【概要(yao)描(miao)述(shu)】人(ren)退(tui)行(xing)性椎(zhui)間盤(pan)髓(sui)核細胞(bao)公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出售的產(chan)品：RG2 [D74]大鼠(shu)神經(jing)膠質瘤(liu)細胞(bao)大鼠(shu)表(biao)皮(pi)成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)人胃(wei)癌(ai)組(zu)織(zhi)源(yuan)成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)小(xiao)鼠(shu)角(jiao)膜(mo)基質細胞(bao)大鼠(shu)表(biao)皮(pi)角(jiao)化(hua)細胞(bao)人前列(lie)腺(xian)癌(ai)組(zu)織(zhi)源(yuan)細胞(bao)小(xiao)鼠(shu)腸(chang)道幹(gan)細胞(bao)大鼠(shu)腸(chang)道幹(gan)細胞(bao)人髓(sui)母(mu)細胞(bao)瘤(liu)組(zu)織(zhi)源(yuan)細胞(bao)大鼠(shu)肺(fei)泡(pao)巨(ju)噬(shi)細胞(bao)

本公(gong)司(si)所有產(chan)品僅供(gong)科學(xue)實(shi)驗，不(bu)做(zuo)其(qi)他(ta)科學(xue)實(shi)驗外的(de)使(shi)用！

人退行(xing)性椎(zhui)間盤(pan)髓(sui)核分(fen)離(li)退(tui)行(xing)性椎(zhui)間盤(pan)組(zu)織(zhi)；椎(zhui)間盤(pan)是(shi)位於(yu)脊柱(zhu)兩(liang)椎(zhui)體(ti)之(zhi)間，分(fen)為(wei)中央部的(de)髓核，富(fu)於(yu)彈(dan)性的膠狀物(wu)質；周(zhou)圍(wei)部的(de)纖維(wei)環，由(you)多(duo)層纖維(wei)軟骨環按(an)同(tong)心(xin)圓(yuan)排(pai)列(lie)。上(shang)下有(you)軟骨板，是(shi)透(tou)明(ming)軟骨復(fu)蓋(gai)於椎(zhui)體(ti)上(shang)，下面骺環中間的(de)骨(gu)面。上(shang)下的(de)軟骨板與(yu)纖(xian)維(wei)環壹(yi)起(qi)將髓核密(mi)封起(qi)來。纖(xian)維(wei)環由(you)膠原纖維(wei)束(shu)的(de)纖維(wei)軟骨構(gou)成(cheng)，位於(yu)髓核的(de)四(si)周(zhou)。纖(xian)維(wei)環的(de)纖(xian)維(wei)束(shu)相(xiang)互斜行(xing)交叉重(zhong)疊，使(shi)纖維(wei)環成(cheng)為堅實(shi)的(de)組(zu)織(zhi)，能承(cheng)受較(jiao)大的彎(wan)曲和扭(niu)轉負(fu)荷。髓核，是(shi)乳(ru)白(bai)色半(ban)透(tou)明(ming)膠狀體，富於(yu)彈(dan)性，為椎(zhui)間盤(pan)結(jie)構(gou)的(de)壹(yi)部分(fen)，位於(yu)兩(liang)軟骨板與(yu)纖(xian)維(wei)環之(zhi)間。由(you)縱(zong)橫(heng)交錯(cuo)的纖維(wei)網(wang)狀結構(gou)即軟骨細胞(bao)和蛋(dan)白多(duo)糖黏液(ye)樣基質構(gou)成(cheng)的彈(dan)性膠凍(dong)物(wu)質。嬰(ying)幼兒時(shi)期(qi)的髓(sui)核含水(shui)量為(wei)80%-90%，即使(shi)到(dao)了(le)老年，其(qi)含水(shui)量也(ye)在(zai)70%上(shang)下。髓(sui)核在(zai)出(chu)生(sheng)時(shi)體積(ji)大而(er)松(song)散(san)，位於(yu)椎(zhui)間盤(pan)的(de)中央，至成(cheng)年時(shi)位置(zhi)移至(zhi)椎(zhui)間盤(pan)的(de)中後部；在(zai)成(cheng)年以前構(gou)成(cheng)髓核的(de)主(zhu)要(yao)物(wu)質是(shi)大(da)量蛋(dan)白多(duo)糖復(fu)合體(ti)、膠原纖維(wei)和纖(xian)維(wei)軟骨，隨著年齡的增長(chang)，髓核中的蛋(dan)白多(duo)糖解聚增多，水分逐漸減少，膠原增粗並(bing)逐(zhu)漸被纖維(wei)軟骨所替代(dai)。
方法(fa)簡(jian)介：

