【概要(yao)描述】人(ren)視(shi)網膜色素上皮細(xi)胞(bao)公(gong)司正在出售(shou)的(de)產品：Tb1Lu蝙蝠(fu)肺細(xi)胞(bao)CRFK (貓腎細(xi)胞(bao))F81 (貓腎細(xi)胞(bao))MDBK [NBL-1] (牛(niu)腎細(xi)胞(bao))OK (負鼠腎細(xi)胞(bao))UMNSAH/DF-1 (雞胚(pei)成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao))EBTr [NBL-4] (牛(niu)胚(pei)氣(qi)管(guan)細(xi)胞(bao))Pt K1 [NBL-3] (袋鼠(shu)腎細(xi)胞(bao))CCC-SMC-1 (兔主(zhu)動(dong)脈(mai)平(ping)滑肌細(xi)胞(bao))Mv.1.Lu [NBL-7; Mv1Lu] (貂肺(fei)上皮細(xi)胞(bao))

本(ben)公(gong)司所有(you)產(chan)品僅(jin)供科(ke)學實驗，不做(zuo)其他科(ke)學實驗外的(de)使(shi)用(yong)！

人(ren)視(shi)網膜色素上皮分離自視(shi)網膜組織；視(shi)網膜居於眼球(qiu)壁的(de)內(nei)層，是(shi)壹層透明(ming)的(de)薄膜。視(shi)網膜由色(se)素上皮層和視(shi)網膜感(gan)覺(jiao)層(ceng)組成，兩層間(jian)在病理情(qing)況下(xia)可分開，稱(cheng)為(wei)視(shi)網膜脫(tuo)離。色(se)素上皮層與脈(mai)絡(luo)膜緊密(mi)相(xiang)連，由色(se)素上皮細(xi)胞(bao)組成，它們(men)具有(you)支(zhi)持(chi)和營養(yang)光感(gan)受(shou)器(qi)細(xi)胞(bao)、遮(zhe)光、散熱以及再(zai)生(sheng)和修復等(deng)作用(yong)。組織學上視(shi)網膜分為(wei)10層(ceng)，由外向(xiang)內分別(bie)為(wei)：色(se)素上皮層、視(shi)錐、視(shi)桿(gan)細(xi)胞(bao)層、外界膜、外顆粒層、外叢(cong)狀(zhuang)層、內顆粒層、內(nei)叢(cong)狀(zhuang)層、神(shen)經(jing)節細(xi)胞(bao)層、神(shen)經(jing)纖維(wei)層、內界膜。視(shi)網膜內層為(wei)襯(chen)於血管(guan)膜內面的壹(yi)層(ceng)薄膜，有(you)感(gan)光作用(yong)；後部鼻(bi)側有(you)壹(yi)視(shi)神(shen)經(jing)乳頭(tou)。視(shi)網膜上的感(gan)覺(jiao)層(ceng)是(shi)由三(san)個神(shen)經(jing)元組成。神(shen)經(jing)元是視(shi)細(xi)胞(bao)層，專(zhuan)司感(gan)光，它包(bao)括(kuo)錐細(xi)胞(bao)和桿(gan)細(xi)胞(bao)。視(shi)桿(gan)細(xi)胞(bao)主要(yao)在離中(zhong)心凹較(jiao)遠(yuan)的視(shi)網膜上，而視(shi)錐細(xi)胞(bao)則(ze)在中心(xin)凹(ao)處最(zui)多。第(di)二層(ceng)叫雙節(jie)細(xi)胞(bao)，約有(you)10到(dao)數(shu)百(bai)個視(shi)細(xi)胞(bao)通(tong)過雙節(jie)細(xi)胞(bao)與壹(yi)個神(shen)經(jing)節細(xi)胞(bao)相(xiang)聯(lian)系，負責(ze)聯(lian)絡(luo)作用(yong)。第三(san)層叫節(jie)細(xi)胞(bao)層，專(zhuan)管(guan)傳(chuan)導。視(shi)網膜是壹層菲薄的(de)但(dan)又(you)非常復雜(za)的(de)結構(gou)，它貼(tie)於(yu)眼(yan)球(qiu)的(de)後(hou)壁部，傳(chuan)遞來(lai)自視(shi)網膜感(gan)受(shou)器(qi)沖動(dong)的(de)神(shen)經(jing)纖維(wei)跨越視(shi)網膜表(biao)面(mian)，經(jing)由視(shi)神(shen)經(jing)到(dao)達出口(kou)。