生(sheng)長(chang)特性 貼(tie)壁(bi)

細胞(bao)形(xing)態(tai) 成(cheng)纖維細胞(bao)樣

傳(chuan)代特(te)性 可(ke)傳(chuan)5代左右；3代以內(nei)狀態(tai)

消(xiao)化(hua)液 0.25%yi蛋白酶(mei)

培(pei)養條件(jian) 氣(qi)相(xiang)：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備工作(zuo)

1. 實驗器材(cai)準(zhun)備：準(zhun)備無(wu)菌(jun)的(de)培(pei)養皿、培(pei)養瓶(ping)、移(yi)液管(guan)、離(li)心管(guan)、手(shou)術器械(xie)等，並進行高(gao)壓(ya)滅菌(jun)或其(qi)他(ta)合(he)適(shi)的(de)消(xiao)毒(du)處理(li)。

2. 試(shi)劑(ji)準(zhun)備：配制(zhi)或購買合(he)適(shi)的(de)培(pei)養基、消化(hua)酶（如(ru)、膠原(yuan)酶(mei)等）、胎牛血(xue)清(qing)、雙(shuang)抗(kang)等試劑，確保(bao)其(qi)無菌且在(zai)有效期(qi)內(nei)。

3. 實驗動物(wu)或組(zu)織來(lai)源準(zhun)備：根(gen)據實驗需(xu)求(qiu)，選(xuan)擇(ze)合(he)適(shi)的(de)動(dong)物(wu)並(bing)進行相應(ying)的(de)麻(ma)醉或處死(si)，獲(huo)取所需(xu)組(zu)織；或從(cong)已(yi)有的(de)組(zu)織樣本(ben)庫(ku)中(zhong)獲取(qu)組織。

取(qu)材(cai)與處理(li)

1. 取(qu)材(cai)：在(zai)無(wu)菌(jun)條件(jian)下，迅速(su)取(qu)出(chu)目(mu)標(biao)組(zu)織，盡(jin)量(liang)減(jian)少對(dui)組(zu)織的(de)損(sun)傷(shang)，並(bing)去(qu)除(chu)多(duo)余的(de)脂肪(fang)、結(jie)締組(zu)織等非目的(de)組(zu)織。

2. 清(qing)洗(xi)：將(jiang)取(qu)出(chu)的(de)組(zu)織用預冷(leng)的(de)無(wu)菌(jun)PBS沖(chong)洗數次，以去(qu)除(chu)血(xue)液和(he)雜質(zhi)。

3. 剪(jian)切(qie)：將(jiang)組(zu)織剪(jian)成(cheng)約1 - 2mm³的(de)小塊(kuai)，以便後(hou)續消化(hua)。

細胞(bao)分(fen)離(li)

1. 消(xiao)化(hua)：將(jiang)剪(jian)碎(sui)的(de)組(zu)織塊(kuai)放(fang)入(ru)含(han)有適(shi)量(liang)消(xiao)化(hua)酶的(de)離(li)心管(guan)中(zhong)，在(zai)37℃恒(heng)溫搖(yao)床(chuang)或培(pei)養箱中(zhong)消化(hua)壹段(duan)時(shi)間(jian)。期間(jian)可(ke)輕輕搖晃(huang)離(li)心管(guan)，使(shi)消(xiao)化(hua)更均(jun)勻。

2. 終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)：當(dang)組織塊(kuai)大(da)部(bu)分(fen)被(bei)消(xiao)化(hua)成單細胞(bao)懸(xuan)液或小細胞(bao)團(tuan)時(shi)，加(jia)入(ru)含(han)血(xue)清(qing)的(de)培(pei)養基終止(zhi)消(xiao)化(hua)。

3. 過(guo)濾(lv)與離(li)心：用細胞(bao)篩(shai)過(guo)濾(lv)細胞(bao)懸(xuan)液，去(qu)除(chu)未(wei)消(xiao)化(hua)的(de)組(zu)織碎(sui)片，然(ran)後(hou)將(jiang)濾(lv)液以適(shi)當(dang)的(de)轉(zhuan)速(su)離(li)心，收集(ji)細胞(bao)沈(chen)澱(dian)。

細胞(bao)觀(guan)察與檢測(ce)

