【概要描(miao)述(shu)】人(ren)角膜(mo)上皮細(xi)胞公司(si)正在出售(shou)的產品(pin)：5-8F/LUC (STR)鼻咽(yan)癌細胞DH82 (犬巨(ju)噬(shi)細(xi)胞/狗(gou)腎惡(e)性(xing)組(zu)織(zhi)細(xi)胞增生癥細(xi)胞)MDCK [NBL-2] (犬腎細(xi)胞)Super Tube (狗(gou)腎細(xi)胞)細胞系 >> 豬(zhu)IBRS-2 [IB-RS-2] (豬腎細(xi)胞)PIEC (豬髖(kuan)動脈(mai)內(nei)皮細(xi)胞)PK-15 (豬腎細(xi)胞)ST (豬睪(gao)丸細胞)PED (豬內(nei)皮細(xi)胞)

本(ben)公司(si)所有(you)產品(pin)僅(jin)供(gong)科(ke)學實(shi)驗，不(bu)做其(qi)他科(ke)學實(shi)驗外的(de)使(shi)用(yong)！

人(ren)角膜(mo)上皮分離自眼(yan)角膜(mo)組(zu)織(zhi)；角膜(mo)位(wei)於(yu)眼(yan)球前壁的(de)壹(yi)層(ceng)透(tou)明(ming)膜(mo)，約占纖(xian)維(wei)膜(mo)的(de)前1/6，從後面看角膜(mo)呈(cheng)正(zheng)圓(yuan)形，從前面看為(wei)橫橢圓(yuan)形。角膜(mo)厚(hou)度(du)各(ge)部分不(bu)盡相(xiang)同，中央(yang)部最薄。角膜(mo)有(you)十分敏(min)感(gan)的(de)神經(jing)末梢(shao)，如(ru)有(you)外物接(jie)觸(chu)角膜(mo)，眼(yan)瞼便會不(bu)由自(zi)主地合上以(yi)保護眼(yan)睛(jing)。為(wei)了(le)保持透明(ming)，角膜(mo)並沒(mei)有(you)血(xue)管，透(tou)過外界(jie)空氣、淚液(ye)及房(fang)水(shui)獲取(qu)養份(fen)及氧(yang)氣(qi)。角膜(mo)分為(wei)五(wu)層，由(you)前向後依次(ci)為(wei)：上皮細(xi)胞層、前彈(dan)力層(ceng)、基質層、後彈(dan)力層(ceng)、內(nei)皮細(xi)胞層。其(qi)主要功能(neng)如下：①角膜(mo)是(shi)的(de)無(wu)血(xue)管的(de)組織(zhi)，具(ju)有(you)透(tou)明(ming)的特(te)性和(he)合(he)成(cheng)許(xu)多蛋(dan)白的(de)功能(neng)，分三(san)層(ceng)細(xi)胞層，外層(ceng)即是(shi)上皮細(xi)胞；②角膜(mo)上皮細(xi)胞能參(can)與先天(tian)性(xing)免(mian)疫，能感(gan)應(ying)病原體存(cun)在並發出信(xin)號(hao)從而激(ji)活角膜(mo)防(fang)禦系(xi)統(tong)；③角膜(mo)上皮細(xi)胞能高(gao)效(xiao)表達醛(quan)脫(tuo)氫(qing)酶。角膜(mo)上皮細(xi)胞的體外培(pei)養(yang)對研(yan)究角膜(mo)的(de)生理學、病理學、免(mian)疫學以(yi)及分子生物學都是(shi)極(ji)為(wei)重(zhong)要的手(shou)段(duan)，常(chang)用(yong)於(yu)研究細(xi)胞代謝產物、病毒感染(ran)、各(ge)種(zhong)生長因子和(he)藥(yao)物對(dui)細(xi)胞生長的影響(xiang)。
方法(fa)簡介：

公(gong)司(si)實(shi)驗室分離的人(ren)角膜(mo)上皮采(cai)用(yong)yi蛋(dan)白酶-膠(jiao)原(yuan)酶混(hun)合(he)消化(hua)法(fa)結(jie)合(he)差速(su)貼壁法(fa)，並通(tong)過(guo)上皮細(xi)胞專用(yong)培(pei)養基培養篩選制備(bei)而來(lai)，細胞總量(liang)約為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量(liang)檢測：