視(shi)網膜的分辨(bian)力(li)是不(bu)均(jun)勻(yun)的(de)，在黃斑區(qu)，其(qi)分辨(bian)能(neng)力強。視(shi)網膜色素上皮（RPE）位於脈(mai)絡(luo)膜和光感(gan)受(shou)器(qi)細(xi)胞(bao)外節(jie)之(zhi)間(jian)，是視(shi)網膜下(xia)腔和脈(mai)絡(luo)膜血管(guan)之(zhi)間(jian)的離子(zi)、水、營養(yang)物(wu)質(zhi)和代謝終(zhong)產物(wu)轉運通(tong)道(dao)；主(zhu)要(yao)是(shi)由單(dan)層(ceng)色(se)素上皮細(xi)胞(bao)所構(gou)成(cheng)，排(pai)列十(shi)分規則(ze)。視(shi)網膜色素上皮參與視(shi)醇循環，吞(tun)噬脫(tuo)落(luo)的(de)光感(gan)受(shou)器(qi)細(xi)胞(bao)外節(jie)以維(wei)持(chi)光感(gan)受(shou)器(qi)細(xi)胞(bao)興奮(fen)性，並分泌(mi)多種(zhong)生(sheng)長(chang)因子(zi)，幫助(zhu)維(wei)持(chi)脈(mai)絡(luo)膜血管(guan)內皮(pi)細(xi)胞(bao)和光感(gan)受(shou)器(qi)細(xi)胞(bao)的結構(gou)完整性。細(xi)胞(bao)呈多(duo)角(jiao)形(xing)，細(xi)胞(bao)分為(wei)三(san)部分，即頂(ding)部、體(ti)部和基(ji)底(di)部。視(shi)網膜色素上皮細(xi)胞(bao)無再(zai)生(sheng)能(neng)力，細(xi)胞(bao)死(si)亡(wang)後(hou)不被替換(huan)，而(er)是鄰(lin)近(jin)的細(xi)胞(bao)向側面滑動，以填補死(si)亡(wang)細(xi)胞(bao)遺(yi)留下(xia)來(lai)的(de)空(kong)間(jian)。視(shi)網膜色素上皮位於脈(mai)絡(luo)膜和光感(gan)受(shou)器(qi)細(xi)胞(bao)外節(jie)之(zhi)間(jian)，是視(shi)網膜下(xia)腔和脈(mai)絡(luo)膜血管(guan)之(zhi)間(jian)的離子(zi)、水、營養(yang)物(wu)質(zhi)和代謝終(zhong)產物(wu)轉運通(tong)道(dao)。視(shi)網膜色素上皮參與視(shi)醇循環，吞(tun)噬脫(tuo)落(luo)的(de)光感(gan)受(shou)器(qi)細(xi)胞(bao)外節(jie)以維(wei)持(chi)光感(gan)受(shou)器(qi)細(xi)胞(bao)興奮(fen)性，並分泌(mi)多種(zhong)生(sheng)長(chang)因子(zi)，幫助(zhu)維(wei)持(chi)脈(mai)絡(luo)膜血管(guan)內皮(pi)細(xi)胞(bao)和光感(gan)受(shou)器(qi)細(xi)胞(bao)的結構(gou)完整性。
方法簡介：

公(gong)司實驗室分離的(de)人視(shi)網膜色素上皮采用(yong)yi蛋白(bai)酶-膠(jiao)原酶混合(he)消化法結合(he)差(cha)速貼(tie)壁法(fa)，並(bing)通(tong)過上皮細(xi)胞(bao)專(zhuan)用(yong)培養(yang)基(ji)培(pei)養(yang)篩選(xuan)制備而來(lai)，細(xi)胞(bao)總量約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量檢(jian)測：

公(gong)司實驗室分離的(de)人視(shi)網膜色素上皮經(jing)S-100免(mian)疫(yi)熒(ying)光鑒定，純度(du)可達90%以上，且不含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體(ti)、細(xi)菌、酵(jiao)母和真菌等(deng)。

包(bao)被條件(jian) 鼠(shu)尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培(pei)養(yang)基(ji) 含(han)FBS、生(sheng)長(chang)添加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液頻(pin)率 每2-3天(tian)換液(ye)壹(yi)次

