【概要描述(shu)】大(da)鼠背(bei)根(gen)神(shen)經元細胞(bao)公(gong)司(si)正在出售(shou)的產品(pin)：RERF-LC-AI非(fei)小細胞(bao)肺(fei)癌兔(tu)神經膠質(zhi)細胞(bao)兔(tu)腦動(dong)脈平(ping)滑(hua)肌(ji)細胞(bao)兔(tu)神經幹(gan)細胞(bao)兔(tu)腦血(xue)管(guan)成(cheng)纖維細胞(bao)兔(tu)DRG神經元細胞(bao)兔(tu)下丘腦神(shen)經元細胞(bao)兔(tu)背根(gen)神(shen)經節細胞(bao)兔(tu)三(san)叉神經星形膠(jiao)質(zhi)細胞(bao)兔(tu)脊髓星形膠(jiao)質(zhi)細胞(bao)

大(da)鼠背(bei)根(gen)神(shen)經元分(fen)離自(zi)脊椎背根(gen)神(shen)經節；感(gan)覺(jiao)神(shen)經母細胞(bao)發(fa)出(chu)軸(zhou)突，呈(cheng)束(shu)狀(zhuang)，左右(you)對稱(cheng)地(di)從神經管(guan)的(de)背部(bu)進入(ru)，此時的脊神經節即(ji)改(gai)稱(cheng)為(wei)背根(gen)神(shen)經節。神(shen)經系統最基本(ben)的結構和功(gong)能(neng)單(dan)位(wei)是神經元，即(ji)神(shen)經細胞(bao)，其(qi)大(da)小(xiao)和外(wai)觀(guan)在中樞神經系統中差異很大(da)。但都(dou)具有(you)胞(bao)體(ti)和樹(shu)突、軸(zhou)突。胞(bao)體(ti)又(you)叫核周(zhou)體(ti)，內(nei)含神經絲、微(wei)管(guan)、內(nei)質(zhi)網(wang)、遊離核糖體(ti)和壹(yi)個(ge)有(you)明(ming)顯(xian)核仁(ren)的(de)核。壹(yi)些(xie)大(da)神(shen)經元突(tu)起(qi)的粗(cu)面內(nei)質(zhi)網(wang)可用(yong)Nissl染(ran)色顯(xian)示(shi)，在光鏡(jing)下(xia)是灰藍色斑塊(kuai)狀(zhuang)，稱(cheng)為(wei)尼氏小體(ti)。樹(shu)突和軸(zhou)突是(shi)神經元的(de)突(tu)起，能(neng)在神經元之(zhi)間傳遞(di)電沖動(dong)，突(tu)起的(de)大(da)小(xiao)和形態各不(bu)相同(tong)，很難(nan)用(yong)常規的顯(xian)微鏡(jing)鑒(jian)別(bie)。脊髓背根(gen)神(shen)經節是(shi)周(zhou)圍神(shen)經的主(zhu)要傳入(ru)神(shen)經元，是(shi)感(gan)覺(jiao)信(xin)號(hao)傳導(dao)的(de)中繼站(zhan)。背(bei)根(gen)神(shen)經元細胞(bao)的(de)獲取較為(wei)困難(nan)，需要在盡可能(neng)短的時間內(nei)通過(guo)解(jie)剖(pou)顯(xian)微鏡(jing)獲得(de)壹(yi)定(ding)量(liang)的背根(gen)神(shen)經節組(zu)織(zhi)。神(shen)經組(zu)織(zhi)體(ti)外(wai)培養(yang)方(fang)法是當代神(shen)經科(ke)學(xue)壹項很(hen)有(you)價值(zhi)的研究手(shou)段，背根(gen)神(shen)經節富(fu)含周(zhou)圍神(shen)經系統感覺(jiao)神(shen)經元，已(yi)廣(guang)泛(fan)用(yong)於軸(zhou)突的(de)導(dao)向(xiang)及(ji)再生(sheng)、中樞及(ji)周(zhou)圍神(shen)經系統的髓鞘形成(cheng)、神(shen)經營(ying)養(yang)因(yin)子(zi)作(zuo)用(yong)及(ji)受(shou)體(ti)分(fen)布、神(shen)經細胞(bao)衰老(lao)機(ji)制、基因治(zhi)療(liao)、組(zu)織(zhi)工(gong)程等神(shen)經科(ke)學(xue)的研究。
方(fang)法(fa)簡(jian)介(jie)：

公(gong)司(si)實(shi)驗室分(fen)離的(de)大(da)鼠背(bei)根(gen)神(shen)經元采(cai)用(yong)膠(jiao)原(yuan)酶-聯(lian)合消(xiao)化(hua)法(fa)、神(shen)經元專(zhuan)用(yong)培養(yang)基培養(yang)篩(shai)選結合化(hua)學(xue)試(shi)劑(ji)抑制法(fa)制備而(er)來，細胞(bao)總量(liang)約為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量(liang)檢(jian)測(ce)：

