【概要描述】大鼠(shu)海綿體內皮(pi)細(xi)胞(bao)公司正在出售(shou)的(de)產(chan)品(pin)：SNU-2315非(fei)小(xiao)細胞(bao)肺(fei)癌羊肺(fei)動脈(mai)內(nei)皮細(xi)胞(bao)羊肺(fei)動脈(mai)平(ping)滑(hua)肌(ji)細胞(bao)羊支氣(qi)管上(shang)皮(pi)細胞(bao)羊肺(fei)成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)羊主(zhu)動脈(mai)平(ping)滑(hua)肌(ji)細胞(bao)羊卵(luan)巢(chao)顆(ke)粒細胞(bao)羊子宮內膜(mo)上(shang)皮(pi)細胞(bao)羊乳腺上(shang)皮(pi)細胞(bao)羊睪丸(wan)間(jian)質(zhi)細(xi)胞(bao)

本(ben)公司所有(you)產(chan)品(pin)僅(jin)供(gong)科學(xue)實(shi)驗，不(bu)做(zuo)其(qi)他科學(xue)實(shi)驗外(wai)的(de)使用(yong)！

大鼠(shu)海綿體內皮(pi)分離自(zi)海綿體組織(zhi)；陰莖(jing)海綿體是由(you)海綿狀(zhuang)的(de)小梁(liang)和(he)腔隙(xi)構(gou)成(cheng)的(de)血竇(dou)結(jie)構(gou)，它(ta)主(zhu)要包括(kuo)海綿體內皮(pi)細(xi)胞(bao)、平(ping)滑(hua)肌(ji)細胞(bao)和(he)成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)3種細胞(bao)成(cheng)分。其(qi)中(zhong)平(ping)滑(hua)肌(ji)細胞(bao)和(he)成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)鑲(xiang)嵌(qian)於(yu)海綿體細胞(bao)外(wai)基質(zhi)的(de)膠原中(zhong)，而海綿體內皮(pi)細(xi)胞(bao)則(ze)覆蓋(gai)於(yu)海綿體血竇(dou)的(de)腔面，僅(jin)占(zhan)海綿體組織(zhi)的(de)2.8%。在消化海綿體組織(zhi)時(shi)，膠原酶的(de)作(zuo)用(yong)主(zhu)要是松(song)解(jie)海綿體內皮(pi)細(xi)胞(bao)與(yu)基膜(mo)的(de)聯系(xi)，破(po)壞(huai)海綿體內皮(pi)細(xi)胞(bao)間(jian)的(de)緊(jin)密(mi)連(lian)接(jie)。如(ru)果消化時(shi)間(jian)延(yan)長或膠原酶濃(nong)度過大，平(ping)滑(hua)肌(ji)細胞(bao)和(he)成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)也(ye)將(jiang)被消(xiao)化下來，從而影響(xiang)海綿體內皮(pi)細(xi)胞(bao)的(de)純度。因此，比較篩(shai)選(xuan)合(he)適(shi)的(de)膠原酶濃(nong)度和(he)消化時(shi)間(jian)是成(cheng)功分離海綿體內皮(pi)細(xi)胞(bao)的(de)關(guan)鍵(jian)。
方(fang)法簡(jian)介：

公司實驗(yan)室分離的(de)大鼠(shu)海綿體內皮(pi)采(cai)用(yong)混(hun)合(he)酶消(xiao)化法(fa)結(jie)合(he)機(ji)械(xie)分離法(fa)、並(bing)用(yong)內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)專(zhuan)用(yong)培(pei)養(yang)基培(pei)養(yang)篩(shai)選(xuan)制(zhi)備而來，細胞(bao)總(zong)量約為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量檢(jian)測：

公司實驗(yan)室分離的(de)大鼠(shu)海綿體內皮(pi)經(jing)CD31免(mian)疫(yi)熒(ying)光(guang)鑒(jian)定，純(chun)度可達90%以(yi)上(shang)，且(qie)不(bu)含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體、細菌(jun)、酵(jiao)母(mu)和(he)真(zhen)菌等。

包被條(tiao)件 PLL（0.1mg/ml），明(ming)膠（0.1%）

培(pei)養(yang)基 含FBS、生(sheng)長(chang)添加劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

換液(ye)頻(pin)率 每2-3天換(huan)液(ye)壹次

生(sheng)長(chang)特性 貼壁(bi)

