【概要(yao)描(miao)述】人(ren)腎動(dong)脈平滑肌細(xi)胞公司(si)正(zheng)在出售(shou)的(de)產(chan)品：EBV-Human轉化(hua)人(ren)淋(lin)巴細(xi)胞人(ren)腦瘤(liu)細(xi)胞SF126(STR鑒定(ding)正(zheng)確)人(ren)喉(hou)癌(ai)細(xi)胞 TU686(STR鑒定(ding)正(zheng)確)小(xiao)鼠神(shen)經幹細(xi)胞C17.2 （種屬鑒定(ding)）人(ren)結直(zhi)腸腺(xian)癌(ai)細(xi)胞COLO 201(STR鑒定(ding)正(zheng)確)人(ren)胰腺(xian)癌(ai)細(xi)胞Patu8988T(STR鑒定(ding)正(zheng)確)人(ren)非(fei)小(xiao)細(xi)胞肺癌(ai)細(xi)胞帶熒(ying)光(guang)酶NCI-H1299+LUC(STR鑒定(ding)正(zheng)確)MC3T3-E1Subclone 14 小(xiao)鼠顱

人(ren)腎動(dong)脈平滑肌分(fen)離(li)自(zi)腎動(dong)脈組織；腎動(dong)脈的(de)分支(zhi)為(wei)葉(ye)間(jian)動(dong)脈，穿行於(yu)腎柱(zhu)內(nei)，上(shang)行至(zhi)皮(pi)質與(yu)髓(sui)質交界處(chu)，形成(cheng)與(yu)腎表(biao)面(mian)平行的(de)弓狀(zhuang)動(dong)脈。小(xiao)葉間(jian)動(dong)脈向被膜(mo)發出毛(mao)細(xi)血(xue)管(guan)，並(bing)向(xiang)周圍的(de)腎小(xiao)體發出入(ru)球小(xiao)動(dong)脈，進入(ru)腎小(xiao)囊後(hou)形成(cheng)球形的(de)毛細(xi)血(xue)管(guan)網，再(zai)匯(hui)集成(cheng)出球小(xiao)動(dong)脈，出腎小(xiao)體。直(zhi)小(xiao)動(dong)脈分支形(xing)成(cheng)毛細(xi)血(xue)管(guan)網，再(zai)匯(hui)合成(cheng)直小(xiao)靜(jing)脈，入(ru)弓狀(zhuang)靜(jing)脈、葉(ye)間(jian)靜(jing)脈，最(zui)後(hou)匯(hui)合成(cheng)腎靜(jing)脈經腎門(men)出腎，註(zhu)入(ru)下(xia)腔靜(jing)脈。腎動(dong)脈既是腎的(de)營養血(xue)管(guan)，又(you)是腎的(de)機能(neng)血(xue)管(guan)，與(yu)腎泌(mi)尿機(ji)能(neng)密(mi)切(qie)相關。腎動(dong)脈在腎實(shi)質內形成(cheng)兩(liang)個(ge)毛(mao)細(xi)血(xue)管(guan)網：腎小(xiao)球毛細(xi)血(xue)管(guan)網，血(xue)壓較高，利(li)於(yu)血(xue)漿(jiang)濾(lv)過(guo)形(xing)成(cheng)原(yuan)尿；球後(hou)毛細(xi)血(xue)管(guan)網，血(xue)壓較低，利(li)於(yu)腎小(xiao)管的(de)重(zhong)吸收。腎動(dong)脈平滑肌細(xi)胞是腎動(dong)脈的(de)重(zhong)要結(jie)構(gou)細(xi)胞之(zhi)壹(yi)，在機(ji)體(ti)的(de)正(zheng)常生(sheng)理過(guo)程(cheng)中(zhong)發揮著重(zhong)要作用。腎動(dong)脈平滑肌細(xi)胞原(yuan)代(dai)分離(li)培(pei)養3天(tian)後(hou)，可(ke)見細(xi)胞貼壁伸展(zhan)，細(xi)胞形態(tai)大小(xiao)不(bu)壹(yi)，呈梭(suo)形(xing)、不(bu)規(gui)則形(xing)、三(san)角(jiao)形(xing)或(huo)扇(shan)形(xing)，核(he)卵(luan)圓(yuan)形(xing)、居(ju)中(zhong)；2周(zhou)後(hou)細(xi)胞匯(hui)合，多(duo)數(shu)細(xi)胞伸展(zhan)呈長(chang)梭(suo)形(xing)，胞漿豐(feng)富(fu)，有(you)分枝(zhi)狀(zhuang)突起，細(xi)胞平行排列(lie)成(cheng)單層或(huo)部(bu)分(fen)區域(yu)多(duo)層重(zhong)疊(die)生(sheng)長，高低起伏(fu)；細(xi)胞密(mi)度(du)低時，常交織(zhi)成(cheng)網狀(zhuang)；密(mi)度(du)高時(shi)，則排(pai)列(lie)為旋(xuan)渦狀(zhuang)或(huo)柵(zha)欄狀(zhuang)。傳代(dai)後(hou)細(xi)胞生(sheng)長較快(kuai)，4-6天(tian)即可(ke)匯(hui)合，並(bing)保(bao)持上(shang)述形態(tai)學特征(zheng)和(he)生(sheng)長特點。
方法簡介：