公(gong)司(si)實(shi)驗室分(fen)離的(de)大(da)鼠背(bei)根(gen)神(shen)經元經β-Tubulin免(mian)疫熒光鑒(jian)定，純度可(ke)達90%以上，且不(bu)含有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體(ti)、細菌(jun)、酵(jiao)母和真(zhen)菌(jun)等。

本(ben)公司(si)所(suo)有(you)產(chan)品(pin)僅(jin)供(gong)科(ke)學(xue)實驗，不(bu)做(zuo)其(qi)他(ta)科(ke)學(xue)實驗外的(de)使(shi)用(yong)！

包(bao)被(bei)條(tiao)件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yang)基 含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液頻(pin)率(lv) 每(mei)2-3天(tian)換液壹(yi)次(ci)

生(sheng)長特(te)性(xing) 貼(tie)壁(bi)

細胞(bao)形態 神(shen)經元細胞(bao)樣(yang)

傳代特(te)性(xing) 屬(shu)於終(zhong)末分(fen)化(hua)細胞(bao)；屬(shu)於不(bu)增(zeng)殖細胞(bao)群(qun)

消(xiao)化(hua)液 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)

培養(yang)條(tiao)件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

準備(bei)工(gong)作(zuo)

1. 實(shi)驗(yan)器(qi)材準備(bei)：準備(bei)無(wu)菌(jun)的(de)培養(yang)皿(min)、培養(yang)瓶(ping)、移液管(guan)、離(li)心管(guan)、手(shou)術器(qi)械等，並進(jin)行(xing)高(gao)壓(ya)滅(mie)菌(jun)或(huo)其(qi)他(ta)合適的消(xiao)毒處(chu)理(li)。

2. 試(shi)劑(ji)準備(bei)：配(pei)制(zhi)或(huo)購買合適的培養(yang)基、消化(hua)酶(mei)（如、膠(jiao)原(yuan)酶等）、胎牛血(xue)清、雙(shuang)抗(kang)等試(shi)劑(ji)，確保其(qi)無菌(jun)且(qie)在有(you)效期內(nei)。

3. 實(shi)驗(yan)動(dong)物(wu)或組(zu)織(zhi)來(lai)源準備(bei)：根(gen)據(ju)實(shi)驗(yan)需求，選擇(ze)合適的動(dong)物(wu)並進(jin)行(xing)相應的(de)麻醉(zui)或(huo)處(chu)死(si)，獲取所需組(zu)織(zhi)；或(huo)從已(yi)有(you)的(de)組(zu)織(zhi)樣(yang)本(ben)庫中獲取組(zu)織(zhi)。

取材與處理(li)

1. 取材：在無菌(jun)條(tiao)件下，迅(xun)速取出目(mu)標(biao)組(zu)織(zhi)，盡(jin)量減(jian)少對組(zu)織(zhi)的(de)損傷，並去(qu)除多余(yu)的(de)脂肪(fang)、結締組(zu)織(zhi)等非(fei)目的(de)組(zu)織(zhi)。

2. 清(qing)洗：將(jiang)取出的(de)組(zu)織(zhi)用(yong)預(yu)冷(leng)的(de)無菌(jun)PBS沖洗數次(ci)，以去除血(xue)液和雜(za)質(zhi)。

3. 剪(jian)切(qie)：將(jiang)組(zu)織(zhi)剪(jian)成約1 - 2mm³的小塊(kuai)，以(yi)便(bian)後(hou)續消(xiao)化(hua)。

細胞(bao)分(fen)離

1. 消(xiao)化(hua)：將(jiang)剪碎的組(zu)織(zhi)塊(kuai)放(fang)入(ru)含有(you)適量消(xiao)化(hua)酶(mei)的(de)離(li)心管(guan)中，在37℃恒溫搖(yao)床(chuang)或培養(yang)箱(xiang)中消化(hua)壹(yi)段時間。期間可輕(qing)輕搖(yao)晃(huang)離心管(guan)，使(shi)消化(hua)更(geng)均(jun)勻(yun)。

2. 終(zhong)止(zhi)消化(hua)：當組(zu)織(zhi)塊(kuai)大(da)部(bu)分(fen)被消(xiao)化(hua)成(cheng)單(dan)細胞(bao)懸液或(huo)小(xiao)細胞(bao)團時(shi)，加(jia)入(ru)含血(xue)清的(de)培養(yang)基終(zhong)止(zhi)消化(hua)。

3. 過(guo)濾與離心：用(yong)細胞(bao)篩(shai)過(guo)濾細胞(bao)懸液，去(qu)除未消化(hua)的(de)組(zu)織(zhi)碎(sui)片，然後(hou)將(jiang)濾液以(yi)適當的(de)轉(zhuan)速離(li)心，收集細胞(bao)沈(chen)澱(dian)。

細胞(bao)觀(guan)察(cha)與檢(jian)測(ce)

