【概要描述】大(da)鼠(shu)骨髓間充(chong)質幹細(xi)胞(bao)公(gong)司正在(zai)出(chu)售(shou)的產品：SNU-1330非(fei)小(xiao)細(xi)胞(bao)肺(fei)癌(ai)豬主(zhu)動脈瓣膜(mo)間質細(xi)胞(bao)豬(zhu)小(xiao)腸黏(nian)膜(mo)上皮細(xi)胞(bao)豬(zhu)腎(shen)小(xiao)管上皮細(xi)胞(bao)豬(zhu)腎(shen)小(xiao)球(qiu)系(xi)膜(mo)細(xi)胞(bao)豬(zhu)膀胱(guang)上皮細(xi)胞(bao)豬(zhu)膀胱(guang)平(ping)滑肌細(xi)胞(bao)豬(zhu)前(qian)列腺(xian)成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)豬(zhu)輸(shu)尿(niao)管成纖(xian)維細(xi)胞(bao)豬(zhu)甲(jia)狀(zhuang)腺(xian)上皮細(xi)胞(bao)

大(da)鼠(shu)骨髓間充(chong)質（BMSC）分(fen)離(li)自(zi)骨髓；骨髓是(shi)機(ji)體(ti)的造血(xue)組(zu)織(zhi)，位(wei)於身體的許多(duo)骨骼內(nei)。成(cheng)年動物(wu)的骨髓分(fen)兩(liang)種：紅骨髓和(he)黃(huang)骨髓。紅(hong)骨髓能制造紅細(xi)胞(bao)、血(xue)小(xiao)板(ban)和(he)各(ge)種白細(xi)胞(bao)。血(xue)小(xiao)板(ban)有止血(xue)作(zuo)用(yong)，白細(xi)胞(bao)能殺滅與抑制各(ge)種病原(yuan)體(ti)，包(bao)括(kuo)細(xi)菌、病毒(du)等(deng)；某(mou)些淋巴細(xi)胞(bao)能制造抗體(ti)。因(yin)此(ci)，骨髓不(bu)但(dan)是(shi)造血(xue)器官(guan)，它還(hai)是(shi)重(zhong)要(yao)的免(mian)疫器官(guan)。骨髓是(shi)存在(zai)於(yu)長(chang)骨（如肱骨、股(gu)骨）的骨髓腔(qiang)和(he)扁(bian)平(ping)骨（如髂骨）的稀松骨質間的網眼(yan)中，是(shi)壹種海綿狀(zhuang)的組織(zhi)，能產生(sheng)血(xue)細(xi)胞(bao)的骨髓略呈(cheng)紅(hong)色(se)，稱(cheng)為(wei)紅骨髓。出(chu)生(sheng)時(shi)，紅(hong)骨髓充(chong)滿全身骨髓腔(qiang)，隨(sui)著(zhe)年齡(ling)增大(da)，脂(zhi)肪細(xi)胞(bao)增多(duo)，相(xiang)當部(bu)分(fen)紅(hong)骨髓被(bei)黃骨髓取代，最(zui)後幾乎(hu)只(zhi)有扁平(ping)骨骨髓腔(qiang)中有紅骨髓。骨髓基質系(xi)統(tong)內(nei)存在(zai)的骨髓間充(chong)質幹細(xi)胞(bao)是(shi)壹種除(chu)造血(xue)幹(gan)細(xi)胞(bao)以(yi)外的、具有高度(du)自(zi)我更(geng)新(xin)能力和(he)多(duo)向(xiang)分(fen)化潛(qian)能的幹細(xi)胞(bao)，可(ke)以(yi)向骨、軟骨、肌組織、皮膚、脂肪、神(shen)經(jing)等(deng)多(duo)種組織分(fen)化，因此(ci)可以(yi)作為(wei)組織工(gong)程中的種子(zi)細(xi)胞(bao)。在(zai)骨髓中，BMSC占骨髓有核(he)細(xi)胞(bao)總(zong)數(shu)的0.001%-0.1%，含(han)量(liang)極(ji)低(di)。骨髓間充(chong)質幹細(xi)胞(bao)的體外培養(yang)條(tiao)件要求較(jiao)高，在(zai)培養(yang)過(guo)程中，受(shou)貼壁時間、種植密(mi)度(du)、血(xue)清含(han)量(liang)、培養(yang)溫(wen)度(du)和(he)培養(yang)基pH值(zhi)等(deng)條(tiao)件的影響(xiang)。
方(fang)法(fa)簡(jian)介：