公(gong)司(si)實驗室分(fen)離(li)的(de)人(ren)腎動(dong)脈平滑肌采(cai)用(yong)yi蛋白酶-膠(jiao)原(yuan)酶聯(lian)合(he)消(xiao)化(hua)法結(jie)合(he)差速(su)貼壁法制(zhi)備(bei)而來(lai)，細(xi)胞總量(liang)約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶。
質量檢(jian)測(ce)：

公(gong)司實驗室分(fen)離(li)的(de)人(ren)腎動(dong)脈平滑肌經α-SMA免疫(yi)熒光(guang)鑒定(ding)，純度(du)可(ke)達90%以(yi)上(shang)，且(qie)不(bu)含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體(ti)、細(xi)菌(jun)、酵(jiao)母和(he)真(zhen)菌等。

本(ben)公(gong)司(si)所(suo)有(you)產(chan)品僅供科(ke)學實驗，不(bu)做(zuo)其他科學實驗外(wai)的(de)使(shi)用！

培(pei)養基(ji) 含(han)FBS、生(sheng)長添(tian)加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液(ye)頻率(lv) 每2-3天(tian)換液壹(yi)次(ci)

生(sheng)長特性(xing) 貼壁

細(xi)胞形態(tai) 成(cheng)纖維細(xi)胞樣(yang)

傳代(dai)特性(xing) 可(ke)傳5代(dai)左(zuo)右；3代(dai)以內狀(zhuang)態(tai)

消(xiao)化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋白酶

培(pei)養條件 氣(qi)相：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準備(bei)工(gong)作

1. 實(shi)驗器材準備(bei)：準備(bei)無菌(jun)的(de)培(pei)養皿、培(pei)養瓶(ping)、移液管(guan)、離(li)心管、手(shou)術器(qi)械(xie)等(deng)，並(bing)進行高壓滅(mie)菌或(huo)其他合適(shi)的(de)消(xiao)毒(du)處(chu)理。

2. 試劑準備(bei)：配制(zhi)或(huo)購買合適(shi)的(de)培(pei)養基(ji)、消(xiao)化(hua)酶（如(ru)、膠(jiao)原(yuan)酶等(deng)）、胎牛血(xue)清(qing)、雙(shuang)抗(kang)等(deng)試劑，確保其無菌(jun)且(qie)在有(you)效期內(nei)。