公(gong)司(si)實(shi)驗室(shi)分(fen)離(li)的(de)人(ren)退(tui)行(xing)性椎(zhui)間盤(pan)髓(sui)核采(cai)用膠原酶(mei)-中性dan白酶(mei)混(hun)合消化法(fa)並(bing)結合軟骨細胞(bao)專(zhuan)用培養基(ji)培(pei)養(yang)篩選(xuan)制備(bei)而(er)來，細胞(bao)總量約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質量檢(jian)測：

公(gong)司(si)實(shi)驗室(shi)分(fen)離(li)的(de)人(ren)退(tui)行(xing)性椎(zhui)間盤(pan)髓(sui)核經(jing)Ⅱ型(xing)膠原蛋(dan)白免(mian)疫熒(ying)光鑒(jian)定(ding)，純度可達(da)90%以(yi)上(shang)，且(qie)不(bu)含有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌(jun)、酵(jiao)母(mu)和真菌等。

培養基(ji) 含FBS、生(sheng)長(chang)添加劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

換液(ye)頻(pin)率 每(mei)3-4天換液(ye)壹(yi)次

生(sheng)長(chang)特性 貼壁

細胞(bao)形態 梭形、多角(jiao)形

傳代(dai)特(te)性 可傳(chuan)5代(dai)左右(you)；3代(dai)以(yi)內狀態好

消化液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白酶(mei)

培養條(tiao)件 氣相(xiang)：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準備(bei)工(gong)作(zuo)

1. 實(shi)驗器材(cai)準備(bei)：準備(bei)無(wu)菌的(de)培養(yang)皿(min)、培(pei)養(yang)瓶(ping)、移液(ye)管、離心(xin)管、手(shou)術器械等，並進行(xing)高(gao)壓滅(mie)菌(jun)或其(qi)他(ta)合適(shi)的(de)消毒(du)處理(li)。

2. 試(shi)劑(ji)準備(bei)：配制或購(gou)買(mai)合適(shi)的(de)培養(yang)基、消化酶(mei)（如、膠原酶(mei)等）、胎(tai)牛(niu)血(xue)清、雙抗等(deng)試(shi)劑(ji)，確(que)保其(qi)無(wu)菌且(qie)在有(you)效(xiao)期(qi)內。

3. 實(shi)驗動(dong)物(wu)或組(zu)織(zhi)來源(yuan)準備(bei)：根據實(shi)驗需求，選(xuan)擇(ze)合適(shi)的(de)動(dong)物(wu)並(bing)進行(xing)相(xiang)應的(de)麻醉或處死，獲取(qu)所需組(zu)織(zhi)；或從(cong)已有(you)的組(zu)織(zhi)樣本(ben)庫(ku)中獲取(qu)組(zu)織(zhi)。

取(qu)材(cai)與(yu)處理(li)

1. 取(qu)材(cai)：在(zai)無(wu)菌條(tiao)件下(xia)，迅(xun)速取(qu)出目(mu)標組(zu)織(zhi)，盡(jin)量減少對組(zu)織(zhi)的損(sun)傷，並(bing)去除多余的(de)脂(zhi)肪、結締(di)組(zu)織(zhi)等非(fei)目(mu)的組(zu)織(zhi)。

2. 清洗：將取(qu)出的(de)組(zu)織(zhi)用預冷的無(wu)菌PBS沖(chong)洗數次(ci)，以去除血(xue)液(ye)和雜(za)質。

3. 剪切：將組(zu)織(zhi)剪成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊(kuai)，以(yi)便後續消化。

細胞(bao)分離(li)

1. 消化：將剪碎(sui)的組(zu)織(zhi)塊(kuai)放(fang)入(ru)含有(you)適量消化酶(mei)的離(li)心(xin)管中，在37℃恒(heng)溫搖(yao)床或培(pei)養(yang)箱中消化壹(yi)段(duan)時(shi)間。期(qi)間可輕輕搖(yao)晃離心(xin)管，使(shi)消化更(geng)均勻。

