【概要(yao)描(miao)述(shu)】大(da)鼠牙乳頭(tou)細胞(bao)公司正在出(chu)售的產品(pin)：RERF-LC-Ad2非小細(xi)胞(bao)肺癌(ai)兔(tu)骨髓(sui)單(dan)核細胞(bao)兔脾淋(lin)巴細胞(bao)兔骨髓(sui)巨(ju)噬(shi)細胞(bao)兔脊(ji)髓(sui)微(wei)血管內皮細(xi)胞(bao)兔腦微(wei)血管內皮細(xi)胞(bao)兔腦動(dong)脈(mai)血管內皮細(xi)胞(bao)兔腦膜(mo)細胞(bao)兔腦皮(pi)層神經(jing)元細胞(bao)兔海(hai)馬神(shen)經(jing)元細胞(bao)

大(da)鼠牙乳頭(tou)分離(li)自(zi)牙乳頭(tou)組(zu)織；牙乳頭(tou)細胞(bao)來源(yuan)於外(wai)胚(pei)間充質，具有(you)多向(xiang)分化潛能(neng)，是體內分化為成(cheng)牙本質細胞(bao)的前(qian)體細胞(bao)，該細胞(bao)在牙發育和牙體牙髓(sui)損(sun)傷(shang)修(xiu)復過程(cheng)中起重(zhong)要(yao)作用。牙乳頭(tou)細胞(bao)為未(wei)分化的間充質細胞(bao)，有少(shao)量(liang)微(wei)細(xi)的膠(jiao)原纖維(wei)分散(san)在細(xi)胞(bao)外(wai)間隙(xi)。在鐘狀(zhuang)期(qi)，被成(cheng)釉器(qi)凹(ao)陷(xian)部(bu)包圍的外(wai)胚(pei)間葉(ye)組(zu)織增多(duo)，並(bing)出現(xian)細(xi)胞(bao)的分化。在(zai)內釉上皮(pi)的誘(you)導下，牙乳頭(tou)外(wai)層(ceng)細(xi)胞(bao)分化為高(gao)柱狀的成(cheng)牙本質細胞(bao)。這些細(xi)胞(bao)在切(qie)緣(yuan)或牙尖部(bu)為柱(zhu)狀，在牙頸部(bu)細胞(bao)尚(shang)未(wei)分化成(cheng)熟，為立方(fang)狀(zhuang)。牙乳頭(tou)在牙發育中有重(zhong)要(yao)作用。現(xian)已證明(ming)，牙乳頭(tou)是決(jue)定牙形(xing)狀(zhuang)的重(zhong)要(yao)因索。例如，將切牙的成(cheng)釉器(qi)與磨牙的牙乳頭(tou)重(zhong)新組(zu)合，結(jie)果形(xing)成(cheng)磨牙；與此相(xiang)反，切(qie)牙的牙乳頭(tou)與磨牙成(cheng)釉器(qi)重(zhong)新組(zu)合，結(jie)果形(xing)成(cheng)切(qie)牙。牙乳頭(tou)還(hai)可以(yi)誘(you)導非牙源性(xing)的口腔(qiang)上皮形(xing)成(cheng)成(cheng)釉器(qi)。
方(fang)法(fa)簡(jian)介(jie)：

公司實(shi)驗(yan)室分離(li)的大(da)鼠牙乳頭(tou)采(cai)用混合膠(jiao)原酶消(xiao)化法(fa)結(jie)合差(cha)速貼(tie)壁法(fa)制(zhi)備(bei)而(er)來(lai)，細(xi)胞(bao)總(zong)量(liang)約(yue)為5×10?cells/瓶(ping)。
質量(liang)檢測(ce)：

公司實(shi)驗(yan)室分離(li)的大(da)鼠牙乳頭(tou)經(jing)膠(jiao)原蛋白(bai)Ⅰ，純度可達(da)90%以(yi)上(shang)，且(qie)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母(mu)和(he)真(zhen)菌等。