3. 實(shi)驗動(dong)物或(huo)組(zu)織(zhi)來(lai)源(yuan)準備(bei)：根據(ju)實驗需求，選擇(ze)合(he)適(shi)的(de)動(dong)物並進行相應的(de)麻醉或(huo)處(chu)死(si)，獲(huo)取所需(xu)組(zu)織(zhi)；或(huo)從已(yi)有(you)的(de)組織(zhi)樣(yang)本(ben)庫(ku)中(zhong)獲(huo)取組織(zhi)。

取材與(yu)處(chu)理

1. 取材：在無(wu)菌(jun)條件下(xia)，迅速(su)取出目(mu)標組(zu)織，盡(jin)量減少對(dui)組織(zhi)的(de)損傷(shang)，並去(qu)除多(duo)余的(de)脂(zhi)肪(fang)、結締(di)組織(zhi)等非(fei)目(mu)的(de)組織(zhi)。

2. 清洗：將(jiang)取出的(de)組織(zhi)用(yong)預(yu)冷(leng)的(de)無菌(jun)PBS沖(chong)洗數(shu)次(ci)，以(yi)去(qu)除血(xue)液(ye)和(he)雜(za)質。

3. 剪切(qie)：將(jiang)組(zu)織剪(jian)成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊，以(yi)便後(hou)續消(xiao)化(hua)。

細(xi)胞分離(li)

1. 消(xiao)化(hua)：將(jiang)剪(jian)碎的(de)組織(zhi)塊放(fang)入(ru)含(han)有(you)適(shi)量(liang)消(xiao)化(hua)酶的(de)離(li)心管中(zhong)，在37℃恒(heng)溫(wen)搖床(chuang)或(huo)培(pei)養箱中(zhong)消(xiao)化(hua)壹(yi)段時(shi)間(jian)。期間(jian)可(ke)輕(qing)輕(qing)搖晃(huang)離(li)心管，使(shi)消(xiao)化(hua)更(geng)均勻(yun)。

2. 終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)：當(dang)組織(zhi)塊大(da)部分(fen)被(bei)消(xiao)化(hua)成(cheng)單細(xi)胞懸液或(huo)小(xiao)細(xi)胞團時(shi)，加(jia)入(ru)含(han)血(xue)清(qing)的(de)培(pei)養基(ji)終止(zhi)消(xiao)化(hua)。

3. 過(guo)濾(lv)與(yu)離(li)心：用細(xi)胞篩過(guo)濾(lv)細(xi)胞懸液，去(qu)除未(wei)消(xiao)化(hua)的(de)組織(zhi)碎片，然後(hou)將(jiang)濾(lv)液以(yi)適(shi)當(dang)的(de)轉速(su)離(li)心，收集細(xi)胞沈澱(dian)。

細(xi)胞觀察(cha)與(yu)檢(jian)測(ce)

1. 日常觀察(cha)：每天(tian)用倒置(zhi)顯微鏡(jing)觀察(cha)細(xi)胞的(de)形態(tai)、生(sheng)長狀(zhuang)態(tai)、密(mi)度(du)等(deng)，記(ji)錄細(xi)胞的(de)變化(hua)情(qing)況(kuang)，如發現(xian)細(xi)胞汙(wu)染(ran)或(huo)異(yi)常，及(ji)時(shi)采(cai)取相應措施。
2. 細(xi)胞計數(shu)與(yu)活力(li)檢(jian)測(ce)：在需(xu)要(yao)時，可(ke)采(cai)用(yong)臺盼藍(lan)染(ran)色等(deng)方法對(dui)細(xi)胞進行計數(shu)和活力(li)檢(jian)測(ce)，以(yi)了(le)解細(xi)胞的(de)生(sheng)長情況和健(jian)康(kang)狀(zhuang)態(tai)。

壹、取材與(yu)分離(li)

1. 快(kuai)速(su)操作

- 組(zu)織取材後(hou)需立(li)即(ji)處(chu)理，避免長時間(jian)暴露於(yu)室溫(wen)或(huo)非(fei)營養環(huan)境。