公(gong)司實驗(yan)室(shi)分(fen)離(li)的大(da)鼠(shu)骨髓間充(chong)質幹采(cai)用(yong)沖洗(xi)骨髓、密(mi)度(du)梯(ti)度(du)離(li)心、差(cha)速(su)貼壁法(fa)結(jie)合(he)培養(yang)基篩(shai)選(xuan)制備而(er)來，細(xi)胞(bao)總(zong)量(liang)約為(wei)5×10?cells/瓶。
質量(liang)檢測(ce)：

公(gong)司實驗(yan)室(shi)分(fen)離(li)的大(da)鼠(shu)骨髓間充(chong)質幹經(jing)CD90免(mian)疫熒(ying)光(guang)鑒定(ding)，純(chun)度(du)可(ke)達(da)90%以(yi)上，且不(bu)含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體(ti)、細(xi)菌、酵母(mu)和(he)真(zhen)菌(jun)等(deng)。

本公(gong)司所有產品僅(jin)供(gong)科學實(shi)驗(yan)，不(bu)做(zuo)其他(ta)科(ke)學實(shi)驗(yan)外的使用(yong)！

培養(yang)基 含(han)FBS、生(sheng)長(chang)添加劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液頻(pin)率(lv) 每(mei)2-3天(tian)換(huan)液壹次

生(sheng)長(chang)特(te)性 貼壁

細(xi)胞(bao)形態 成纖(xian)維細(xi)胞(bao)樣

傳(chuan)代特性(xing) 可(ke)傳(chuan)5代左右(you)；3代以(yi)內狀(zhuang)態

消化液 0.25%yi蛋(dan)白酶

培養(yang)條(tiao)件 氣(qi)相：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備工(gong)作

1. 實(shi)驗器材準(zhun)備：準(zhun)備無菌的培養(yang)皿(min)、培養(yang)瓶、移液管、離心(xin)管、手(shou)術器械等(deng)，並(bing)進(jin)行高(gao)壓滅菌或(huo)其他(ta)合(he)適(shi)的消毒(du)處理(li)。

2. 試(shi)劑準(zhun)備：配(pei)制或(huo)購買(mai)合適(shi)的培養(yang)基、消(xiao)化酶（如、膠原(yuan)酶等(deng)）、胎牛(niu)血(xue)清、雙(shuang)抗(kang)等(deng)試(shi)劑，確保其(qi)無菌且在(zai)有效期(qi)內(nei)。

3. 實驗(yan)動物(wu)或(huo)組織(zhi)來源(yuan)準(zhun)備：根(gen)據(ju)實驗需(xu)求(qiu)，選(xuan)擇合適(shi)的動物(wu)並(bing)進(jin)行相(xiang)應(ying)的麻醉(zui)或(huo)處死(si)，獲取所需(xu)組(zu)織(zhi)；或(huo)從已(yi)有的組織(zhi)樣本庫(ku)中獲取組織。

取材與處(chu)理(li)

1. 取材：在(zai)無菌條件下，迅(xun)速(su)取出目標組(zu)織，盡量(liang)減少(shao)對組織的損(sun)傷(shang)，並(bing)去除(chu)多(duo)余的脂肪、結(jie)締組(zu)織等(deng)非(fei)目(mu)的組織(zhi)。

2. 清洗(xi)：將(jiang)取出的組織(zhi)用(yong)預(yu)冷(leng)的無菌PBS沖洗數(shu)次，以(yi)去除(chu)血(xue)液和(he)雜(za)質。

3. 剪切(qie)：將組(zu)織剪成(cheng)約1 - 2mm³的小(xiao)塊(kuai)，以(yi)便(bian)後續消(xiao)化。

細(xi)胞(bao)分(fen)離(li)

1. 消(xiao)化：將剪碎(sui)的組織(zhi)塊放(fang)入(ru)含(han)有適(shi)量(liang)消化酶的離心(xin)管中，在(zai)37℃恒(heng)溫(wen)搖床或(huo)培養(yang)箱(xiang)中消化壹段(duan)時(shi)間。期(qi)間可(ke)輕輕搖(yao)晃離(li)心管，使消(xiao)化更(geng)均勻。

2. 終止(zhi)消(xiao)化：當組織塊大(da)部(bu)分(fen)被(bei)消化成單(dan)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液或(huo)小(xiao)細(xi)胞(bao)團(tuan)時(shi)，加入(ru)含(han)血(xue)清的培養(yang)基終止(zhi)消(xiao)化。

3. 過(guo)濾與(yu)離心(xin)：用(yong)細(xi)胞(bao)篩(shai)過(guo)濾細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，去除(chu)未(wei)消(xiao)化的組織(zhi)碎片(pian)，然後將濾(lv)液以(yi)適(shi)當的轉速(su)離心(xin)，收(shou)集細(xi)胞(bao)沈(chen)澱(dian)。

細(xi)胞(bao)觀(guan)察(cha)與檢(jian)測(ce)

