【概要(yao)描(miao)述(shu)】大鼠視(shi)乳(ru)頭(tou)星形膠(jiao)質細(xi)胞(bao)公司(si)正在(zai)出售的(de)產品(pin)：NCI-H1666肺支氣(qi)管癌人心(xin)肌(ji)成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞(bao)人心(xin)臟(zang)微血管內(nei)皮細(xi)胞(bao)人主(zhu)動(dong)脈(mai)瓣膜間質細(xi)胞(bao)人冠狀動(dong)脈(mai)內(nei)皮細(xi)胞(bao)人冠狀動(dong)脈(mai)平滑肌(ji)細(xi)胞(bao)人頸(jing)動(dong)脈(mai)內(nei)皮細(xi)胞(bao)人頸(jing)動(dong)脈(mai)平滑肌(ji)細(xi)胞(bao)人主(zhu)動(dong)脈(mai)平滑肌(ji)細(xi)胞(bao)人頸(jing)靜脈(mai)球(qiu)瘤細(xi)胞(bao)

本公司(si)所有(you)產(chan)品(pin)僅供(gong)科(ke)學實(shi)驗(yan)，不(bu)做(zuo)其他(ta)科(ke)學實(shi)驗(yan)外的(de)使用(yong)！

大鼠視(shi)乳(ru)頭(tou)星形膠(jiao)質分離自(zi)視(shi)神經乳(ru)頭(tou)；視(shi)乳(ru)頭(tou)位於(yu)黃斑區鼻側(ce)附近(jin)，境(jing)界清楚，呈白色(se)、圓盤(pan)狀，因(yin)此也稱為(wei)視(shi)盤(pan)。視(shi)網膜上視(shi)覺(jiao)纖維(wei)在此(ci)匯(hui)集(ji)，並於此穿(chuan)出(chu)眼(yan)球(qiu)向(xiang)視(shi)中(zhong)樞(shu)傳遞(di)。視(shi)乳(ru)頭(tou)中央(yang)有壹小凹陷區，稱為(wei)視(shi)杯或(huo)生理凹陷。視(shi)乳(ru)頭(tou)是視(shi)神經纖維(wei)聚合組(zu)成(cheng)視(shi)神經的(de)起(qi)始(shi)端，它(ta)沒有視(shi)細(xi)胞(bao)，因而(er)沒有視(shi)覺(jiao)，在視(shi)野(ye)中(zhong)是(shi)生理盲(mang)點(dian)。視(shi)乳(ru)頭(tou)是開(kai)角(jiao)型(xing)青(qing)光(guang)眼(yan)最(zui)早受(shou)損(sun)的(de)部位(wei)，星形膠(jiao)質細(xi)胞(bao)是視(shi)神經乳(ru)頭(tou)處(chu)主要(yao)的(de)膠質細(xi)胞(bao)類型(xing)，可為(wei)視(shi)網膜神經節(jie)細(xi)胞(bao)無髓鞘(qiao)的(de)軸(zhou)突提(ti)供(gong)結構(gou)和(he)生物支(zhi)持(chi)。青(qing)光眼(yan)視(shi)神經變(bian)是全(quan)球(qiu)不(bu)可逆(ni)性致肓(huang)眼(yan)病。青光(guang)眼(yan)視(shi)神經變(bian)以(yi)視(shi)網膜神經節(jie)細(xi)胞(bao)軸(zhou)突喪失並(bing)伴(ban)有(you)視(shi)乳(ru)頭(tou)處(chu)細(xi)胞(bao)外基質重坦為(wei)主要(yao)特征(zheng)。導(dao)致(zhi)視(shi)網膜神經節(jie)細(xi)胞(bao)喪失的(de)病理生理機(ji)制(zhi)尚(shang)未(wei)wan全闡明，神經膠(jiao)質細(xi)胞(bao)對(dui)調控(kong)神經元(yuan)微(wei)環境(jing)起(qi)多(duo)重作(zuo)用(yong)，越來(lai)越多的(de)證據表明(ming)膠質細(xi)胞(bao)町(ding)能對(dui)神經系(xi)統發育(yu)、損(sun)傷、修(xiu)復(fu)及再(zai)生起(qi)極為(wei)關鍵的(de)作(zuo)用(yong)。視(shi)乳(ru)頭(tou)星形膠(jiao)質細(xi)胞(bao)胞(bao)體多扁(bian)平(ping)，體積(ji)較大，形狀多(duo)呈不(bu)規(gui)則(ze)的(de)多邊(bian)形，突(tu)起(qi)較粗，胞(bao)核(he)為(wei)橢(tuo)圓(yuan)形，核(he)仁清晰可見(jian)，核(he)周有(you)較密集(ji)物質，胞(bao)質稀(xi)疏(shu)，骨(gu)架結構(gou)良(liang)好(hao)，明顯(xian)不(bu)同於長梭形的(de)成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞(bao)形態(tai)。
方法簡(jian)介(jie)：

