【概(gai)要(yao)描述】大(da)鼠(shu)前列(lie)腺平(ping)滑肌細(xi)胞(bao)公司(si)正在出售的(de)產(chan)品(pin)：OK負鼠腎(shen)細(xi)胞(bao)人(ren)肝內膽(dan)管上皮細(xi)胞(bao)人肝外膽(dan)管上皮細(xi)胞(bao)人肝實質(zhi)細胞人肝星(xing)狀(zhuang)細(xi)胞(bao)人(ren)肝(gan)竇(dou)內皮(pi)細胞人(ren)肝(gan)Kuffer細胞人直(zhi)腸(chang)成纖維細(xi)胞(bao)人肝(gan)成纖維細(xi)胞(bao)人直(zhi)腸(chang)上皮細(xi)胞(bao)

大鼠前(qian)列(lie)腺平(ping)滑肌分離(li)自前列(lie)腺組織；前列(lie)腺（Prostate）是(shi)雄(xiong)性的(de)性腺(xian)器(qi)官(guan)；前列(lie)腺是(shi)不(bu)成對(dui)的(de)實質(zhi)性器(qi)宮(gong)，由(you)腺組織和肌組織構成。前(qian)列(lie)腺如(ru)栗子(zi)，底(di)朝上，與膀(pang)胱(guang)相貼(tie)，尖(jian)朝下(xia)，抵(di)泌(mi)尿(niao)生殖(zhi)膈，前面(mian)貼(tie)恥(chi)骨聯(lian)合，後(hou)面(mian)依(yi)直(zhi)腸(chang)。前列(lie)腺腺(xian)體的(de)中間有尿道(dao)穿(chuan)過(guo)，扼守著尿道(dao)上口(kou)，所(suo)以(yi)，前列(lie)腺有問(wen)題(ti)時，排尿首先(xian)受影響(xiang)。前(qian)列(lie)腺是(shi)機(ji)體(ti)非(fei)常少(shao)有的(de)，具(ju)有內、外雙重(zhong)分泌功(gong)能(neng)的(de)性分泌腺。作為(wei)外分泌腺，前列(lie)腺每(mei)天(tian)分泌前列(lie)腺液，是(shi)構成精液主要(yao)成分；作為(wei)內分泌腺，前列(lie)腺分泌的(de)激素稱(cheng)為(wei)“前列(lie)腺素"。前列(lie)腺平(ping)滑肌細(xi)胞(bao)是(shi)前(qian)列(lie)腺的(de)重(zhong)要(yao)結構組成細(xi)胞之壹(yi)，在機(ji)體(ti)的(de)正(zheng)常生(sheng)理過(guo)程中發揮著重(zhong)要(yao)作用(yong)。前列(lie)腺平(ping)滑肌細(xi)胞(bao)原代分離(li)培養(yang)3天(tian)後(hou)，可(ke)見(jian)細(xi)胞貼(tie)壁伸(shen)展(zhan)，細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)大(da)小(xiao)不(bu)壹(yi)，呈梭形(xing)、不(bu)規則形(xing)、三(san)角形(xing)或扇形(xing)，核卵圓(yuan)形(xing)、居(ju)中；2周後(hou)細胞匯(hui)合，多(duo)數細胞(bao)伸(shen)展(zhan)呈長梭(suo)形(xing)，胞漿(jiang)豐(feng)富，有分枝狀(zhuang)突(tu)起，細(xi)胞平(ping)行排列(lie)成單層(ceng)或部分區域多(duo)層重(zhong)疊生長，高低起伏(fu)；細胞(bao)密度低時，常交織成網(wang)狀(zhuang)；密度高時，則排列(lie)為(wei)旋渦(wo)狀(zhuang)或柵(zha)欄(lan)狀(zhuang)。傳(chuan)代後(hou)細胞生(sheng)長較快(kuai)，4-6天(tian)即(ji)可(ke)匯(hui)合，並(bing)保(bao)持上述形(xing)態(tai)學特征和生長(chang)特點(dian)。
方法簡(jian)介(jie)：

公司實驗室(shi)分離(li)的(de)大(da)鼠(shu)前(qian)列(lie)腺平(ping)滑肌采用yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)-膠(jiao)原(yuan)酶(mei)聯(lian)合消(xiao)化法結合差(cha)速(su)貼(tie)壁法制(zhi)備而(er)來，細(xi)胞總(zong)量約為(wei)5×10?cells/瓶。
質量檢(jian)測(ce)：

