【概(gai)要(yao)描述(shu)】大鼠肝(gan)枯否(fou)細胞(bao)公(gong)司(si)正在(zai)出售(shou)的(de)產品(pin)：SNU-2292非小細胞(bao)肺(fei)癌豬(zhu)成纖(xian)維細胞(bao)豬(zhu)卵(luan)巢顆(ke)粒(li)細胞(bao)豬(zhu)子(zi)宮(gong)內(nei)膜(mo)上皮細胞(bao)豬(zhu)乳(ru)腺(xian)上皮細胞(bao)豬(zhu)乳(ru)腺(xian)成(cheng)纖(xian)維細胞(bao)豬(zhu)卵(luan)巢內膜細胞(bao)豬(zhu)子(zi)宮(gong)內(nei)膜(mo)基(ji)質(zhi)細胞(bao)豬(zhu)骨骼(ge)肌細胞(bao)豬(zhu)皮膚成(cheng)纖(xian)維細胞(bao)

本公(gong)司(si)所有產(chan)品(pin)僅供(gong)科(ke)學(xue)實(shi)驗(yan)，不做其(qi)他(ta)科(ke)學(xue)實(shi)驗(yan)外的使(shi)用(yong)！

大鼠枯否(fou)分離(li)自(zi)肝(gan)臟(zang)組織；肝(gan)臟(zang)是(shi)身體內以代謝(xie)功(gong)能為(wei)主(zhu)的(de)壹(yi)個(ge)器官(guan)，並在(zai)身(shen)體裏面起(qi)著(zhe)去氧化、儲(chu)存(cun)肝(gan)糖(tang)、分泌性(xing)蛋(dan)白(bai)質(zhi)的合(he)成等(deng)作(zuo)用(yong)；肝(gan)臟(zang)也(ye)制(zhi)造(zao)消(xiao)化系統(tong)中之膽汁。肝(gan)臟(zang)是(shi)機體內臟(zang)裏最(zui)大的器官，位於機體中的腹部位置，在右側橫隔(ge)膜(mo)之下(xia)，位於膽囊(nang)之前(qian)端且(qie)於(yu)右邊腎臟(zang)的(de)前(qian)方(fang)，胃的上方。肝(gan)臟(zang)是(shi)機體消化系統(tong)中最(zui)大的消化腺(xian)，為(wei)壹(yi)紅(hong)棕(zong)色的(de)V字形器官。肝(gan)臟(zang)是(shi)尿素合(he)成的(de)主(zhu)要(yao)器(qi)官，又是(shi)新(xin)陳(chen)代謝(xie)的(de)重(zhong)要(yao)器(qi)官。肝(gan)臟(zang)在(zai)機(ji)體位置和形態結(jie)構：肝(gan)臟(zang)位於右上腹，隱(yin)藏在右側膈下和肋(lei)骨深面，大部分肝(gan)為肋(lei)弓所復蓋(gai)，僅(jin)在腹(fu)上區、右肋弓間露出並直(zhi)接接觸(chu)腹(fu)前(qian)壁，肝(gan)上面則與膈(ge)及腹(fu)前(qian)壁相(xiang)接。枯(ku)否氏(shi)細胞(bao)(Kupffer細胞(bao))是(shi)肝(gan)臟(zang)的(de)肝(gan)血竇內(nei)壹(yi)些(xie)固定(ding)於(yu)竇(dou)壁的(de)巨噬(shi)細胞(bao)，它(ta)能(neng)吞噬(shi)和(he)清(qing)除大部分從(cong)腸道來的(de)抗(kang)原(yuan)微(wei)粒，並能吞噬(shi)和(he)清(qing)除肝(gan)血竇中(zhong)的(de)細菌(jun)、異(yi)物和衰(shuai)老的(de)紅細胞(bao)，並(bing)把血紅蛋(dan)白(bai)分解(jie)成紅(hong)素。此(ci)外，肝(gan)巨噬(shi)細胞(bao)也(ye)有處(chu)理抗(kang)原，誘導(dao)T細胞(bao)增(zeng)殖，參(can)與免(mian)疫調(tiao)節(jie)的作用。枯(ku)否氏(shi)細胞(bao)和(he)壹(yi)般巨噬(shi)細胞(bao)不同，枯否(fou)氏(shi)細胞(bao)不具有(you)增(zeng)加抗原(yuan)免疫(yi)原(yuan)性(xing)的(de)能力，相反(fan)有消(xiao)除(chu)或減弱抗(kang)原性(xing)的(de)作(zuo)用(yong)。枯否(fou)氏(shi)細胞(bao)能(neng)吞噬(shi)來自(zi)血液(ye)循(xun)環的(de)抗(kang)原(yuan)抗體復合(he)物和其(qi)他有害(hai)物質(zhi)，以消(xiao)除(chu)這些(xie)物質(zhi)對機(ji)體的損害。枯否細胞(bao)功(gong)能障(zhang)礙(ai)可導(dao)致(zhi)腸源(yuan)性內(nei)毒素血癥。電(dian)鏡下(xia)有(you)很(hen)多(duo)皺褶(zhe)和(he)微(wei)絨(rong)毛。
方法簡(jian)介(jie)：