公司(si)實(shi)驗(yan)室分離的(de)大鼠(shu)視(shi)乳(ru)頭(tou)星形膠(jiao)質采(cai)用(yong)yi蛋白酶-膠原(yuan)酶聯合消(xiao)化法(fa)、結合差(cha)速(su)貼(tie)壁制(zhi)備(bei)而來(lai)，細(xi)胞(bao)總量約為(wei)5×10?cells/瓶。
質量檢(jian)測(ce)：

公司(si)實(shi)驗(yan)室分離的(de)大鼠(shu)視(shi)乳(ru)頭(tou)星形膠(jiao)質經GFAP免疫(yi)熒光鑒(jian)定，純度可達(da)90%以(yi)上(shang)，且(qie)不(bu)含有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xi)菌(jun)、酵(jiao)母(mu)和(he)真菌等。

培(pei)養基 含FBS、生長添(tian)加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液頻率 每2-3天換(huan)液壹次

生長特性 貼壁

細(xi)胞(bao)形態(tai) 梭形、多(duo)角(jiao)形

傳代特性 可傳(chuan)2-3代

消(xiao)化液 0.25%yi蛋白酶

培(pei)養條(tiao)件 氣(qi)相：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準備工作(zuo)

1. 實驗器材(cai)準備：準備(bei)無菌的(de)培(pei)養皿(min)、培(pei)養瓶(ping)、移(yi)液管、離心(xin)管、手術(shu)器(qi)械(xie)等，並進(jin)行(xing)高壓(ya)滅菌(jun)或(huo)其他(ta)合適的(de)消(xiao)毒(du)處(chu)理。

2. 試劑準備(bei)：配制或(huo)購買(mai)合適的(de)培(pei)養基、消(xiao)化酶（如、膠原(yuan)酶等）、胎牛(niu)血清、雙抗(kang)等試劑(ji)，確(que)保(bao)其無菌且在(zai)有(you)效(xiao)期內(nei)。

3. 實驗動物或(huo)組(zu)織來源(yuan)準(zhun)備：根(gen)據實驗(yan)需(xu)求(qiu)，選(xuan)擇(ze)合適的(de)動物並(bing)進(jin)行(xing)相應的(de)麻醉(zui)或(huo)處(chu)死，獲取所需(xu)組(zu)織；或(huo)從(cong)已(yi)有的(de)組(zu)織樣本(ben)庫(ku)中(zhong)獲取組(zu)織。

取材(cai)與處(chu)理

1. 取材(cai)：在(zai)無菌條件(jian)下(xia)，迅(xun)速(su)取出(chu)目標組(zu)織，盡量(liang)減少對(dui)組(zu)織的(de)損(sun)傷，並去(qu)除(chu)多余的(de)脂肪、結締(di)組(zu)織等非(fei)目的(de)組(zu)織。

2. 清洗：將取出(chu)的(de)組(zu)織用(yong)預(yu)冷(leng)的(de)無菌PBS沖(chong)洗數(shu)次，以(yi)去(qu)除(chu)血液和(he)雜(za)質。

3. 剪切：將(jiang)組(zu)織剪成(cheng)約1 - 2mm³的(de)小塊(kuai)，以(yi)便(bian)後(hou)續(xu)消(xiao)化。

細(xi)胞(bao)分離

1. 消(xiao)化：將(jiang)剪(jian)碎的(de)組(zu)織塊放(fang)入(ru)含有(you)適量消(xiao)化酶的(de)離心(xin)管中(zhong)，在(zai)37℃恒溫搖(yao)床或(huo)培(pei)養箱(xiang)中消(xiao)化壹段時(shi)間(jian)。期間可輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃(huang)離心(xin)管，使消(xiao)化更(geng)均勻(yun)。

2. 終(zhong)止(zhi)消(xiao)化：當(dang)組(zu)織塊大(da)部(bu)分被(bei)消(xiao)化成(cheng)單(dan)細(xi)胞(bao)懸液或(huo)小細(xi)胞(bao)團時(shi)，加(jia)入(ru)含血清的(de)培(pei)養基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化。

3. 過(guo)濾與離心(xin)：用(yong)細(xi)胞(bao)篩過(guo)濾細(xi)胞(bao)懸液，去(qu)除未(wei)消(xiao)化的(de)組(zu)織碎片(pian)，然後(hou)將(jiang)濾(lv)液以(yi)適當(dang)的(de)轉速(su)離心(xin)，收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)沈澱(dian)。