1. 日(ri)常觀察：每(mei)天(tian)用(yong)倒置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)觀(guan)察細胞(bao)的(de)形態、生(sheng)長狀(zhuang)態、密度等，記錄(lu)細胞(bao)的(de)變化(hua)情(qing)況(kuang)，如發(fa)現細胞(bao)汙染(ran)或異常，及(ji)時采(cai)取相應措(cuo)施。
2. 細胞(bao)計(ji)數(shu)與活力檢(jian)測(ce)：在需要時(shi)，可采用(yong)臺(tai)盼(pan)藍染(ran)色等方(fang)法(fa)對細胞(bao)進(jin)行(xing)計(ji)數(shu)和活(huo)力檢(jian)測(ce)，以(yi)了解(jie)細胞(bao)的(de)生(sheng)長情(qing)況(kuang)和健康(kang)狀(zhuang)態。

壹(yi)、取材與分(fen)離

1. 快(kuai)速(su)操(cao)作(zuo)

- 組(zu)織(zhi)取材後(hou)需立即處理(li)，避(bi)免(mian)長時(shi)間暴(bao)露於室溫(wen)或非(fei)營(ying)養(yang)環(huan)境。

- 使(shi)用(yong)無(wu)菌(jun) PBS 或(huo)生(sheng)理鹽水沖洗組(zu)織(zhi)，去(qu)除血(xue)液、雜(za)質(zhi)。

2. 消(xiao)化(hua)酶(mei)選擇(ze)

- 根(gen)據(ju)組(zu)織(zhi)類(lei)型(xing)選擇(ze)消(xiao)化(hua)酶(mei)，避(bi)免(mian)過度消(xiao)化(hua)導(dao)致細胞(bao)損傷。

- 消(xiao)化(hua)時(shi)間需嚴格(ge)控(kong)制（通常 10-30 分(fen)鐘），可(ke)通過(guo)顯(xian)微鏡(jing)觀(guan)察細胞(bao)解(jie)離(li)狀(zhuang)態。

二(er)、培養(yang)條(tiao)件優(you)化(hua)

1. 培養(yang)基選擇(ze)

- 使(shi)用(yong)含血(xue)清或(huo)特(te)定生(sheng)長因(yin)子(zi)的(de)培養(yang)基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分(fen)細胞(bao)需添加(jia)胰(yi)島(dao)素(su)、EGF 等。

- 避(bi)免(mian)頻繁(fan)更(geng)換培養(yang)基品牌(pai)或(huo)批次(ci)，減少細胞(bao)適應壓(ya)力。

2. 貼(tie)壁(bi)與傳代

- 原(yuan)代細胞(bao)貼(tie)壁(bi)能(neng)力較弱，可能(neng)需要包(bao)被培養(yang)皿(min)（如膠(jiao)原(yuan)蛋白(bai)、多聚(ju)賴氨(an)酸）。

- 傳代時(shi)密度建(jian)議控(kong)制在 70%-80%，過度匯(hui)合會(hui)導(dao)致接觸抑制和分(fen)化(hua)。

三(san)、汙染(ran)控(kong)制

1. 無(wu)菌(jun)操(cao)作(zuo)

- 全(quan)程在超凈臺操(cao)作(zuo)，使用(yong)壹(yi)次(ci)性(xing)耗材，避免(mian)交叉汙染(ran)。

- 培養(yang)基中可添加(jia)雙(shuang)抗(kang)，但長期(qi)使用(yong)可(ke)能(neng)影響(xiang)細胞(bao)活(huo)性(xing)。

2. 支(zhi)原(yuan)體(ti)檢(jian)測(ce)

- 定(ding)期(qi)檢(jian)測(ce)支(zhi)原體(ti)汙染(ran)（如 PCR 法(fa)），汙染(ran)後(hou)需及(ji)時丟(diu)棄細胞(bao)。

四(si)、狀(zhuang)態監控(kong)

1. 日(ri)常觀察

- 每(mei)天(tian)檢(jian)查(zha)細胞(bao)形態、密度及(ji)培養(yang)基顏色，及(ji)時更(geng)換培養(yang)基（通常每(mei) 2-3 天(tian)換液壹(yi)次(ci)）。

- 異常形態（如細胞(bao)變圓(yuan)、碎(sui)片增多）可(ke)能(neng)提(ti)示(shi)汙染(ran)或營(ying)養(yang)不(bu)足(zu)。

2. 傳代與凍存

- 原(yuan)代細胞(bao)分(fen)裂(lie)次(ci)數有(you)限(xian)（壹(yi)般 5-10 代），需及(ji)時凍存早(zao)期代次(ci)細胞(bao)。

- 凍存液建(jian)議(yi)使用(yong) DMSO+血(xue)清（或(huo)專(zhuan)用(yong)凍存培養(yang)基），梯(ti)度降(jiang)溫(wen)後(hou)液氮(dan)保存(cun)。