【概要(yao)描述(shu)】人(ren)晶狀(zhuang)體(ti)上(shang)皮(pi)細(xi)胞公司正(zheng)在出(chu)售(shou)的產品：6-10b (STR)鼻咽癌細胞BS-C-1 (非洲(zhou)綠(lv)猴腎細(xi)胞)COS-1 (非洲(zhou)綠(lv)猴SV40轉(zhuan)化的(de)腎細(xi)胞)COS-7 (非洲(zhou)綠(lv)猴SV40轉(zhuan)化的(de)腎細(xi)胞)LLC-MK2 (恒河(he)猴腎細(xi)胞)RF/6A (猴脈(mai)絡(luo)膜-視(shi)網(wang)膜內皮(pi)細(xi)胞)Vero (非洲(zhou)綠(lv)猴腎細(xi)胞)B95-8 (絨猴EB病(bing)毒轉(zhuan)化的(de)白(bai)細(xi)胞)MA-104 [MA 104; MA104] (非洲(zhou)綠(lv)猴胚(pei)胎腎細(xi)胞)CV

人(ren)晶狀(zhuang)體(ti)上(shang)皮(pi)分(fen)離(li)自晶狀(zhuang)體(ti)組織；晶狀(zhuang)體(ti)源(yuan)自(zi)胚(pei)胎發育(yu)外胚(pei)層，僅(jin)含(han)有上(shang)皮(pi)細(xi)胞及其(qi)產物(wu)，晶狀(zhuang)體(ti)囊(nang)膜(mo)作(zuo)為屏障將晶狀(zhuang)體(ti)與其(qi)它(ta)類(lei)型細(xi)胞wan全(quan)分(fen)開；因(yin)而，晶狀(zhuang)體(ti)上(shang)皮(pi)細(xi)胞培養既無神(shen)經(jing)和(he)血(xue)管(guan)組織的(de)幹擾(rao)，又(you)不(bu)受(shou)其它類(lei)型細(xi)胞如成(cheng)纖維細胞的汙(wu)染，保證(zheng)了(le)培養中(zhong)細胞成分(fen)的單(dan)壹(yi)性。晶狀(zhuang)體(ti)上(shang)皮(pi)細(xi)胞主要(yao)負(fu)責調(tiao)節晶狀(zhuang)體(ti)的(de)生理平(ping)衡，包(bao)括電解(jie)質和液體(ti)的(de)輸(shu)送。在正(zheng)常的發育(yu)過(guo)程(cheng)中(zhong)，晶狀(zhuang)體(ti)上(shang)皮(pi)細(xi)胞分(fen)化和(he)成(cheng)熟(shu)，然後遷(qian)移(yi)到晶狀(zhuang)體(ti)內部(bu)，產生晶體(ti)蛋(dan)白(bai)，自(zi)身也(ye)拉長(chang)而變成(cheng)晶狀(zhuang)體(ti)纖維細胞，並最(zui)終失(shi)去(qu)細胞核和(he)其它(ta)的(de)細(xi)胞器(qi)。研究表(biao)明，晶狀(zhuang)體(ti)上(shang)皮(pi)細(xi)胞的分(fen)化和(he)極化(hua)受(shou)到了(le)眼(yan)部液體(ti)中(zhong)的(de)生長因(yin)子的調(tiao)控(kong)，包(bao)括表(biao)皮(pi)生長因(yin)子和胰(yi)島(dao)素(su)等。細胞貼(tie)壁(bi)後為扁平(ping)不(bu)規(gui)則多角(jiao)形(xing)，呈單(dan)層生長、連成(cheng)膜(mo)狀(zhuang)。晶狀(zhuang)體(ti)上(shang)皮(pi)細(xi)胞是緊(jin)密(mi)貼(tie)附於(yu)晶狀(zhuang)體(ti)前(qian)囊內表(biao)面(mian)的單(dan)層上(shang)皮(pi)細(xi)胞，其異(yi)常增殖和(he)分(fen)化與白(bai)內障和後囊混濁(zhuo)的發生密(mi)切相(xiang)關(guan)，體(ti)外培養是(shi)研究(jiu)其(qi)生長規(gui)律(lv)的主要手段。
方法(fa)簡介：

公司實(shi)驗室(shi)分(fen)離(li)的人(ren)晶狀(zhuang)體(ti)上(shang)皮(pi)采用(yong)yi蛋(dan)白(bai)酶-膠原(yuan)酶混合(he)消(xiao)化(hua)法(fa)結合(he)差(cha)速貼(tie)壁(bi)法(fa)，並通(tong)過(guo)上(shang)皮(pi)細(xi)胞專用(yong)培養基培養篩(shai)選制備(bei)而來，細胞總量(liang)約為5×10?cells/瓶。
質量(liang)檢(jian)測：