本公司所有(you)產(chan)品僅(jin)供科學實(shi)驗(yan)，不做其他科學實(shi)驗(yan)外(wai)的使(shi)用！

培養基 含FBS、生長添加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液頻(pin)率 每2-3天換液壹次

生長特性(xing) 貼壁

細胞(bao)形(xing)態 梭(suo)形(xing)、多(duo)角(jiao)形(xing)

傳代(dai)特性(xing) 可傳(chuan)1-2代

消化液(ye) 0.25%yi蛋白(bai)酶

培養條(tiao)件 氣(qi)相(xiang)：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準備(bei)工(gong)作

1. 實(shi)驗(yan)器(qi)材(cai)準備(bei)：準備(bei)無(wu)菌的培養皿、培養瓶(ping)、移(yi)液管、離(li)心管、手術器(qi)械(xie)等，並(bing)進行(xing)高(gao)壓(ya)滅(mie)菌或其(qi)他(ta)合適(shi)的消毒(du)處(chu)理。

2. 試劑(ji)準備(bei)：配(pei)制(zhi)或(huo)購(gou)買合適(shi)的培養基、消化酶（如、膠(jiao)原酶等(deng)）、胎(tai)牛血清(qing)、雙(shuang)抗(kang)等試劑(ji)，確(que)保其(qi)無菌且(qie)在有效(xiao)期內。

3. 實(shi)驗(yan)動(dong)物或組(zu)織來源準備(bei)：根(gen)據實(shi)驗(yan)需求，選(xuan)擇合適(shi)的動(dong)物並(bing)進行(xing)相(xiang)應的麻醉或(huo)處(chu)死，獲(huo)取(qu)所需(xu)組(zu)織；或從已有的組(zu)織樣本庫中獲取組(zu)織。

取材(cai)與(yu)處(chu)理(li)

1. 取材(cai)：在(zai)無(wu)菌條(tiao)件下，迅(xun)速(su)取出(chu)目標(biao)組(zu)織，盡量(liang)減(jian)少(shao)對組(zu)織的損傷(shang)，並(bing)去除多余的脂肪(fang)、結(jie)締組(zu)織等非目(mu)的組(zu)織。

2. 清洗(xi)：將取(qu)出(chu)的組(zu)織用預(yu)冷(leng)的無菌PBS沖洗(xi)數次，以(yi)去(qu)除血液(ye)和(he)雜(za)質。

3. 剪切(qie)：將(jiang)組(zu)織剪成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的小塊(kuai)，以(yi)便後(hou)續(xu)消化。

細胞(bao)分離(li)

1. 消化：將(jiang)剪碎(sui)的組(zu)織塊(kuai)放入(ru)含有(you)適量(liang)消化酶的離(li)心管中，在37℃恒(heng)溫搖床(chuang)或(huo)培養箱中消化壹段時間。期(qi)間可(ke)輕(qing)輕搖(yao)晃(huang)離(li)心管，使(shi)消化更(geng)均(jun)勻。

2. 終止(zhi)消化：當(dang)組(zu)織塊(kuai)大(da)部(bu)分被消化成(cheng)單(dan)細胞(bao)懸液(ye)或小細(xi)胞(bao)團(tuan)時，加(jia)入含(han)血清(qing)的培養基終止(zhi)消化。

3. 過濾與(yu)離(li)心：用細(xi)胞(bao)篩(shai)過(guo)濾細(xi)胞(bao)懸液(ye)，去除未(wei)消化的組(zu)織碎片(pian)，然(ran)後(hou)將濾液(ye)以(yi)適(shi)當(dang)的轉速離(li)心，收(shou)集細胞(bao)沈澱(dian)。

細胞(bao)觀察(cha)與檢測(ce)