細(xi)胞(bao)觀察(cha)與檢(jian)測(ce)

1. 日常觀察(cha)：每(mei)天用(yong)倒置顯(xian)微鏡(jing)觀察(cha)細(xi)胞(bao)的(de)形態(tai)、生長狀態(tai)、密度等，記錄(lu)細(xi)胞(bao)的(de)變(bian)化情況(kuang)，如發現細(xi)胞(bao)汙染或(huo)異常，及時采(cai)取相(xiang)應(ying)措(cuo)施(shi)。
2. 細(xi)胞(bao)計數(shu)與活力檢(jian)測(ce)：在(zai)需(xu)要(yao)時(shi)，可采(cai)用(yong)臺(tai)盼藍染色(se)等方法對(dui)細(xi)胞(bao)進行(xing)計數和(he)活力檢(jian)測(ce)，以(yi)了(le)解(jie)細(xi)胞(bao)的(de)生長情況(kuang)和健(jian)康(kang)狀態(tai)。

壹、取材(cai)與分離

1. 快速(su)操(cao)作(zuo)

- 組(zu)織取材(cai)後(hou)需(xu)立(li)即(ji)處(chu)理，避(bi)免長時(shi)間(jian)暴露(lu)於(yu)室溫或(huo)非(fei)營養環(huan)境。

- 使用(yong)無菌 PBS 或(huo)生理鹽(yan)水沖(chong)洗組(zu)織，去除(chu)血液、雜(za)質。

2. 消(xiao)化酶選擇(ze)

- 根(gen)據組(zu)織類型(xing)選(xuan)擇(ze)消(xiao)化酶，避免過(guo)度消(xiao)化導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)損(sun)傷。

- 消(xiao)化時(shi)間(jian)需(xu)嚴(yan)格(ge)控(kong)制（通常 10-30 分鐘(zhong)），可通過(guo)顯(xian)微鏡(jing)觀察(cha)細(xi)胞(bao)解離狀態(tai)。

二、培(pei)養條(tiao)件優(you)化

1. 培(pei)養基選擇

- 使用(yong)含血清或(huo)特定生長因子(zi)的(de)培(pei)養基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細(xi)胞(bao)需(xu)添(tian)加(jia)胰(yi)島素(su)、EGF 等。

- 避免頻繁更換(huan)培(pei)養基品(pin)牌或(huo)批次，減少細(xi)胞(bao)適應壓(ya)力(li)。

2. 貼壁與傳代

- 原代細(xi)胞(bao)貼壁能力(li)較弱，可能需(xu)要(yao)包(bao)被培(pei)養皿(min)（如膠原(yuan)蛋(dan)白(bai)、多聚賴(lai)氨酸）。

- 傳代時密度建議控(kong)制(zhi)在(zai) 70%-80%，過(guo)度匯(hui)合會(hui)導(dao)致(zhi)接(jie)觸(chu)抑(yi)制(zhi)和(he)分化。

三(san)、汙染控(kong)制

1. 無菌操(cao)作(zuo)

- 全程在超(chao)凈臺(tai)操(cao)作(zuo)，使用(yong)壹次性耗材(cai)，避(bi)免交叉(cha)汙染。

- 培(pei)養基中可添(tian)加(jia)雙抗(kang)，但長(chang)期使用(yong)可能影(ying)響(xiang)細(xi)胞(bao)活性。

2. 支原體檢(jian)測(ce)

- 定期檢(jian)測(ce)支(zhi)原(yuan)體汙染（如 PCR 法），汙(wu)染後(hou)需(xu)及時丟棄(qi)細(xi)胞(bao)。

四(si)、狀態(tai)監控

1. 日常觀察(cha)

- 每天檢(jian)查(zha)細(xi)胞(bao)形態(tai)、密度及培(pei)養基顏色(se)，及時更換(huan)培(pei)養基（通常每(mei) 2-3 天換(huan)液壹次）。

- 異常形態(tai)（如細(xi)胞(bao)變(bian)圓、碎片(pian)增多(duo)）可能提(ti)示(shi)汙染或(huo)營養不(bu)足(zu)。

2. 傳代與凍(dong)存(cun)

- 原代細(xi)胞(bao)分裂次(ci)數有(you)限（壹般 5-10 代），需(xu)及時凍(dong)存(cun)早期代次細(xi)胞(bao)。

- 凍(dong)存(cun)液建議使用(yong) DMSO+血清（或(huo)專用(yong)凍(dong)存(cun)培(pei)養基），梯(ti)度降(jiang)溫後(hou)液氮(dan)保(bao)存(cun)。