- 使(shi)用無(wu)菌 PBS 或(huo)生(sheng)理鹽水(shui)沖(chong)洗組織，去(qu)除血(xue)液(ye)、雜(za)質。

2. 消(xiao)化(hua)酶選(xuan)擇(ze)

- 根(gen)據(ju)組織類(lei)型(xing)選(xuan)擇(ze)消(xiao)化(hua)酶，避(bi)免過(guo)度(du)消(xiao)化(hua)導致(zhi)細(xi)胞損傷(shang)。

- 消(xiao)化(hua)時(shi)間(jian)需嚴格控制(zhi)（通(tong)常 10-30 分鐘(zhong)），可(ke)通(tong)過(guo)顯微鏡(jing)觀察(cha)細(xi)胞解離(li)狀(zhuang)態(tai)。

二、培(pei)養條件優(you)化

1. 培(pei)養基(ji)選擇(ze)

- 使(shi)用含(han)血(xue)清(qing)或(huo)特(te)定(ding)生(sheng)長因(yin)子(zi)的(de)培(pei)養基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分(fen)細(xi)胞需添(tian)加(jia)胰島(dao)素、EGF 等。

- 避(bi)免頻繁更換(huan)培(pei)養基(ji)品牌或(huo)批次(ci)，減(jian)少細(xi)胞適(shi)應(ying)壓力(li)。

2. 貼壁與(yu)傳代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞貼壁能(neng)力(li)較弱，可(ke)能(neng)需要(yao)包被(bei)培(pei)養皿（如膠原(yuan)蛋白、多(duo)聚(ju)賴(lai)氨(an)酸）。

- 傳代(dai)時密(mi)度(du)建議控制(zhi)在 70%-80%，過(guo)度(du)匯(hui)合會(hui)導致(zhi)接(jie)觸(chu)抑(yi)制(zhi)和(he)分化。

三(san)、汙(wu)染(ran)控制(zhi)

1. 無菌(jun)操作

- 全(quan)程在超(chao)凈臺操作，使(shi)用壹(yi)次(ci)性(xing)耗材，避免交叉汙(wu)染(ran)。

- 培(pei)養基(ji)中(zhong)可(ke)添(tian)加(jia)雙(shuang)抗(kang)，但(dan)長期使(shi)用可(ke)能(neng)影響(xiang)細(xi)胞活性(xing)。

2. 支原(yuan)體(ti)檢(jian)測(ce)

- 定(ding)期檢(jian)測(ce)支(zhi)原(yuan)體(ti)汙(wu)染(ran)（如 PCR 法），汙(wu)染(ran)後(hou)需及(ji)時(shi)丟(diu)棄細(xi)胞。

四、狀(zhuang)態(tai)監(jian)控

1. 日常觀察(cha)

- 每(mei)天(tian)檢(jian)查細(xi)胞形態(tai)、密(mi)度(du)及(ji)培(pei)養基(ji)顏(yan)色(se)，及(ji)時(shi)更換(huan)培(pei)養基(ji)（通(tong)常每 2-3 天(tian)換液壹(yi)次(ci)）。

- 異(yi)常形態(tai)（如細(xi)胞變圓(yuan)、碎片增(zeng)多(duo)）可(ke)能(neng)提示汙(wu)染(ran)或(huo)營養不(bu)足。

2. 傳代(dai)與(yu)凍存(cun)

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞分裂(lie)次(ci)數(shu)有(you)限(xian)（壹(yi)般(ban) 5-10 代(dai)），需及(ji)時(shi)凍存(cun)早期(qi)代(dai)次(ci)細(xi)胞。

- 凍存(cun)液(ye)建議使(shi)用 DMSO+血(xue)清(qing)（或(huo)專(zhuan)用(yong)凍存(cun)培(pei)養基(ji)），梯度降溫(wen)後(hou)液氮保(bao)存(cun)。