公司實(shi)驗室(shi)分(fen)離(li)的人(ren)晶狀(zhuang)體(ti)上(shang)皮(pi)經(jing)BFSP2（晶狀(zhuang)體(ti)蛋(dan)白(bai)）免(mian)疫熒(ying)光鑒(jian)定(ding)，純(chun)度可達(da)90%以(yi)上(shang)，且(qie)不(bu)含有HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體(ti)、細(xi)菌(jun)、酵(jiao)母和(he)真(zhen)菌(jun)等。

本(ben)公司所(suo)有(you)產品僅(jin)供(gong)科學(xue)實驗，不(bu)做(zuo)其他科(ke)學(xue)實驗外的使(shi)用(yong)！

包(bao)被條(tiao)件 鼠尾膠原(yuan)Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 含(han)FBS、生長添(tian)加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液頻(pin)率(lv) 每(mei)2-3天(tian)換(huan)液壹次

生長特性(xing) 貼(tie)壁(bi)

細(xi)胞形(xing)態(tai) 上(shang)皮(pi)細(xi)胞樣

傳代特性 可傳2-3代(dai)

消(xiao)化(hua)液 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶

培養條(tiao)件 氣相(xiang)：空氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工(gong)作(zuo)

1. 實(shi)驗器(qi)材(cai)準(zhun)備(bei)：準(zhun)備(bei)無菌(jun)的(de)培養皿(min)、培養瓶(ping)、移液管、離(li)心管(guan)、手術(shu)器(qi)械等，並進行(xing)高壓滅(mie)菌(jun)或(huo)其他合(he)適(shi)的(de)消(xiao)毒(du)處(chu)理(li)。

2. 試(shi)劑(ji)準(zhun)備(bei)：配(pei)制或(huo)購(gou)買合(he)適(shi)的(de)培養基、消(xiao)化(hua)酶（如、膠(jiao)原(yuan)酶等）、胎牛(niu)血(xue)清、雙(shuang)抗(kang)等試(shi)劑(ji)，確(que)保其(qi)無菌(jun)且(qie)在有(you)效期(qi)內。

3. 實(shi)驗動(dong)物(wu)或(huo)組織來源準備(bei)：根(gen)據實(shi)驗需求，選(xuan)擇(ze)合(he)適(shi)的(de)動(dong)物(wu)並進行(xing)相(xiang)應的(de)麻醉或(huo)處死(si)，獲取所(suo)需組織；或(huo)從已(yi)有(you)的(de)組織樣本(ben)庫中獲取組織。

取(qu)材(cai)與處(chu)理(li)

1. 取(qu)材(cai)：在無菌(jun)條(tiao)件下，迅(xun)速取(qu)出(chu)目(mu)標(biao)組織，盡量(liang)減(jian)少對組織的(de)損(sun)傷，並去(qu)除多(duo)余的(de)脂肪、結締組織等非目(mu)的(de)組織。

2. 清洗：將取出的組織用(yong)預(yu)冷(leng)的(de)無菌(jun)PBS沖洗數(shu)次，以(yi)去(qu)除血(xue)液和雜質。

3. 剪(jian)切：將組織剪(jian)成(cheng)約1 - 2mm³的(de)小塊(kuai)，以(yi)便後續(xu)消(xiao)化(hua)。

細(xi)胞分(fen)離(li)

1. 消(xiao)化(hua)：將剪碎的組織塊(kuai)放入含有適量(liang)消(xiao)化(hua)酶的離(li)心管(guan)中，在37℃恒(heng)溫(wen)搖床或(huo)培養箱(xiang)中消(xiao)化(hua)壹(yi)段時間(jian)。期間(jian)可輕(qing)輕(qing)搖晃離(li)心管(guan)，使(shi)消(xiao)化(hua)更均勻。

2. 終止(zhi)消(xiao)化(hua)：當組織塊(kuai)大(da)部分(fen)被消(xiao)化(hua)成(cheng)單(dan)細(xi)胞懸液或(huo)小細(xi)胞團(tuan)時，加(jia)入含血清的(de)培養基終止(zhi)消(xiao)化(hua)。

3. 過(guo)濾(lv)與離(li)心：用(yong)細(xi)胞篩(shai)過(guo)濾(lv)細胞懸液，去(qu)除未(wei)消(xiao)化(hua)的(de)組織碎(sui)片(pian)，然(ran)後將濾液以(yi)適當的轉(zhuan)速離(li)心，收(shou)集(ji)細(xi)胞沈(chen)澱。