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察：每(mei)天(tian)用倒置顯微(wei)鏡(jing)觀(guan)察細胞(bao)的(de)形(xing)態(tai)、生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)、密(mi)度(du)等，記(ji)錄(lu)細胞(bao)的(de)變(bian)化(hua)情況(kuang)，如(ru)發現細胞(bao)汙染(ran)或異(yi)常(chang)，及(ji)時(shi)采(cai)取(qu)相(xiang)應(ying)措施(shi)。
2. 細胞(bao)計(ji)數與(yu)活(huo)力檢測(ce)：在(zai)需(xu)要(yao)時(shi)，可(ke)采(cai)用臺盼藍染色等方(fang)法對(dui)細胞(bao)進(jin)行計數和(he)活(huo)力檢測(ce)，以了(le)解細胞(bao)的(de)生(sheng)長(chang)情(qing)況(kuang)和(he)健(jian)康狀(zhuang)態(tai)。

壹(yi)、取(qu)材(cai)與分(fen)離(li)

1. 快速(su)操(cao)作(zuo)

- 組(zu)織取(qu)材(cai)後(hou)需(xu)立即(ji)處理(li)，避(bi)免長時(shi)間(jian)暴露(lu)於(yu)室溫(wen)或非營養環境(jing)。

- 使(shi)用無菌(jun) PBS 或生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)沖(chong)洗組織，去(qu)除(chu)血(xue)液、雜質(zhi)。

2. 消(xiao)化(hua)酶選(xuan)擇(ze)

- 根(gen)據組織類型(xing)選(xuan)擇(ze)消(xiao)化(hua)酶，避(bi)免過度(du)消(xiao)化(hua)導致(zhi)細胞(bao)損(sun)傷。

- 消(xiao)化(hua)時(shi)間(jian)需(xu)嚴(yan)格(ge)控(kong)制(zhi)（通(tong)常(chang) 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可(ke)通(tong)過(guo)顯微(wei)鏡(jing)觀(guan)察細胞(bao)解離(li)狀態(tai)。

二、培(pei)養條件(jian)優(you)化(hua)

1. 培(pei)養基選(xuan)擇(ze)

- 使(shi)用含(han)血(xue)清(qing)或特(te)定生(sheng)長(chang)因(yin)子的(de)培(pei)養基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細胞(bao)需(xu)添(tian)加(jia)胰(yi)島素、EGF 等。

- 避(bi)免頻(pin)繁(fan)更(geng)換培(pei)養基品(pin)牌(pai)或批次，減(jian)少細胞(bao)適(shi)應(ying)壓(ya)力。

2. 貼(tie)壁(bi)與(yu)傳(chuan)代

- 原(yuan)代細胞(bao)貼(tie)壁(bi)能(neng)力較弱，可(ke)能(neng)需(xu)要(yao)包被(bei)培(pei)養皿（如膠原(yuan)蛋白、多(duo)聚(ju)賴(lai)氨(an)酸）。

- 傳(chuan)代時(shi)密(mi)度(du)建(jian)議(yi)控制(zhi)在(zai) 70%-80%，過(guo)度(du)匯合(he)會導(dao)致接(jie)觸(chu)抑制(zhi)和分(fen)化(hua)。

三(san)、汙染(ran)控制(zhi)

1. 無(wu)菌(jun)操作

- 全程(cheng)在(zai)超(chao)凈(jing)臺操作(zuo)，使(shi)用壹次性耗(hao)材(cai)，避免交(jiao)叉(cha)汙染(ran)。

- 培(pei)養基中(zhong)可(ke)添(tian)加(jia)雙(shuang)抗(kang)，但長期使(shi)用可(ke)能(neng)影(ying)響(xiang)細胞(bao)活(huo)性。

2. 支原(yuan)體(ti)檢(jian)測(ce)

- 定期(qi)檢(jian)測(ce)支原(yuan)體(ti)汙染(ran)（如 PCR 法(fa)），汙染(ran)後(hou)需(xu)及(ji)時(shi)丟(diu)棄(qi)細胞(bao)。

四(si)、狀(zhuang)態(tai)監(jian)控(kong)

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察

- 每(mei)天(tian)檢(jian)查(zha)細胞(bao)形(xing)態(tai)、密(mi)度(du)及(ji)培(pei)養基顏色，及(ji)時(shi)更換培(pei)養基（通(tong)常(chang)每(mei) 2-3 天(tian)換液壹(yi)次）。

- 異(yi)常(chang)形(xing)態(tai)（如(ru)細胞(bao)變(bian)圓、碎(sui)片增(zeng)多）可(ke)能(neng)提(ti)示汙染(ran)或營(ying)養不足(zu)。

2. 傳(chuan)代與(yu)凍存

- 原(yuan)代細胞(bao)分(fen)裂次數有限（壹般 5-10 代），需(xu)及(ji)時(shi)凍存早期代次細胞(bao)。

- 凍(dong)存(cun)液建(jian)議使(shi)用 DMSO+血(xue)清(qing)（或專用凍存(cun)培(pei)養基），梯度(du)降(jiang)溫(wen)後(hou)液氮(dan)保存(cun)。