細胞(bao)形(xing)態(tai) 內皮(pi)細(xi)胞(bao)樣

傳(chuan)代(dai)特性 可傳(chuan)2-3代(dai)

消化液(ye) 0.25%yi蛋白(bai)酶

培(pei)養(yang)條(tiao)件 氣相(xiang)：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備工(gong)作(zuo)

1. 實驗(yan)器材(cai)準(zhun)備：準(zhun)備無菌(jun)的(de)培(pei)養(yang)皿(min)、培(pei)養(yang)瓶(ping)、移(yi)液管(guan)、離(li)心(xin)管(guan)、手(shou)術器械(xie)等，並(bing)進行高壓滅(mie)菌或其(qi)他合(he)適(shi)的(de)消毒(du)處理。

2. 試劑(ji)準(zhun)備：配制或購買合(he)適(shi)的(de)培(pei)養(yang)基、消化酶（如(ru)、膠原酶等）、胎牛(niu)血(xue)清、雙(shuang)抗等試劑(ji)，確保其(qi)無菌(jun)且(qie)在有(you)效期內。

3. 實驗(yan)動物或組織(zhi)來源(yuan)準(zhun)備：根(gen)據(ju)實(shi)驗需求(qiu)，選擇(ze)合(he)適(shi)的(de)動物並(bing)進行相(xiang)應的(de)麻醉(zui)或處死(si)，獲取(qu)所(suo)需組織(zhi)；或從已有(you)的(de)組織(zhi)樣本(ben)庫(ku)中(zhong)獲取(qu)組織(zhi)。

取(qu)材(cai)與(yu)處理

1. 取(qu)材(cai)：在無菌(jun)條(tiao)件下，迅速(su)取(qu)出目(mu)標組織(zhi)，盡量減(jian)少(shao)對(dui)組織(zhi)的(de)損傷(shang)，並(bing)去除(chu)多(duo)余的(de)脂肪、結締組織(zhi)等非(fei)目(mu)的(de)組織(zhi)。

2. 清洗(xi)：將取(qu)出的(de)組織(zhi)用(yong)預冷的(de)無菌(jun)PBS沖(chong)洗(xi)數次(ci)，以(yi)去除(chu)血液和(he)雜質(zhi)。

3. 剪切：將組織(zhi)剪成(cheng)約1 - 2mm³的(de)小塊(kuai)，以便(bian)後(hou)續(xu)消化。

細胞(bao)分離

1. 消化：將(jiang)剪(jian)碎(sui)的(de)組織(zhi)塊(kuai)放入(ru)含(han)有(you)適(shi)量消化酶的(de)離心(xin)管(guan)中(zhong)，在37℃恒溫(wen)搖(yao)床(chuang)或培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化壹(yi)段(duan)時(shi)間(jian)。期間(jian)可輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃(huang)離心(xin)管(guan)，使消化更(geng)均(jun)勻。

2. 終(zhong)止消化：當組織(zhi)塊(kuai)大部(bu)分被消(xiao)化成(cheng)單(dan)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液或小細(xi)胞(bao)團(tuan)時(shi)，加入(ru)含(han)血清的(de)培(pei)養(yang)基終(zhong)止消化。

3. 過濾(lv)與(yu)離(li)心(xin)：用(yong)細(xi)胞(bao)篩(shai)過(guo)濾(lv)細胞(bao)懸(xuan)液，去(qu)除(chu)未(wei)消化的(de)組織(zhi)碎片(pian)，然後(hou)將(jiang)濾(lv)液以適(shi)當的(de)轉速(su)離心(xin)，收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)沈(chen)澱(dian)。

細胞(bao)觀(guan)察(cha)與(yu)檢(jian)測

1. 日常(chang)觀察(cha)：每天用(yong)倒(dao)置(zhi)顯微鏡(jing)觀察(cha)細(xi)胞(bao)的(de)形(xing)態(tai)、生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)、密(mi)度等，記錄細胞(bao)的(de)變化情(qing)況(kuang)，如(ru)發(fa)現細(xi)胞(bao)汙(wu)染(ran)或異(yi)常(chang)，及時(shi)采取(qu)相(xiang)應措施(shi)。
2. 細胞(bao)計(ji)數與(yu)活(huo)力(li)檢(jian)測：在需要時(shi)，可采用(yong)臺盼藍染(ran)色(se)等方(fang)法對(dui)細(xi)胞(bao)進行計(ji)數和(he)活力(li)檢(jian)測，以了解細(xi)胞(bao)的(de)生(sheng)長(chang)情況和(he)健康(kang)狀(zhuang)態(tai)。