細(xi)胞觀(guan)察與檢(jian)測

1. 日(ri)常觀(guan)察：每(mei)天用(yong)倒置顯微鏡觀(guan)察細胞的形(xing)態(tai)、生長狀(zhuang)態(tai)、密(mi)度等，記(ji)錄(lu)細(xi)胞的變化(hua)情(qing)況，如發現(xian)細(xi)胞汙(wu)染或(huo)異(yi)常，及時(shi)采取相(xiang)應措施(shi)。
2. 細胞計數(shu)與活(huo)力(li)檢(jian)測：在需要時，可采用(yong)臺(tai)盼藍染色(se)等方法(fa)對細胞進行(xing)計數(shu)和(he)活(huo)力(li)檢(jian)測，以(yi)了(le)解(jie)細胞的生長情(qing)況和健(jian)康狀(zhuang)態(tai)。

壹(yi)、取(qu)材(cai)與分(fen)離(li)

1. 快(kuai)速(su)操作(zuo)

- 組織取(qu)材(cai)後需立即(ji)處理，避(bi)免(mian)長時(shi)間(jian)暴露(lu)於(yu)室(shi)溫(wen)或(huo)非營養環境。

- 使(shi)用(yong)無菌(jun) PBS 或(huo)生理鹽水(shui)沖洗組織，去(qu)除血(xue)液、雜質。

2. 消(xiao)化(hua)酶選擇(ze)

- 根(gen)據組織類(lei)型選(xuan)擇(ze)消(xiao)化(hua)酶，避(bi)免(mian)過(guo)度消(xiao)化(hua)導(dao)致細(xi)胞損(sun)傷。

- 消(xiao)化(hua)時(shi)間(jian)需嚴格控(kong)制（通常 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可通過(guo)顯微鏡觀(guan)察細胞解離(li)狀(zhuang)態(tai)。

二(er)、培養條(tiao)件優(you)化

1. 培養基選(xuan)擇(ze)

- 使(shi)用(yong)含(han)血(xue)清或(huo)特定(ding)生長因(yin)子的培養基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部分(fen)細胞需添(tian)加(jia)胰島(dao)素(su)、EGF 等。

- 避(bi)免(mian)頻(pin)繁(fan)更換(huan)培養基品牌或(huo)批次，減少細(xi)胞適應壓力(li)。

2. 貼(tie)壁(bi)與傳代

- 原(yuan)代細(xi)胞貼(tie)壁(bi)能(neng)力(li)較(jiao)弱，可能(neng)需要包(bao)被培養皿(min)（如膠(jiao)原(yuan)蛋白(bai)、多(duo)聚賴氨酸）。

- 傳代時密(mi)度建(jian)議控制在 70%-80%，過(guo)度匯(hui)合(he)會(hui)導(dao)致接觸抑(yi)制和分(fen)化。

三、汙(wu)染控制

1. 無菌(jun)操作(zuo)

- 全(quan)程(cheng)在超(chao)凈(jing)臺操作(zuo)，使(shi)用(yong)壹(yi)次性耗材(cai)，避(bi)免(mian)交叉汙(wu)染。

- 培養基中(zhong)可添(tian)加(jia)雙(shuang)抗(kang)，但長(chang)期(qi)使(shi)用(yong)可能(neng)影(ying)響(xiang)細(xi)胞活性(xing)。

2. 支原(yuan)體(ti)檢(jian)測

- 定(ding)期(qi)檢(jian)測支原(yuan)體(ti)汙(wu)染（如 PCR 法(fa)），汙(wu)染後需及時丟棄(qi)細(xi)胞。

四(si)、狀(zhuang)態(tai)監控(kong)

1. 日(ri)常觀(guan)察

- 每(mei)天檢(jian)查細胞形(xing)態(tai)、密(mi)度及(ji)培養基顏(yan)色(se)，及時(shi)更換(huan)培養基（通(tong)常每(mei) 2-3 天換(huan)液壹次）。

- 異(yi)常形(xing)態(tai)（如細(xi)胞變圓(yuan)、碎(sui)片(pian)增多）可能(neng)提(ti)示汙(wu)染或(huo)營養不足(zu)。

2. 傳代與凍(dong)存(cun)

- 原(yuan)代細(xi)胞分(fen)裂次數(shu)有(you)限（壹般 5-10 代），需及時凍(dong)存(cun)早(zao)期代(dai)次細胞。

- 凍(dong)存(cun)液建議使(shi)用(yong) DMSO+血(xue)清（或(huo)專用(yong)凍(dong)存(cun)培養基），梯(ti)度降(jiang)溫(wen)後液氮保存(cun)。