公(gong)司(si)實(shi)驗室分離的人(ren)角膜(mo)上皮經(jing)PCK免(mian)疫熒光鑒(jian)定(ding)，純(chun)度(du)可(ke)達90%以(yi)上，且不(bu)含有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體、細(xi)菌(jun)、酵(jiao)母和(he)真(zhen)菌(jun)等(deng)。

包(bao)被條件 鼠(shu)尾膠(jiao)原(yuan)Ⅰ（2-5μg/cm2）

培(pei)養基 含(han)FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液(ye)頻(pin)率(lv) 每(mei)2-3天(tian)換液(ye)壹(yi)次(ci)

生長特(te)性 貼(tie)壁

細(xi)胞形態 上皮細(xi)胞樣

傳代特(te)性 可(ke)傳2-3代

消(xiao)化液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白酶

培(pei)養條(tiao)件 氣(qi)相：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工作(zuo)

1. 實(shi)驗器材(cai)準(zhun)備(bei)：準備(bei)無菌(jun)的(de)培(pei)養(yang)皿、培養(yang)瓶(ping)、移(yi)液(ye)管(guan)、離心管(guan)、手(shou)術(shu)器械(xie)等(deng)，並進(jin)行高(gao)壓滅菌(jun)或(huo)其(qi)他(ta)合適(shi)的(de)消(xiao)毒處理。

2. 試(shi)劑(ji)準(zhun)備(bei)：配制(zhi)或(huo)購買(mai)合(he)適(shi)的(de)培(pei)養基、消化酶（如(ru)、膠(jiao)原酶等(deng)）、胎(tai)牛(niu)血(xue)清、雙(shuang)抗等(deng)試(shi)劑(ji)，確(que)保其無菌(jun)且在有(you)效(xiao)期內(nei)。

3. 實(shi)驗動物或(huo)組(zu)織(zhi)來(lai)源準(zhun)備(bei)：根據(ju)實(shi)驗需(xu)求(qiu)，選擇合(he)適(shi)的(de)動物並進(jin)行相(xiang)應的(de)麻醉(zui)或處(chu)死，獲(huo)取(qu)所需(xu)組(zu)織(zhi)；或(huo)從已有(you)的(de)組織(zhi)樣(yang)本庫中獲(huo)取(qu)組織(zhi)。

取(qu)材與(yu)處(chu)理

1. 取(qu)材：在無菌(jun)條(tiao)件下，迅(xun)速(su)取(qu)出目(mu)標(biao)組(zu)織(zhi)，盡(jin)量(liang)減少(shao)對(dui)組織(zhi)的(de)損傷，並去(qu)除多(duo)余(yu)的脂肪(fang)、結(jie)締(di)組織(zhi)等(deng)非目的(de)組織(zhi)。

2. 清(qing)洗(xi)：將取(qu)出的(de)組(zu)織(zhi)用(yong)預(yu)冷的無菌(jun)PBS沖(chong)洗(xi)數次(ci)，以(yi)去(qu)除血(xue)液(ye)和(he)雜(za)質(zhi)。

3. 剪(jian)切：將組(zu)織(zhi)剪(jian)成約1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊(kuai)，以(yi)便後續(xu)消化(hua)。

細(xi)胞分離

1. 消(xiao)化：將(jiang)剪(jian)碎(sui)的組(zu)織(zhi)塊(kuai)放(fang)入(ru)含有(you)適(shi)量(liang)消化酶的(de)離心管(guan)中，在37℃恒溫(wen)搖床(chuang)或培(pei)養箱中消(xiao)化(hua)壹(yi)段(duan)時(shi)間。期間可(ke)輕(qing)輕(qing)搖晃(huang)離心管(guan)，使(shi)消化更(geng)均(jun)勻(yun)。

2. 終止消化：當(dang)組織(zhi)塊(kuai)大(da)部分被消化(hua)成(cheng)單細胞懸液(ye)或(huo)小細(xi)胞團時(shi)，加入(ru)含血(xue)清的(de)培養(yang)基終止消化。

3. 過(guo)濾與(yu)離心：用(yong)細(xi)胞篩過濾(lv)細(xi)胞懸液(ye)，去(qu)除未(wei)消化(hua)的組(zu)織(zhi)碎(sui)片(pian)，然(ran)後將(jiang)濾液(ye)以(yi)適(shi)當(dang)的轉(zhuan)速(su)離心，收集(ji)細胞沈(chen)澱(dian)。