生(sheng)長(chang)特性 貼(tie)壁

細(xi)胞(bao)形態(tai) 上皮細(xi)胞(bao)樣

傳(chuan)代特(te)性 可(ke)傳(chuan)2-3代

消化液 0.25%yi蛋白(bai)酶

培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian) 氣(qi)相(xiang)：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準備(bei)工(gong)作

1. 實驗器材(cai)準備(bei)：準備(bei)無菌的(de)培養(yang)皿(min)、培(pei)養(yang)瓶(ping)、移液(ye)管(guan)、離心(xin)管(guan)、手術器(qi)械(xie)等(deng)，並進行(xing)高壓滅菌或(huo)其他合(he)適(shi)的消毒(du)處理。

2. 試劑準備(bei)：配(pei)制或(huo)購買合(he)適(shi)的培(pei)養(yang)基(ji)、消化酶（如、膠原酶等(deng)）、胎(tai)牛(niu)血清(qing)、雙抗(kang)等(deng)試劑，確保(bao)其(qi)無菌且(qie)在有(you)效(xiao)期(qi)內(nei)。

3. 實驗動物或(huo)組織來(lai)源(yuan)準備(bei)：根(gen)據實驗需(xu)求(qiu)，選(xuan)擇(ze)合(he)適(shi)的動(dong)物並進行(xing)相(xiang)應的(de)麻(ma)醉或(huo)處死(si)，獲(huo)取所需(xu)組織；或(huo)從已有(you)的(de)組織樣本(ben)庫中獲(huo)取組織。

取材(cai)與(yu)處理

1. 取材(cai)：在無菌條(tiao)件下(xia)，迅速(su)取出目(mu)標(biao)組織，盡量減(jian)少(shao)對(dui)組織的損傷(shang)，並去(qu)除(chu)多余(yu)的(de)脂肪、結締(di)組織等(deng)非目(mu)的(de)組織。

2. 清(qing)洗：將取出的(de)組織用(yong)預(yu)冷(leng)的無菌PBS沖(chong)洗數(shu)次，以(yi)去(qu)除(chu)血液和雜質(zhi)。

3. 剪(jian)切：將組織剪成約(yue)1 - 2mm³的小塊，以便(bian)後續(xu)消化。

細(xi)胞(bao)分離

1. 消化：將剪碎的(de)組織塊放(fang)入(ru)含(han)有(you)適(shi)量消化酶的(de)離心(xin)管(guan)中，在37℃恒溫(wen)搖床(chuang)或(huo)培養(yang)箱(xiang)中(zhong)消化壹段(duan)時間(jian)。期(qi)間(jian)可輕輕搖晃(huang)離心(xin)管(guan)，使(shi)消化更均(jun)勻(yun)。

2. 終(zhong)止消化：當組織塊大(da)部分被消化成單(dan)細(xi)胞(bao)懸液或(huo)小細(xi)胞(bao)團(tuan)時，加入(ru)含(han)血清(qing)的培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止消化。

3. 過(guo)濾與離心(xin)：用(yong)細(xi)胞(bao)篩過(guo)濾(lv)細(xi)胞(bao)懸液，去(qu)除(chu)未消化的組織碎片，然(ran)後(hou)將濾液(ye)以(yi)適(shi)當的(de)轉速離心(xin)，收集細(xi)胞(bao)沈澱(dian)。

細(xi)胞(bao)觀(guan)察與(yu)檢(jian)測

1. 日常觀(guan)察：每天(tian)用(yong)倒置顯微(wei)鏡(jing)觀(guan)察細(xi)胞(bao)的形(xing)態(tai)、生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)、密(mi)度等(deng)，記錄細(xi)胞(bao)的變(bian)化(hua)情(qing)況，如發現細(xi)胞(bao)汙(wu)染(ran)或(huo)異常(chang)，及時(shi)采取相(xiang)應措(cuo)施(shi)。
2. 細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)與(yu)活(huo)力(li)檢(jian)測：在需(xu)要(yao)時(shi)，可(ke)采用(yong)臺盼(pan)藍染(ran)色(se)等(deng)方法對細(xi)胞(bao)進行(xing)計(ji)數(shu)和活力檢(jian)測，以(yi)了(le)解(jie)細(xi)胞(bao)的生(sheng)長(chang)情(qing)況和健(jian)康(kang)狀(zhuang)態(tai)。