壹、取(qu)材(cai)與(yu)分離

1. 快(kuai)速(su)操作(zuo)

- 組織(zhi)取(qu)材(cai)後(hou)需(xu)立(li)即處理，避免(mian)長(chang)時(shi)間(jian)暴露於(yu)室溫(wen)或非(fei)營(ying)養環境。

- 使用(yong)無菌(jun) PBS 或生(sheng)理鹽水沖洗(xi)組織(zhi)，去除(chu)血液、雜質(zhi)。

2. 消化酶選(xuan)擇

- 根據(ju)組織(zhi)類型選擇消化酶，避免(mian)過(guo)度消化導(dao)致細胞(bao)損(sun)傷(shang)。

- 消化時(shi)間(jian)需嚴(yan)格控制（通(tong)常(chang) 10-30 分鐘），可通過(guo)顯微鏡(jing)觀察(cha)細(xi)胞(bao)解(jie)離(li)狀(zhuang)態(tai)。

二(er)、培(pei)養(yang)條(tiao)件優(you)化

1. 培(pei)養(yang)基選擇

- 使用(yong)含(han)血(xue)清或特定生(sheng)長(chang)因子的(de)培(pei)養(yang)基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分細胞(bao)需(xu)添加胰島素、EGF 等。

- 避免(mian)頻(pin)繁(fan)更換(huan)培(pei)養(yang)基品(pin)牌或批次(ci)，減(jian)少(shao)細(xi)胞(bao)適(shi)應壓力(li)。

2. 貼壁(bi)與(yu)傳(chuan)代(dai)

- 原代(dai)細胞(bao)貼(tie)壁(bi)能(neng)力(li)較弱(ruo)，可能(neng)需(xu)要包被培(pei)養(yang)皿(min)（如(ru)膠原蛋(dan)白(bai)、多(duo)聚(ju)賴(lai)氨(an)酸(suan)）。

- 傳(chuan)代(dai)時(shi)密(mi)度建(jian)議(yi)控(kong)制(zhi)在 70%-80%，過度匯合(he)會導(dao)致接(jie)觸(chu)抑(yi)制和(he)分化。

三(san)、汙(wu)染(ran)控制

1. 無菌(jun)操(cao)作(zuo)

- 全程在超(chao)凈臺操作(zuo)，使用(yong)壹(yi)次(ci)性耗(hao)材(cai)，避免(mian)交叉(cha)汙(wu)染(ran)。

- 培(pei)養(yang)基中(zhong)可添加雙抗，但長期使用(yong)可能(neng)影(ying)響(xiang)細胞(bao)活(huo)性。

2. 支原(yuan)體檢(jian)測

- 定期檢(jian)測支原(yuan)體汙(wu)染(ran)（如 PCR 法），汙(wu)染(ran)後(hou)需(xu)及時(shi)丟(diu)棄(qi)細(xi)胞(bao)。

四、狀(zhuang)態(tai)監(jian)控(kong)

1. 日常(chang)觀察(cha)

- 每天(tian)檢(jian)查細胞(bao)形(xing)態(tai)、密(mi)度及培(pei)養(yang)基顏色(se)，及時(shi)更換培(pei)養(yang)基（通常(chang)每 2-3 天(tian)換液壹次）。

- 異(yi)常(chang)形(xing)態(tai)（如(ru)細(xi)胞(bao)變(bian)圓、碎片(pian)增(zeng)多(duo)）可能(neng)提示(shi)汙(wu)染(ran)或營(ying)養不(bu)足(zu)。

2. 傳(chuan)代(dai)與(yu)凍存(cun)

- 原代(dai)細胞(bao)分裂次(ci)數有(you)限（壹(yi)般 5-10 代(dai)），需及時(shi)凍存(cun)早(zao)期代(dai)次細胞(bao)。

- 凍存(cun)液(ye)建(jian)議(yi)使用(yong) DMSO+血(xue)清（或專用(yong)凍存(cun)培(pei)養(yang)基），梯度降溫(wen)後(hou)液(ye)氮保存(cun)。