細(xi)胞觀(guan)察與檢測

1. 日常觀(guan)察：每天(tian)用(yong)倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀(guan)察細胞的形態、生長狀(zhuang)態、密度等(deng)，記錄(lu)細胞的變(bian)化情況，如發現細(xi)胞汙染(ran)或(huo)異常，及時(shi)采取(qu)相應(ying)措施。
2. 細(xi)胞計(ji)數與(yu)活(huo)力檢測：在需(xu)要時(shi)，可(ke)采用(yong)臺(tai)盼(pan)藍染(ran)色等(deng)方法(fa)對細胞進(jin)行計(ji)數和(he)活(huo)力檢測，以(yi)了(le)解細(xi)胞的生長情況和(he)健康狀(zhuang)態。

壹(yi)、取(qu)材與(yu)分離

1. 快速(su)操(cao)作(zuo)

- 組(zu)織(zhi)取(qu)材後需(xu)立(li)即處理，避免(mian)長時(shi)間暴(bao)露於(yu)室溫(wen)或非營(ying)養(yang)環(huan)境(jing)。

- 使(shi)用(yong)無(wu)菌(jun) PBS 或(huo)生理鹽(yan)水沖(chong)洗(xi)組織(zhi)，去(qu)除血(xue)液(ye)、雜(za)質。

2. 消(xiao)化酶選擇

- 根(gen)據(ju)組(zu)織(zhi)類(lei)型(xing)選擇消(xiao)化酶，避免(mian)過度消(xiao)化(hua)導(dao)致細(xi)胞損傷。

- 消(xiao)化時(shi)間需(xu)嚴(yan)格控(kong)制（通(tong)常(chang) 10-30 分鐘(zhong)），可(ke)通(tong)過(guo)顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀(guan)察細胞解離狀(zhuang)態。

二、培養(yang)條件優化(hua)

1. 培(pei)養基選擇

- 使(shi)用(yong)含(han)血(xue)清或(huo)特(te)定(ding)生長因子的培養基（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分細(xi)胞需(xu)添(tian)加胰(yi)島(dao)素、EGF 等(deng)。

- 避免(mian)頻(pin)繁更(geng)換培(pei)養基品牌(pai)或(huo)批次(ci)，減少(shao)細(xi)胞適(shi)應(ying)壓(ya)力。

2. 貼(tie)壁與(yu)傳代

- 原(yuan)代細胞貼壁(bi)能力較(jiao)弱(ruo)，可(ke)能需(xu)要包(bao)被培養(yang)皿(min)（如膠(jiao)原蛋(dan)白、多(duo)聚(ju)賴氨(an)酸）。

- 傳代時(shi)密度(du)建議(yi)控制(zhi)在 70%-80%，過度(du)匯(hui)合(he)會導(dao)致接(jie)觸(chu)抑制(zhi)和(he)分化(hua)。

三(san)、汙染(ran)控(kong)制(zhi)

1. 無(wu)菌(jun)操(cao)作(zuo)

- 全(quan)程(cheng)在超凈(jing)臺(tai)操(cao)作(zuo)，使(shi)用(yong)壹(yi)次(ci)性(xing)耗(hao)材，避免(mian)交叉(cha)汙染(ran)。

- 培(pei)養基中可(ke)添加雙(shuang)抗，但長期使用(yong)可(ke)能影響(xiang)細胞活性(xing)。

2. 支(zhi)原體檢測

- 定(ding)期檢測支原體汙(wu)染(ran)（如(ru) PCR 法(fa)），汙染(ran)後需(xu)及時(shi)丟棄(qi)細胞。

四(si)、狀(zhuang)態監控

1. 日常觀(guan)察

- 每(mei)天(tian)檢查細(xi)胞形態、密度及培(pei)養(yang)基顏(yan)色，及時(shi)更(geng)換培(pei)養基（通(tong)常(chang)每(mei) 2-3 天(tian)換液(ye)壹(yi)次(ci)）。

- 異常形態（如細胞變圓(yuan)、碎(sui)片(pian)增多）可(ke)能提示汙染(ran)或(huo)營(ying)養(yang)不(bu)足。

2. 傳代與凍(dong)存

- 原(yuan)代細胞分裂(lie)次(ci)數(shu)有(you)限(xian)（壹(yi)般(ban) 5-10 代），需(xu)及時(shi)凍存(cun)早(zao)期代次細(xi)胞。

- 凍(dong)存液(ye)建議(yi)使用(yong) DMSO+血(xue)清（或(huo)專用(yong)凍(dong)存培(pei)養基），梯度降溫(wen)後液(ye)氮(dan)保存。