壹(yi)、取材(cai)與(yu)分離

1. 快(kuai)速操作

- 組織取材(cai)後(hou)需(xu)立(li)即處理，避免(mian)長(chang)時間(jian)暴露(lu)於室(shi)溫(wen)或(huo)非營養(yang)環境(jing)。

- 使(shi)用(yong)無菌 PBS 或(huo)生(sheng)理鹽水沖洗組織，去(qu)除(chu)血液、雜(za)質(zhi)。

2. 消化酶選(xuan)擇(ze)

- 根(gen)據組織類型選(xuan)擇(ze)消化酶，避(bi)免(mian)過(guo)度消化導致(zhi)細(xi)胞(bao)損傷(shang)。

- 消化時間(jian)需(xu)嚴格控(kong)制（通(tong)常 10-30 分鐘），可通(tong)過顯微(wei)鏡(jing)觀(guan)察細(xi)胞(bao)解離狀(zhuang)態(tai)。

二(er)、培養(yang)條(tiao)件(jian)優(you)化(hua)

1. 培(pei)養(yang)基(ji)選(xuan)擇(ze)

- 使(shi)用(yong)含(han)血清(qing)或(huo)特定生(sheng)長(chang)因子(zi)的培養(yang)基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分細(xi)胞(bao)需(xu)添加(jia)胰(yi)島素、EGF 等(deng)。

- 避(bi)免(mian)頻(pin)繁更換(huan)培(pei)養(yang)基(ji)品牌或(huo)批次，減(jian)少(shao)細(xi)胞(bao)適(shi)應壓(ya)力(li)。

2. 貼(tie)壁與(yu)傳(chuan)代

- 原代細(xi)胞(bao)貼壁能(neng)力較(jiao)弱(ruo)，可(ke)能(neng)需(xu)要(yao)包(bao)被培養(yang)皿(min)（如膠原蛋白(bai)、多聚賴氨(an)酸(suan)）。

- 傳(chuan)代時(shi)密(mi)度建議(yi)控(kong)制在 70%-80%，過度(du)匯合(he)會(hui)導(dao)致(zhi)接觸(chu)抑制和分化。

三(san)、汙(wu)染(ran)控(kong)制

1. 無菌操作

- 全(quan)程(cheng)在超(chao)凈臺操作，使(shi)用(yong)壹次性耗材(cai)，避(bi)免(mian)交(jiao)叉汙(wu)染(ran)。

- 培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)可(ke)添加(jia)雙抗(kang)，但(dan)長(chang)期(qi)使(shi)用(yong)可能(neng)影(ying)響細(xi)胞(bao)活性。

2. 支(zhi)原體(ti)檢(jian)測

- 定(ding)期(qi)檢(jian)測支(zhi)原體(ti)汙(wu)染(ran)（如 PCR 法），汙(wu)染(ran)後(hou)需(xu)及時(shi)丟(diu)棄細(xi)胞(bao)。

四、狀(zhuang)態(tai)監(jian)控(kong)

1. 日常觀(guan)察

- 每天(tian)檢(jian)查(zha)細(xi)胞(bao)形態(tai)、密(mi)度及培(pei)養(yang)基(ji)顏(yan)色(se)，及時(shi)更換(huan)培(pei)養(yang)基(ji)（通(tong)常每 2-3 天(tian)換液(ye)壹(yi)次）。

- 異常(chang)形態(tai)（如細(xi)胞(bao)變(bian)圓(yuan)、碎片增(zeng)多(duo)）可能(neng)提示汙(wu)染(ran)或(huo)營養(yang)不(bu)足(zu)。

2. 傳(chuan)代與(yu)凍(dong)存(cun)

- 原代細(xi)胞(bao)分裂(lie)次數(shu)有(you)限(xian)（壹(yi)般 5-10 代），需(xu)及時(shi)凍(dong)存(cun)早期(qi)代次細(xi)胞(bao)。

- 凍(dong)存(cun)液(ye)建議(yi)使(shi)用(yong) DMSO+血清(qing)（或(huo)專(zhuan)用(yong)凍(dong)存(cun)培(pei)養(yang)基(ji)），梯(ti)度(du)降(jiang)溫(wen)後液(ye)氮保存(cun)。