【概(gai)要(yao)描(miao)述(shu)】人(ren)小梁網(wang)細(xi)胞(bao)公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出售(shou)的產(chan)品(pin)：CHO-K1倉(cang)鼠(shu)卵巢細(xi)胞(bao)亞株PC-12 (未(wei)分(fen)化(hua)) (大鼠(shu)腎上腺(xian)嗜(shi)鉻(ge)細(xi)胞(bao)瘤(liu)細(xi)胞(bao)(未(wei)分(fen)化(hua))) (種屬(shu)鑒定正(zheng)確)RBL-1 (大鼠(shu)嗜(shi)堿(jian)性(xing)粒細(xi)胞(bao)性白血(xue)病細(xi)胞(bao))RIN-m5F (大鼠(shu)胰島(dao)β細(xi)胞(bao)瘤(liu)細(xi)胞(bao))RK1 (大鼠(shu)腎細(xi)胞(bao))RL1 (大鼠(shu)肺成(cheng)纖維樣細(xi)胞(bao))RS1 (大鼠(shu)皮(pi)膚成纖維樣細(xi)胞(bao))RTE (大鼠(shu)氣(qi)管(guan)上皮細(xi)胞(bao))UMR-106 (大鼠(shu)骨(gu)肉(rou)瘤(liu)細(xi)胞(bao)) (種屬(shu)鑒定正(zheng)確)USMC (

本公(gong)司(si)所(suo)有(you)產(chan)品(pin)僅供科(ke)學(xue)實(shi)驗(yan)，不(bu)做(zuo)其(qi)他科(ke)學(xue)實(shi)驗(yan)外的使用(yong)！

人(ren)小梁網(wang)分離(li)自眼球組織；小梁網(wang)由角膜(mo)基質(zhi)纖維、後界(jie)膜(mo)和角膜(mo)內皮向後擴(kuo)展而成(cheng)，覆蓋在(zai)鞏(gong)膜(mo)靜脈竇的內(nei)側。小梁網(wang)細(xi)胞(bao)在(zai)眼內(nei)壓(ya)調(tiao)節(jie)中起(qi)著關鍵作(zuo)用(yong)；小(xiao)梁網(wang)細(xi)胞(bao)內有(you)特定的神(shen)經(jing)遞質和(he)神(shen)經(jing)肽受體，其(qi)中包括(kuo)腎上腺(xian)素(su)、乙(yi)酰和(he)神(shen)經(jing)肽Y。青(qing)光(guang)眼是(shi)由於(yu)眼內(nei)壓(ya)力(li)升(sheng)高而造(zao)成的壹種不(bu)可(ke)逆(ni)致(zhi)盲眼病，小梁網(wang)細(xi)胞(bao)的體外培養(yang)是(shi)青(qing)光(guang)眼病因學研(yan)究(jiu)的重(zhong)要(yao)手(shou)段(duan)之(zhi)壹(yi)。在(zai)小(xiao)梁網(wang)細(xi)胞(bao)中，壹長串的(de)血(xue)管(guan)活性(xing)多肽和生長(chang)因子能夠(gou)觸(chu)發細(xi)胞(bao)內信(xin)號傳(chuan)導機(ji)制(zhi)，小梁網(wang)細(xi)胞(bao)可(ke)合(he)成不(bu)同(tong)類(lei)型的細(xi)胞(bao)外基質(zhi)蛋(dan)白以(yi)及(ji)金屬(shu)蛋(dan)白酶。形態(tai)學(xue)觀(guan)察可(ke)見，剛從組織塊長(chang)出的原代細(xi)胞(bao)，形態(tai)各(ge)異，多(duo)數(shu)呈星(xing)狀或不規(gui)則(ze)形(xing)。細(xi)胞(bao)有(you)胞突，核橢圓(yuan)形，胞(bao)體肥大，胞(bao)漿(jiang)豐(feng)富(fu)，且可(ke)見吞噬顆粒。隨著(zhe)細(xi)胞(bao)的增生及(ji)相互融(rong)合(he)為單(dan)層，細(xi)胞(bao)的形態(tai)趨(qu)於(yu)壹致。胞(bao)漿的色(se)素(su)顆(ke)粒及(ji)胞突(tu)消失，排(pai)列緊密(mi)呈(cheng)類(lei)似上皮(pi)細(xi)胞(bao)的扁橢圓(yuan)形或(huo)不規(gui)則(ze)形(xing)。胞(bao)體透亮(liang)，包膜(mo)清晰。
方(fang)法簡(jian)介：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室(shi)分離(li)的(de)人(ren)小梁網(wang)采用(yong)組織貼(tie)塊法(fa)制(zhi)備而來(lai)，細(xi)胞(bao)總(zong)量(liang)約為5×10?cells/瓶。
質量(liang)檢測(ce)：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室(shi)分離(li)的(de)人(ren)小梁網(wang)經(jing)NSE（神(shen)經(jing)元(yuan)特異性(xing)烯(xi)醇化(hua)酶）免(mian)疫熒(ying)光鑒定，純(chun)度可(ke)達90%以上(shang)，且(qie)不含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體、細(xi)菌(jun)、酵(jiao)母和真(zhen)菌(jun)等。