1. 日常(chang)觀察(cha)：每天用倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀察(cha)細胞(bao)的形(xing)態、生長狀態、密(mi)度等，記(ji)錄細(xi)胞(bao)的變化情(qing)況，如發現細胞(bao)汙染(ran)或異(yi)常(chang)，及(ji)時采(cai)取(qu)相(xiang)應措施(shi)。
2. 細(xi)胞(bao)計數與活力(li)檢(jian)測(ce)：在(zai)需要(yao)時，可采(cai)用臺盼(pan)藍染(ran)色等(deng)方(fang)法(fa)對(dui)細(xi)胞(bao)進行(xing)計(ji)數和活力(li)檢(jian)測(ce)，以(yi)了(le)解(jie)細胞(bao)的生長情(qing)況和健(jian)康狀(zhuang)態。

壹、取材(cai)與(yu)分離(li)

1. 快(kuai)速(su)操作

- 組(zu)織取材(cai)後(hou)需立即(ji)處(chu)理(li)，避(bi)免長時間暴露於(yu)室溫或非營(ying)養環境(jing)。

- 使(shi)用無(wu)菌 PBS 或生(sheng)理(li)鹽水沖(chong)洗組(zu)織，去除血液(ye)、雜(za)質。

2. 消化酶選(xuan)擇

- 根據組(zu)織類(lei)型選(xuan)擇消化酶，避(bi)免過(guo)度消化導(dao)致細胞(bao)損傷(shang)。

- 消化時間需(xu)嚴(yan)格(ge)控制（通常 10-30 分鐘），可(ke)通過顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀察(cha)細胞(bao)解離(li)狀態。

二、培養條(tiao)件優化

1. 培養基選(xuan)擇

- 使(shi)用含(han)血清(qing)或(huo)特定(ding)生長因子的培養基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分細胞(bao)需添加(jia)胰島(dao)素(su)、EGF 等。

- 避(bi)免頻(pin)繁(fan)更換培養基品牌或批(pi)次，減(jian)少(shao)細胞(bao)適應(ying)壓力(li)。

2. 貼壁與傳(chuan)代(dai)

- 原代細(xi)胞(bao)貼壁能力(li)較(jiao)弱(ruo)，可(ke)能(neng)需(xu)要(yao)包被(bei)培養皿（如膠(jiao)原蛋白(bai)、多(duo)聚賴(lai)氨酸）。

- 傳代(dai)時密(mi)度建議(yi)控(kong)制在 70%-80%，過度匯(hui)合會(hui)導致(zhi)接觸抑制(zhi)和(he)分化。

三、汙染(ran)控制(zhi)

1. 無菌操作

- 全程(cheng)在超(chao)凈臺操(cao)作，使(shi)用壹次性(xing)耗材(cai)，避(bi)免交叉汙染(ran)。

- 培養基中可添加(jia)雙抗(kang)，但長期使(shi)用可(ke)能影(ying)響(xiang)細胞(bao)活性(xing)。

2. 支原體檢測(ce)

- 定期(qi)檢測(ce)支(zhi)原體汙染(ran)（如 PCR 法(fa)），汙染(ran)後(hou)需及(ji)時丟棄(qi)細(xi)胞(bao)。

四、狀態監控(kong)

1. 日常(chang)觀察(cha)

- 每天檢(jian)查細胞(bao)形(xing)態、密(mi)度及(ji)培養基顏色(se)，及(ji)時更換培養基（通常每 2-3 天換液壹次）。

- 異常(chang)形(xing)態（如細胞(bao)變圓(yuan)、碎片(pian)增多(duo)）可(ke)能提示汙染(ran)或營(ying)養不足。

2. 傳代(dai)與凍存

- 原代細(xi)胞(bao)分裂次數有限(xian)（壹般 5-10 代），需(xu)及(ji)時凍存早期代次細(xi)胞(bao)。

- 凍存液建議(yi)使(shi)用 DMSO+血清(qing)（或(huo)專用凍存培養基），梯度降(jiang)溫後(hou)液氮保(bao)存。