公司實驗室(shi)分離(li)的(de)大(da)鼠(shu)前(qian)列(lie)腺平(ping)滑肌經(jing)α-SMA免疫熒光鑒(jian)定，純度可(ke)達(da)90%以(yi)上，且不(bu)含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體(ti)、細菌、酵母(mu)和真菌(jun)等。

本(ben)公(gong)司(si)所(suo)有產品(pin)僅供科(ke)學實驗，不(bu)做(zuo)其(qi)他(ta)科(ke)學實驗外的(de)使(shi)用(yong)！

培養(yang)基(ji) 含(han)FBS、生長添(tian)加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液頻(pin)率 每(mei)2-3天(tian)換(huan)液壹(yi)次

生長特(te)性 貼(tie)壁

細胞形(xing)態(tai) 成纖維細(xi)胞(bao)樣(yang)

傳代特(te)性 可(ke)傳(chuan)5代左右(you)；3代以(yi)內狀(zhuang)態(tai)

消(xiao)化液 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)

培養(yang)條(tiao)件 氣(qi)相：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備工(gong)作(zuo)

1. 實驗器(qi)材準(zhun)備：準(zhun)備無(wu)菌的(de)培(pei)養(yang)皿(min)、培(pei)養(yang)瓶(ping)、移(yi)液管、離(li)心管、手術(shu)器械等(deng)，並(bing)進行高壓(ya)滅菌或其(qi)他(ta)合適的(de)消(xiao)毒(du)處理。

2. 試(shi)劑準(zhun)備：配(pei)制(zhi)或購(gou)買(mai)合適的(de)培(pei)養(yang)基(ji)、消(xiao)化酶(mei)（如(ru)、膠原(yuan)酶(mei)等(deng)）、胎(tai)牛血(xue)清(qing)、雙抗等(deng)試(shi)劑，確保(bao)其無(wu)菌且在有效期內。

3. 實驗動物或組織來源準(zhun)備：根(gen)據(ju)實驗需(xu)求(qiu)，選(xuan)擇(ze)合適的(de)動物並(bing)進行相應(ying)的(de)麻醉或處死(si)，獲(huo)取所(suo)需(xu)組織；或從(cong)已有的(de)組織樣(yang)本(ben)庫中獲取組織。

取材與(yu)處理

1. 取材：在(zai)無(wu)菌條(tiao)件下(xia)，迅(xun)速(su)取(qu)出目標(biao)組織，盡量減(jian)少(shao)對(dui)組織的(de)損(sun)傷(shang)，並(bing)去(qu)除多(duo)余的(de)脂肪、結締組織等非(fei)目的(de)組織。

2. 清(qing)洗：將(jiang)取出(chu)的(de)組織用預冷(leng)的(de)無(wu)菌PBS沖洗(xi)數(shu)次(ci)，以(yi)去(qu)除血(xue)液和雜質(zhi)。

3. 剪切(qie)：將(jiang)組織剪成約1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊(kuai)，以(yi)便後(hou)續消(xiao)化。

細胞分離(li)

1. 消(xiao)化：將(jiang)剪碎(sui)的(de)組織塊(kuai)放入(ru)含(han)有適量消(xiao)化酶(mei)的(de)離(li)心管中，在37℃恒溫(wen)搖(yao)床或培(pei)養(yang)箱(xiang)中消(xiao)化壹(yi)段時間(jian)。期間可(ke)輕(qing)輕(qing)搖晃(huang)離(li)心管，使消(xiao)化更均勻。

2. 終(zhong)止消(xiao)化：當組織塊(kuai)大部分被消(xiao)化成單細(xi)胞(bao)懸液或小(xiao)細(xi)胞(bao)團(tuan)時，加(jia)入(ru)含(han)血(xue)清(qing)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止消(xiao)化。

3. 過(guo)濾與(yu)離(li)心：用細胞篩(shai)過(guo)濾細(xi)胞懸(xuan)液，去(qu)除未(wei)消(xiao)化的(de)組織碎(sui)片(pian)，然後(hou)將(jiang)濾液以(yi)適當的(de)轉速(su)離(li)心，收(shou)集細(xi)胞(bao)沈(chen)澱(dian)。

細胞觀察(cha)與檢(jian)測(ce)