公(gong)司(si)實驗(yan)室(shi)分離(li)的(de)大鼠肝(gan)枯否(fou)采(cai)用混(hun)合(he)酶灌(guan)流消化(hua)、低(di)速離(li)心(xin)、密(mi)度(du)梯度(du)離(li)心(xin)、差(cha)速貼(tie)壁法制(zhi)備(bei)而(er)來，細胞(bao)總量(liang)約(yue)為5×10?cells/瓶。
質(zhi)量檢(jian)測：

公(gong)司(si)實驗(yan)室(shi)分離(li)的(de)大鼠肝(gan)枯否(fou)經CD68免疫熒光鑒(jian)定(ding)，純度(du)可(ke)達90%以(yi)上，且(qie)不含有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體、細菌(jun)、酵(jiao)母(mu)和真(zhen)菌等(deng)。

培養基(ji) 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液(ye)頻率(lv) 每2-3天換液(ye)壹(yi)次

生長特(te)性 貼(tie)壁

細胞(bao)形態 梭(suo)形、巨噬(shi)細胞(bao)

傳代特(te)性 屬(shu)於(yu)終末分化細胞(bao)；屬(shu)於(yu)不增殖(zhi)細胞(bao)群(qun)

消化液(ye) 利(li)多(duo)ka因(yin)（12mM）

培養條(tiao)件(jian) 氣相：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工(gong)作

1. 實驗(yan)器(qi)材準(zhun)備(bei)：準(zhun)備(bei)無(wu)菌的培養(yang)皿(min)、培(pei)養瓶(ping)、移液(ye)管(guan)、離(li)心(xin)管(guan)、手(shou)術(shu)器械等(deng)，並(bing)進(jin)行高(gao)壓(ya)滅(mie)菌或其(qi)他合(he)適(shi)的(de)消毒處理。

2. 試(shi)劑(ji)準(zhun)備(bei)：配制或購買(mai)合(he)適(shi)的(de)培養基(ji)、消化(hua)酶（如、膠原(yuan)酶等(deng)）、胎牛(niu)血清(qing)、雙(shuang)抗等(deng)試(shi)劑(ji)，確(que)保其(qi)無(wu)菌且(qie)在(zai)有(you)效期內(nei)。

3. 實驗(yan)動物或組織來源(yuan)準(zhun)備(bei)：根(gen)據(ju)實(shi)驗(yan)需求，選(xuan)擇合(he)適(shi)的(de)動物並進(jin)行相應(ying)的麻(ma)醉(zui)或處(chu)死(si)，獲(huo)取(qu)所需組織；或從(cong)已(yi)有(you)的(de)組織樣本(ben)庫(ku)中獲(huo)取(qu)組織。

取(qu)材與處(chu)理

1. 取(qu)材：在(zai)無(wu)菌條(tiao)件(jian)下(xia)，迅速取(qu)出(chu)目(mu)標組織，盡量(liang)減少(shao)對組織的損(sun)傷，並去除多(duo)余(yu)的(de)脂(zhi)肪(fang)、結(jie)締組織等非目(mu)的組織。

2. 清(qing)洗：將(jiang)取(qu)出(chu)的組織用預(yu)冷(leng)的無(wu)菌PBS沖洗數次，以(yi)去除(chu)血液(ye)和雜(za)質(zhi)。

3. 剪切：將(jiang)組織剪成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的小塊(kuai)，以(yi)便後續(xu)消化(hua)。

細胞(bao)分(fen)離(li)

1. 消化：將剪碎的組織塊(kuai)放(fang)入(ru)含有適(shi)量(liang)消化酶(mei)的離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，在(zai)37℃恒(heng)溫搖床(chuang)或培(pei)養箱(xiang)中(zhong)消化(hua)壹(yi)段(duan)時間。期間可輕輕搖晃(huang)離(li)心(xin)管(guan)，使(shi)消(xiao)化更均勻(yun)。

2. 終止(zhi)消化(hua)：當(dang)組織塊(kuai)大部分被消化成單細胞(bao)懸(xuan)液(ye)或小細胞(bao)團(tuan)時，加(jia)入(ru)含血清(qing)的培(pei)養(yang)基(ji)終止(zhi)消化(hua)。

