【概(gai)要描(miao)述】人(ren)微(wei)血管(guan)周細胞(bao)公司正(zheng)在(zai)出售的產品(pin)：OLN-93大(da)鼠(shu)少(shao)突(tu)膠質前(qian)體細胞(bao)系人(ren)膠質瘤組織(zhi)源細胞(bao)人(ren)宮頸癌組(zu)織(zhi)源細胞(bao)小鼠(shu)嗅上(shang)皮(pi)細胞(bao)大鼠(shu)前(qian)列腺平滑(hua)肌細胞(bao)人(ren)皮(pi)膚(fu)癌組(zu)織(zhi)源細胞(bao)小鼠(shu)外周血(xue)中(zhong)性粒細胞(bao)人(ren)子(zi)宮肌瘤組織(zhi)源細胞(bao)小鼠(shu)骨(gu)髓(sui)樹突(tu)狀細胞(bao)(DC細胞(bao))大鼠(shu)骨(gu)髓(sui)單(dan)核(he)細胞(bao)

本公(gong)司(si)所(suo)有(you)產品(pin)僅(jin)供(gong)科學(xue)實(shi)驗，不(bu)做其(qi)他科(ke)學(xue)實(shi)驗外的使用(yong)！

人(ren)微(wei)血管(guan)周分離(li)自(zi)微(wei)血管(guan)組(zu)織(zhi)；周細胞(bao)（pericyte）又(you)稱Rouget細胞(bao)和壁細胞(bao)，是壹(yi)種包(bao)圍全身(shen)毛(mao)細血管和靜(jing)脈中內(nei)皮(pi)細胞(bao)的細胞(bao)，可(ke)以(yi)收縮(suo)。周細胞(bao)嵌入毛(mao)細血管內皮(pi)細胞(bao)的基(ji)膜(mo)中，通(tong)過(guo)物理接(jie)觸和(he)旁分泌(mi)信號與(yu)內皮(pi)細胞(bao)進行細胞(bao)通(tong)訊(xun)，監視(shi)和穩(wen)定(ding)內皮(pi)細胞(bao)的成(cheng)熟過(guo)程。此外，周細胞(bao)還具(ju)有(you)調(tiao)控(kong)毛(mao)細血管血流(liu)量、細胞(bao)碎屑(xie)清(qing)除(chu)和吞噬(shi)以及(ji)血腦(nao)屏(ping)障(zhang)滲(shen)透(tou)性的作用(yong)，其(qi)多(duo)功(gong)能(neng)性是目(mu)前(qian)研究(jiu)的熱(re)點之(zhi)壹，所(suo)以(yi)對(dui)血管周細胞(bao)的生(sheng)物學(xue)特征(zheng)、標(biao)記(ji)物(wu)、細胞(bao)功能(neng)等的研(yan)究都(dou)為(wei)相關(guan)研(yan)究(jiu)提供(gong)基礎資料(liao)。周細胞(bao)產生(sheng)手(shou)指狀的外延以(yi)調(tiao)控(kong)毛(mao)細血管的血(xue)流(liu)量。周細胞(bao)和內皮(pi)細胞(bao)之(zhi)間共(gong)同擁(yong)有(you)壹(yi)個(ge)基膜(mo)，基膜(mo)上有(you)多(duo)種細胞(bao)連(lian)接，包(bao)括(kuo)多(duo)種整合素、神(shen)經(jing)鈣黏素、纖(xian)連(lian)蛋白(bai)以(yi)及(ji)接合素。它(ta)還(hai)參與(yu)毛(mao)細血管直徑的雙(shuang)向調(tiao)控(kong)；毛(mao)細血管受損(sun)時(shi)，周細胞(bao)還可(ke)增殖，分化(hua)為(wei)內(nei)皮(pi)細胞(bao)和成纖(xian)維(wei)細胞(bao)。
方法簡(jian)介(jie)：

公司(si)實(shi)驗室(shi)分離(li)的人(ren)血(xue)管(guan)周采(cai)用(yong)膠原酶-中性dan白(bai)酶聯(lian)合消(xiao)化(hua)法及(ji)不(bu)銹鋼網(wang)篩過濾(lv)法(fa)結(jie)合密(mi)度(du)梯度(du)離心(xin)法制備而(er)來(lai)，細胞(bao)總量約為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量檢(jian)測(ce)：

公司(si)實(shi)驗室(shi)分離(li)的人(ren)微(wei)血管(guan)周經(jing)alpha-SMA免(mian)疫熒(ying)光鑒定(ding)，純(chun)度(du)可(ke)達90%以(yi)上(shang)，且不(bu)含有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體(ti)、細菌(jun)、酵(jiao)母和(he)真菌(jun)等。