1. 日常觀察(cha)：每(mei)天(tian)用(yong)倒(dao)置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)觀察(cha)細胞的(de)形(xing)態(tai)、生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)、密度等，記(ji)錄細(xi)胞(bao)的(de)變化情(qing)況(kuang)，如(ru)發現(xian)細胞(bao)汙染(ran)或異常，及(ji)時采取相應(ying)措施(shi)。
2. 細(xi)胞(bao)計(ji)數與活力(li)檢(jian)測(ce)：在(zai)需(xu)要(yao)時，可(ke)采用臺盼(pan)藍染(ran)色等方(fang)法對(dui)細(xi)胞(bao)進(jin)行計數和活力(li)檢(jian)測(ce)，以(yi)了(le)解(jie)細(xi)胞(bao)的(de)生(sheng)長(chang)情(qing)況(kuang)和健康狀(zhuang)態(tai)。

壹(yi)、取材(cai)與(yu)分離(li)

1. 快速(su)操(cao)作

- 組織取材後(hou)需(xu)立(li)即處理，避免長(chang)時間(jian)暴(bao)露於室溫(wen)或非(fei)營(ying)養(yang)環境。

- 使用無(wu)菌 PBS 或生(sheng)理鹽(yan)水沖洗(xi)組織，去(qu)除血(xue)液、雜質(zhi)。

2. 消(xiao)化酶(mei)選(xuan)擇(ze)

- 根據(ju)組織類型(xing)選(xuan)擇(ze)消(xiao)化酶(mei)，避免過(guo)度消(xiao)化導(dao)致(zhi)細胞(bao)損(sun)傷(shang)。

- 消(xiao)化時間(jian)需(xu)嚴(yan)格控制(zhi)（通(tong)常 10-30 分鐘），可(ke)通(tong)過(guo)顯微(wei)鏡(jing)觀察(cha)細胞解離(li)狀(zhuang)態(tai)。

二、培養(yang)條(tiao)件優(you)化

1. 培養(yang)基(ji)選(xuan)擇(ze)

- 使用含(han)血(xue)清(qing)或特(te)定生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部分細胞需(xu)添(tian)加(jia)胰島素、EGF 等。

- 避免頻(pin)繁更(geng)換(huan)培養(yang)基(ji)品(pin)牌或批(pi)次(ci)，減(jian)少(shao)細胞(bao)適應(ying)壓(ya)力(li)。

2. 貼(tie)壁與傳(chuan)代

- 原代細(xi)胞(bao)貼(tie)壁能(neng)力(li)較弱(ruo)，可(ke)能(neng)需(xu)要(yao)包被培養(yang)皿(min)（如(ru)膠原(yuan)蛋(dan)白(bai)、多(duo)聚賴氨(an)酸(suan)）。

- 傳代時密度建議(yi)控制(zhi)在(zai) 70%-80%，過(guo)度匯(hui)合會導(dao)致(zhi)接觸(chu)抑(yi)制(zhi)和分化。

三(san)、汙染(ran)控制(zhi)

1. 無(wu)菌操(cao)作

- 全(quan)程在超凈臺操作(zuo)，使(shi)用壹(yi)次性耗材，避免交叉汙染(ran)。

- 培養(yang)基(ji)中可(ke)添(tian)加(jia)雙抗，但(dan)長期使用可(ke)能(neng)影響(xiang)細(xi)胞活(huo)性。

2. 支原體(ti)檢(jian)測(ce)

- 定期檢(jian)測(ce)支(zhi)原(yuan)體(ti)汙染(ran)（如(ru) PCR 法），汙染(ran)後(hou)需(xu)及(ji)時丟棄(qi)細胞(bao)。

四(si)、狀(zhuang)態(tai)監控

1. 日常觀察(cha)

- 每(mei)天(tian)檢(jian)查(zha)細(xi)胞形(xing)態(tai)、密度及培養(yang)基(ji)顏(yan)色(se)，及時更(geng)換(huan)培養(yang)基(ji)（通(tong)常每(mei) 2-3 天(tian)換(huan)液壹(yi)次）。

- 異常形(xing)態(tai)（如(ru)細胞(bao)變圓(yuan)、碎(sui)片(pian)增(zeng)多(duo)）可(ke)能(neng)提(ti)示(shi)汙染(ran)或營(ying)養(yang)不(bu)足(zu)。

2. 傳代與(yu)凍(dong)存(cun)

- 原代細(xi)胞(bao)分裂(lie)次數有限（壹(yi)般 5-10 代），需(xu)及(ji)時凍(dong)存(cun)早(zao)期代次(ci)細(xi)胞(bao)。

- 凍(dong)存(cun)液建議(yi)使用(yong) DMSO+血(xue)清(qing)（或專(zhuan)用(yong)凍(dong)存(cun)培養(yang)基(ji)），梯(ti)度降溫(wen)後(hou)液氮(dan)保(bao)存(cun)。