3. 過濾(lv)與離(li)心(xin)：用(yong)細胞(bao)篩(shai)過濾(lv)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)，去除(chu)未(wei)消化的組織碎片(pian)，然(ran)後將(jiang)濾(lv)液(ye)以適(shi)當(dang)的(de)轉速離(li)心(xin)，收(shou)集細胞(bao)沈(chen)澱。

細胞(bao)觀察與檢(jian)測

1. 日常觀察：每天用倒(dao)置(zhi)顯微鏡觀察細胞(bao)的(de)形態、生長狀(zhuang)態、密度(du)等(deng)，記(ji)錄(lu)細胞(bao)的(de)變化(hua)情況(kuang)，如發(fa)現細胞(bao)汙(wu)染(ran)或異(yi)常，及時采(cai)取(qu)相(xiang)應措施。
2. 細胞(bao)計(ji)數與活(huo)力檢(jian)測：在(zai)需要(yao)時(shi)，可采(cai)用臺(tai)盼藍(lan)染(ran)色等(deng)方法對細胞(bao)進(jin)行計(ji)數和活力檢(jian)測，以(yi)了(le)解細胞(bao)的(de)生長情況(kuang)和健(jian)康(kang)狀(zhuang)態。

壹(yi)、取(qu)材與分(fen)離(li)

1. 快(kuai)速操(cao)作

- 組織取(qu)材後需立(li)即處理，避(bi)免長時(shi)間暴露(lu)於(yu)室溫或非營(ying)養(yang)環(huan)境(jing)。

- 使(shi)用(yong)無菌 PBS 或生(sheng)理鹽(yan)水沖(chong)洗(xi)組織，去除(chu)血液(ye)、雜(za)質(zhi)。

2. 消化酶選擇

- 根據(ju)組織類型(xing)選(xuan)擇消化酶，避(bi)免過度(du)消(xiao)化(hua)導(dao)致(zhi)細胞(bao)損(sun)傷。

- 消化時間需嚴(yan)格控制（通常(chang) 10-30 分(fen)鐘），可通過顯微鏡觀察細胞(bao)解(jie)離(li)狀(zhuang)態。

二(er)、培(pei)養條(tiao)件(jian)優(you)化

1. 培養基(ji)選擇

- 使(shi)用(yong)含血清(qing)或特(te)定(ding)生(sheng)長因(yin)子(zi)的培養基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分細胞(bao)需添加胰島(dao)素、EGF 等(deng)。

- 避免頻繁更換培(pei)養(yang)基(ji)品牌(pai)或批(pi)次，減少(shao)細胞(bao)適(shi)應(ying)壓(ya)力。

2. 貼(tie)壁與傳(chuan)代

- 原代細胞(bao)貼(tie)壁能(neng)力較弱(ruo)，可能(neng)需要(yao)包被培養皿（如膠原(yuan)蛋白(bai)、多(duo)聚(ju)賴(lai)氨(an)酸）。

- 傳代時密度(du)建議(yi)控制在(zai) 70%-80%，過度(du)匯合(he)會(hui)導(dao)致(zhi)接觸(chu)抑制(zhi)和(he)分(fen)化(hua)。

三、汙染(ran)控制

1. 無菌操作

- 全(quan)程在(zai)超(chao)凈臺(tai)操作(zuo)，使(shi)用(yong)壹(yi)次性(xing)耗材，避(bi)免(mian)交叉汙染(ran)。

- 培養基(ji)中可(ke)添加雙(shuang)抗，但長期使(shi)用(yong)可能影響細胞(bao)活(huo)性。

2. 支(zhi)原(yuan)體檢測

- 定(ding)期檢(jian)測支(zhi)原(yuan)體汙染(ran)（如 PCR 法），汙(wu)染(ran)後需及時(shi)丟(diu)棄細胞(bao)。

四、狀(zhuang)態監(jian)控

1. 日常觀察

- 每天檢查(zha)細胞(bao)形態、密度(du)及(ji)培(pei)養基(ji)顏色，及(ji)時更(geng)換培(pei)養(yang)基(ji)（通常(chang)每 2-3 天換液(ye)壹(yi)次）。

- 異常形態（如細胞(bao)變(bian)圓、碎片(pian)增多(duo)）可(ke)能(neng)提(ti)示(shi)汙染(ran)或營(ying)養(yang)不足。

2. 傳代與凍存(cun)

- 原代細胞(bao)分(fen)裂(lie)次數(shu)有限(xian)（壹(yi)般 5-10 代(dai)），需及時(shi)凍存(cun)早(zao)期代(dai)次細胞(bao)。

- 凍存(cun)液(ye)建議(yi)使(shi)用(yong) DMSO+血清(qing)（或專(zhuan)用(yong)凍存(cun)培(pei)養(yang)基(ji)），梯度(du)降溫後液(ye)氮保存(cun)。