培養(yang)基 含(han)FBS、生長(chang)添加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液頻率(lv) 每2-3天換(huan)液壹(yi)次

生長(chang)特性(xing) 貼(tie)壁

細(xi)胞(bao)形態(tai) 梭(suo)形、多角形(xing)

傳(chuan)代特(te)性 可(ke)傳(chuan)1-2代

消化(hua)液 0.25%yi蛋(dan)白酶

培養(yang)條(tiao)件 氣相：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工(gong)作(zuo)

1. 實(shi)驗(yan)器(qi)材(cai)準(zhun)備(bei)：準(zhun)備(bei)無(wu)菌(jun)的(de)培養(yang)皿(min)、培養(yang)瓶(ping)、移(yi)液(ye)管(guan)、離心管、手(shou)術(shu)器械(xie)等，並進行(xing)高(gao)壓(ya)滅菌(jun)或(huo)其(qi)他合(he)適的(de)消(xiao)毒(du)處理(li)。

2. 試劑(ji)準(zhun)備(bei)：配制(zhi)或購買(mai)合(he)適的(de)培(pei)養(yang)基、消(xiao)化酶（如(ru)、膠原酶等）、胎(tai)牛血清(qing)、雙(shuang)抗等試(shi)劑，確保(bao)其(qi)無(wu)菌(jun)且(qie)在(zai)有(you)效期(qi)內(nei)。

3. 實(shi)驗(yan)動物(wu)或組織來(lai)源(yuan)準(zhun)備(bei)：根據實(shi)驗(yan)需求(qiu)，選擇合(he)適的(de)動物(wu)並進行(xing)相應的(de)麻(ma)醉(zui)或處死，獲(huo)取(qu)所(suo)需組織；或從(cong)已(yi)有(you)的組織樣本庫(ku)中獲(huo)取(qu)組織。

取材(cai)與(yu)處理(li)

1. 取材(cai)：在(zai)無(wu)菌(jun)條(tiao)件下(xia)，迅(xun)速取出目標(biao)組織，盡量減(jian)少(shao)對(dui)組織的損(sun)傷，並去(qu)除(chu)多(duo)余的脂肪(fang)、結締(di)組織等非(fei)目的(de)組織。

2. 清洗(xi)：將取(qu)出的組織用(yong)預(yu)冷的(de)無(wu)菌(jun)PBS沖(chong)洗(xi)數次(ci)，以去(qu)除血(xue)液(ye)和雜(za)質。

3. 剪切(qie)：將組織剪成(cheng)約1 - 2mm³的小(xiao)塊，以(yi)便(bian)後續消化(hua)。

細(xi)胞(bao)分離

1. 消化(hua)：將剪(jian)碎的(de)組織塊放入含(han)有(you)適量(liang)消(xiao)化(hua)酶的離(li)心管(guan)中，在(zai)37℃恒(heng)溫(wen)搖(yao)床(chuang)或(huo)培(pei)養(yang)箱中消化壹段(duan)時(shi)間(jian)。期(qi)間(jian)可(ke)輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃(huang)離(li)心(xin)管，使消(xiao)化更(geng)均勻。

2. 終止(zhi)消化(hua)：當組織塊大部(bu)分(fen)被(bei)消化成單(dan)細(xi)胞(bao)懸液或(huo)小細(xi)胞(bao)團時，加(jia)入含(han)血(xue)清(qing)的(de)培養(yang)基終(zhong)止消化(hua)。

3. 過濾與離(li)心(xin)：用(yong)細(xi)胞(bao)篩(shai)過(guo)濾細(xi)胞(bao)懸液，去(qu)除未(wei)消(xiao)化(hua)的(de)組織碎片(pian)，然後將(jiang)濾液以(yi)適當的轉(zhuan)速離心(xin)，收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)沈(chen)澱(dian)。

細(xi)胞(bao)觀(guan)察與檢(jian)測(ce)