培(pei)養基 含FBS、生(sheng)長(chang)添(tian)加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液(ye)頻率(lv) 每(mei)2-3天換(huan)液(ye)壹次

生(sheng)長(chang)特性 貼壁

細胞(bao)形態 成纖(xian)維(wei)細胞(bao)樣

傳(chuan)代特性 可(ke)傳(chuan)5代左(zuo)右；3代以(yi)內狀(zhuang)態好

消(xiao)化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶

培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian) 氣相：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備工作

1. 實(shi)驗器(qi)材(cai)準(zhun)備：準備(bei)無菌(jun)的培(pei)養皿(min)、培(pei)養(yang)瓶(ping)、移液(ye)管、離(li)心(xin)管、手(shou)術(shu)器械等，並(bing)進(jin)行高壓滅(mie)菌(jun)或(huo)其(qi)他合適的消(xiao)毒處理。

2. 試(shi)劑準備：配制或(huo)購買合適的培(pei)養基(ji)、消(xiao)化(hua)酶（如、膠原酶等）、胎(tai)牛(niu)血清(qing)、雙(shuang)抗等試(shi)劑，確保(bao)其(qi)無菌(jun)且在(zai)有(you)效(xiao)期(qi)內(nei)。

3. 實(shi)驗動(dong)物(wu)或(huo)組織(zhi)來(lai)源準(zhun)備：根據實(shi)驗需(xu)求(qiu)，選(xuan)擇合適的動(dong)物(wu)並(bing)進(jin)行相應(ying)的麻(ma)醉或(huo)處死，獲取(qu)所需(xu)組(zu)織(zhi)；或(huo)從已(yi)有(you)的組(zu)織(zhi)樣本庫(ku)中獲(huo)取(qu)組織(zhi)。

取(qu)材與(yu)處理

1. 取(qu)材：在(zai)無菌(jun)條(tiao)件(jian)下，迅(xun)速取(qu)出目(mu)標(biao)組(zu)織(zhi)，盡量減少(shao)對組織(zhi)的損(sun)傷(shang)，並(bing)去(qu)除多(duo)余(yu)的脂肪、結(jie)締組織(zhi)等非目(mu)的組(zu)織(zhi)。

2. 清(qing)洗(xi)：將取(qu)出的組(zu)織(zhi)用(yong)預(yu)冷(leng)的無菌(jun)PBS沖(chong)洗(xi)數(shu)次，以去(qu)除(chu)血液(ye)和雜(za)質(zhi)。

3. 剪(jian)切(qie)：將組(zu)織(zhi)剪(jian)成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的小塊(kuai)，以便後續(xu)消(xiao)化(hua)。

細胞(bao)分離(li)

1. 消(xiao)化(hua)：將剪(jian)碎(sui)的組(zu)織(zhi)塊(kuai)放(fang)入含(han)有(you)適(shi)量消(xiao)化(hua)酶的離(li)心(xin)管中，在(zai)37℃恒溫搖床(chuang)或(huo)培養(yang)箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)壹段時(shi)間(jian)。期(qi)間(jian)可(ke)輕(qing)輕(qing)搖晃(huang)離心(xin)管，使消(xiao)化(hua)更均(jun)勻。

2. 終(zhong)止消(xiao)化(hua)：當組(zu)織(zhi)塊(kuai)大部分被(bei)消(xiao)化(hua)成單(dan)細胞(bao)懸液(ye)或(huo)小細胞(bao)團時(shi)，加(jia)入(ru)含(han)血(xue)清(qing)的培(pei)養基(ji)終止消(xiao)化(hua)。

3. 過濾(lv)與(yu)離(li)心(xin)：用(yong)細胞(bao)篩過濾(lv)細胞(bao)懸液(ye)，去除(chu)未消(xiao)化(hua)的組(zu)織(zhi)碎片(pian)，然(ran)後將濾(lv)液(ye)以適(shi)當(dang)的轉(zhuan)速(su)離(li)心(xin)，收集細胞(bao)沈澱。

細胞(bao)觀察(cha)與(yu)檢(jian)測(ce)

1. 日常(chang)觀察(cha)：每(mei)天用(yong)倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡觀察(cha)細胞(bao)的形(xing)態、生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態、密(mi)度(du)等，記錄細胞(bao)的變(bian)化(hua)情況(kuang)，如發現(xian)細胞(bao)汙(wu)染或(huo)異(yi)常(chang)，及(ji)時(shi)采(cai)取(qu)相應(ying)措施(shi)。
2. 細胞(bao)計數(shu)與活力檢(jian)測(ce)：在(zai)需(xu)要時(shi)，可(ke)采(cai)用(yong)臺(tai)盼(pan)藍(lan)染(ran)色(se)等方法(fa)對細胞(bao)進行計(ji)數(shu)和活力檢(jian)測(ce)，以了(le)解細胞(bao)的生(sheng)長(chang)情(qing)況和健康(kang)狀(zhuang)態。