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察(cha)：每(mei)天(tian)用(yong)倒置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)的形態、生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態、密(mi)度(du)等(deng)，記(ji)錄細(xi)胞(bao)的變化情況，如發現細(xi)胞(bao)汙(wu)染(ran)或(huo)異常(chang)，及(ji)時(shi)采(cai)取相應(ying)措(cuo)施。
2. 細(xi)胞(bao)計(ji)數與(yu)活力檢(jian)測(ce)：在(zai)需(xu)要(yao)時(shi)，可采(cai)用(yong)臺盼(pan)藍染(ran)色等(deng)方(fang)法(fa)對細(xi)胞(bao)進(jin)行計(ji)數和(he)活(huo)力檢(jian)測(ce)，以(yi)了解細(xi)胞(bao)的生(sheng)長(chang)情(qing)況和(he)健康狀態。

壹、取材與分(fen)離(li)

1. 快(kuai)速操(cao)作

- 組織取材後需(xu)立(li)即處(chu)理，避(bi)免(mian)長時(shi)間暴露(lu)於室(shi)溫(wen)或(huo)非營養(yang)環(huan)境。

- 使(shi)用(yong)無菌 PBS 或(huo)生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)沖洗(xi)組(zu)織，去除(chu)血(xue)液、雜(za)質。

2. 消(xiao)化酶選擇(ze)

- 根(gen)據(ju)組織類(lei)型選擇(ze)消化酶，避(bi)免(mian)過(guo)度消(xiao)化導致細(xi)胞(bao)損(sun)傷(shang)。

- 消(xiao)化時間需(xu)嚴(yan)格(ge)控制（通(tong)常 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可通(tong)過(guo)顯微(wei)鏡(jing)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)解離狀態。

二、培養(yang)條(tiao)件優(you)化

1. 培養(yang)基選(xuan)擇(ze)

- 使用(yong)含(han)血(xue)清或(huo)特定(ding)生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)的培養(yang)基（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分(fen)細(xi)胞(bao)需(xu)添加胰(yi)島素(su)、EGF 等(deng)。

- 避(bi)免(mian)頻(pin)繁更(geng)換(huan)培養(yang)基品牌或(huo)批次，減(jian)少(shao)細(xi)胞(bao)適(shi)應(ying)壓力。

2. 貼壁與傳(chuan)代

- 原(yuan)代細(xi)胞(bao)貼壁能力較(jiao)弱，可能需(xu)要(yao)包(bao)被(bei)培養(yang)皿(min)（如膠原(yuan)蛋(dan)白、多(duo)聚(ju)賴氨(an)酸）。

- 傳(chuan)代時密(mi)度(du)建議(yi)控(kong)制在(zai) 70%-80%，過(guo)度匯合會(hui)導致接(jie)觸(chu)抑制和(he)分(fen)化。

三、汙染(ran)控制

1. 無菌操(cao)作

- 全程在(zai)超(chao)凈臺操(cao)作，使用(yong)壹次性(xing)耗材，避(bi)免(mian)交叉汙(wu)染(ran)。

- 培養(yang)基中可添加雙(shuang)抗(kang)，但(dan)長期(qi)使用(yong)可能影響(xiang)細(xi)胞(bao)活(huo)性(xing)。

2. 支原體檢(jian)測(ce)

- 定(ding)期(qi)檢(jian)測(ce)支原體(ti)汙(wu)染(ran)（如 PCR 法(fa)），汙(wu)染(ran)後需(xu)及(ji)時(shi)丟棄細(xi)胞(bao)。

四、狀態監(jian)控

1. 日常觀(guan)察(cha)

- 每(mei)天(tian)檢(jian)查(zha)細(xi)胞(bao)形態、密(mi)度(du)及(ji)培養(yang)基顏(yan)色(se)，及(ji)時(shi)更(geng)換(huan)培養(yang)基（通(tong)常每(mei) 2-3 天(tian)換(huan)液壹次）。

- 異常(chang)形態（如細(xi)胞(bao)變(bian)圓(yuan)、碎(sui)片增多(duo)）可(ke)能提(ti)示(shi)汙(wu)染(ran)或(huo)營養(yang)不(bu)足(zu)。

2. 傳(chuan)代與凍存

- 原(yuan)代細(xi)胞(bao)分(fen)裂(lie)次數(shu)有限（壹般(ban) 5-10 代），需(xu)及(ji)時(shi)凍存早(zao)期代次細(xi)胞(bao)。

- 凍存液建議(yi)使(shi)用(yong) DMSO+血(xue)清（或(huo)專用(yong)凍存培養(yang)基），梯(ti)度(du)降(jiang)溫(wen)後液氮保存。