1. 日常觀(guan)察：每天(tian)用(yong)倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀(guan)察細(xi)胞(bao)的形態(tai)、生(sheng)長狀態(tai)、密(mi)度等，記(ji)錄細(xi)胞(bao)的變化(hua)情(qing)況，如(ru)發現(xian)細(xi)胞(bao)汙(wu)染或異常，及(ji)時采(cai)取相應措施(shi)。
2. 細(xi)胞(bao)計數與(yu)活力檢測(ce)：在(zai)需要(yao)時，可(ke)采(cai)用(yong)臺(tai)盼(pan)藍(lan)染色等方(fang)法對(dui)細(xi)胞(bao)進行(xing)計(ji)數和活力(li)檢(jian)測(ce)，以(yi)了解(jie)細(xi)胞(bao)的生長(chang)情(qing)況和(he)健康狀態(tai)。

壹、取(qu)材(cai)與(yu)分離

1. 快速操作

- 組織取材(cai)後需立(li)即處理(li)，避(bi)免(mian)長時(shi)間暴露(lu)於(yu)室(shi)溫或(huo)非(fei)營養(yang)環(huan)境(jing)。

- 使用(yong)無(wu)菌(jun) PBS 或(huo)生理(li)鹽(yan)水(shui)沖(chong)洗(xi)組織，去除(chu)血(xue)液(ye)、雜(za)質。

2. 消化(hua)酶選擇(ze)

- 根據組織類(lei)型選擇消化(hua)酶，避(bi)免(mian)過度消(xiao)化導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)損(sun)傷。

- 消化(hua)時間(jian)需嚴(yan)格控制(zhi)（通(tong)常 10-30 分(fen)鐘），可(ke)通(tong)過顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀(guan)察細(xi)胞(bao)解(jie)離狀態(tai)。

二、培(pei)養(yang)條(tiao)件優(you)化

1. 培養(yang)基選(xuan)擇

- 使用(yong)含(han)血(xue)清(qing)或(huo)特定(ding)生(sheng)長因子的(de)培養(yang)基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分細(xi)胞(bao)需添(tian)加(jia)胰島(dao)素(su)、EGF 等。

- 避(bi)免(mian)頻繁(fan)更(geng)換(huan)培養(yang)基品(pin)牌或批(pi)次(ci)，減(jian)少(shao)細(xi)胞(bao)適應(ying)壓(ya)力(li)。

2. 貼(tie)壁與(yu)傳(chuan)代

- 原代細(xi)胞(bao)貼(tie)壁能力較(jiao)弱(ruo)，可(ke)能需要(yao)包被(bei)培養(yang)皿(min)（如(ru)膠原蛋(dan)白、多(duo)聚(ju)賴(lai)氨(an)酸）。

- 傳(chuan)代時(shi)密(mi)度建議(yi)控制(zhi)在(zai) 70%-80%，過(guo)度匯(hui)合(he)會導(dao)致(zhi)接觸(chu)抑制(zhi)和分化(hua)。

三(san)、汙(wu)染控制(zhi)

1. 無(wu)菌(jun)操作

- 全(quan)程(cheng)在(zai)超(chao)凈臺(tai)操作，使用(yong)壹(yi)次(ci)性(xing)耗(hao)材(cai)，避(bi)免(mian)交叉(cha)汙(wu)染。

- 培養(yang)基中可(ke)添(tian)加(jia)雙抗，但長期(qi)使用(yong)可(ke)能影響(xiang)細(xi)胞(bao)活性。

2. 支(zhi)原體檢測(ce)

- 定期(qi)檢(jian)測(ce)支(zhi)原體汙(wu)染（如(ru) PCR 法），汙(wu)染後需及(ji)時丟(diu)棄細(xi)胞(bao)。

四、狀態(tai)監(jian)控

1. 日常觀(guan)察

- 每天(tian)檢查(zha)細(xi)胞(bao)形態(tai)、密(mi)度及(ji)培養(yang)基顏(yan)色，及(ji)時更(geng)換(huan)培養(yang)基（通(tong)常每(mei) 2-3 天換(huan)液壹(yi)次）。

- 異常形(xing)態(tai)（如(ru)細(xi)胞(bao)變圓(yuan)、碎片(pian)增多）可(ke)能提示(shi)汙(wu)染或營養(yang)不(bu)足(zu)。

2. 傳(chuan)代與(yu)凍存(cun)

- 原代細(xi)胞(bao)分裂次(ci)數有(you)限（壹般(ban) 5-10 代），需及(ji)時凍存(cun)早期(qi)代(dai)次細(xi)胞(bao)。

- 凍存(cun)液建議(yi)使用(yong) DMSO+血(xue)清(qing)（或(huo)專(zhuan)用(yong)凍存(cun)培養(yang)基），梯(ti)度降(jiang)溫(wen)後液(ye)氮(dan)保(bao)存(cun)。