壹(yi)、取(qu)材與(yu)分離(li)

1. 快速(su)操(cao)作

- 組織(zhi)取(qu)材後需(xu)立即(ji)處理，避(bi)免(mian)長(chang)時(shi)間(jian)暴露(lu)於(yu)室溫(wen)或(huo)非營養環(huan)境。

- 使用(yong)無菌(jun) PBS 或(huo)生(sheng)理鹽水沖(chong)洗(xi)組織(zhi)，去除血(xue)液(ye)、雜質(zhi)。

2. 消(xiao)化(hua)酶選擇

- 根據組織(zhi)類型(xing)選(xuan)擇消(xiao)化(hua)酶，避免(mian)過度(du)消(xiao)化(hua)導(dao)致(zhi)細胞(bao)損(sun)傷(shang)。

- 消(xiao)化(hua)時(shi)間(jian)需(xu)嚴(yan)格(ge)控(kong)制(zhi)（通(tong)常(chang) 10-30 分鐘(zhong)），可(ke)通(tong)過(guo)顯微(wei)鏡觀察(cha)細胞(bao)解離狀(zhuang)態。

二、培(pei)養條件(jian)優(you)化(hua)

1. 培養基選擇

- 使用(yong)含(han)血(xue)清(qing)或(huo)特定(ding)生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)的培(pei)養基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細胞(bao)需(xu)添(tian)加(jia)胰(yi)島(dao)素(su)、EGF 等。

- 避免(mian)頻繁更換(huan)培(pei)養基品牌或(huo)批(pi)次，減少(shao)細胞(bao)適應(ying)壓(ya)力(li)。

2. 貼壁與傳(chuan)代

- 原代細胞(bao)貼壁能(neng)力較(jiao)弱(ruo)，可(ke)能(neng)需(xu)要包(bao)被(bei)培(pei)養(yang)皿(min)（如(ru)膠原蛋白(bai)、多(duo)聚(ju)賴(lai)氨酸）。

- 傳(chuan)代時(shi)密(mi)度(du)建(jian)議控(kong)制(zhi)在(zai) 70%-80%，過度(du)匯合會(hui)導(dao)致(zhi)接(jie)觸抑(yi)制和(he)分化(hua)。

三(san)、汙(wu)染控(kong)制(zhi)

1. 無菌(jun)操(cao)作

- 全程(cheng)在(zai)超凈(jing)臺(tai)操(cao)作，使用(yong)壹(yi)次性耗(hao)材，避(bi)免(mian)交(jiao)叉(cha)汙(wu)染。

- 培養基中(zhong)可(ke)添(tian)加(jia)雙(shuang)抗，但長(chang)期(qi)使用(yong)可(ke)能(neng)影響(xiang)細胞(bao)活性。

2. 支(zhi)原體(ti)檢(jian)測(ce)

- 定(ding)期(qi)檢(jian)測(ce)支原(yuan)體汙(wu)染（如 PCR 法），汙(wu)染後需(xu)及(ji)時(shi)丟(diu)棄細胞(bao)。

四、狀態監控(kong)

1. 日常觀察(cha)

- 每天檢(jian)查(zha)細胞(bao)形態、密(mi)度(du)及(ji)培養(yang)基顏色(se)，及(ji)時(shi)更(geng)換(huan)培(pei)養基（通(tong)常(chang)每 2-3 天換(huan)液(ye)壹次）。

- 異(yi)常(chang)形態（如(ru)細胞(bao)變圓、碎片(pian)增多(duo)）可(ke)能(neng)提示汙(wu)染或(huo)營養不(bu)足(zu)。

2. 傳(chuan)代與(yu)凍存(cun)

- 原代(dai)細胞(bao)分裂次數(shu)有(you)限(xian)（壹(yi)般(ban) 5-10 代(dai)），需(xu)及(ji)時(shi)凍(dong)存(cun)早期(qi)代(dai)次細胞(bao)。

- 凍(dong)存(cun)液(ye)建(jian)議使用(yong) DMSO+血(xue)清(qing)（或(huo)專用(yong)凍(dong)存(cun)培(pei)養基），梯(ti)度(du)降(jiang)溫(wen)後液(ye)氮(dan)保(bao)存(cun)。