2. 終止消化：當(dang)組(zu)織(zhi)塊(kuai)大(da)部分(fen)被消化成(cheng)單細胞(bao)懸液(ye)或小(xiao)細胞(bao)團時(shi)，加入(ru)含血(xue)清的培養基(ji)終止消化。

3. 過濾與離(li)心(xin)：用細胞(bao)篩過(guo)濾細胞(bao)懸液(ye)，去除未(wei)消化的(de)組(zu)織(zhi)碎(sui)片，然(ran)後將濾液(ye)以適當(dang)的轉速(su)離心(xin)，收(shou)集(ji)細胞(bao)沈(chen)澱。

細胞(bao)觀察與檢(jian)測

1. 日(ri)常觀(guan)察：每(mei)天用倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡觀察細胞(bao)的形態、生(sheng)長(chang)狀態、密度等(deng)，記(ji)錄(lu)細胞(bao)的變(bian)化(hua)情(qing)況，如(ru)發現細胞(bao)汙染(ran)或異(yi)常(chang)，及時(shi)采取(qu)相(xiang)應措(cuo)施(shi)。
2. 細胞(bao)計數(shu)與(yu)活力檢(jian)測：在(zai)需要(yao)時(shi)，可采(cai)用臺盼(pan)藍染(ran)色等(deng)方(fang)法(fa)對(dui)細胞(bao)進行(xing)計(ji)數和活力檢(jian)測，以(yi)了(le)解細胞(bao)的生(sheng)長(chang)情(qing)況和健(jian)康狀態。

壹(yi)、取(qu)材(cai)與(yu)分(fen)離(li)

1. 快速操(cao)作(zuo)

- 組(zu)織(zhi)取(qu)材(cai)後需立即處理(li)，避免(mian)長(chang)時(shi)間暴(bao)露(lu)於(yu)室(shi)溫或非(fei)營(ying)養(yang)環境。

- 使(shi)用無(wu)菌 PBS 或生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)沖(chong)洗組(zu)織(zhi)，去除血(xue)液(ye)、雜質。

2. 消化酶(mei)選(xuan)擇(ze)

- 根據組(zu)織(zhi)類(lei)型(xing)選(xuan)擇(ze)消化酶(mei)，避免(mian)過(guo)度消化導(dao)致細胞(bao)損傷。

- 消化時(shi)間需嚴格控制（通(tong)常(chang) 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可通(tong)過(guo)顯(xian)微(wei)鏡觀察細胞(bao)解離狀態。

二、培養條(tiao)件優(you)化(hua)

1. 培養基(ji)選(xuan)擇(ze)

- 使(shi)用含血(xue)清或特(te)定(ding)生(sheng)長(chang)因子(zi)的(de)培養基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分(fen)細胞(bao)需添加胰(yi)島素、EGF 等(deng)。

- 避免(mian)頻(pin)繁更(geng)換培養(yang)基品(pin)牌或批(pi)次，減少細胞(bao)適應(ying)壓力。

2. 貼壁與(yu)傳代(dai)

- 原代(dai)細胞(bao)貼壁能(neng)力較(jiao)弱，可能(neng)需要(yao)包被培(pei)養皿(min)（如(ru)膠原蛋(dan)白、多(duo)聚賴(lai)氨(an)酸(suan)）。

- 傳代(dai)時(shi)密度建(jian)議(yi)控制在(zai) 70%-80%，過(guo)度匯合會導致接(jie)觸抑(yi)制和分(fen)化(hua)。

三、汙染(ran)控制

1. 無(wu)菌操(cao)作(zuo)

- 全(quan)程在超凈臺操作(zuo)，使(shi)用壹(yi)次性耗材(cai)，避免(mian)交叉汙染(ran)。

- 培養基(ji)中可添(tian)加雙抗，但(dan)長(chang)期(qi)使(shi)用可能(neng)影響細胞(bao)活性。

2. 支原體檢(jian)測

- 定期(qi)檢(jian)測支(zhi)原體汙染(ran)（如 PCR 法(fa)），汙染(ran)後需及時(shi)丟棄(qi)細胞(bao)。

四、狀態監控(kong)

1. 日(ri)常觀(guan)察

- 每(mei)天檢(jian)查細胞(bao)形態、密(mi)度及培(pei)養基顏色，及時(shi)更換培養(yang)基（通(tong)常(chang)每(mei) 2-3 天換液(ye)壹(yi)次）。

- 異常形態（如(ru)細胞(bao)變圓(yuan)、碎(sui)片增多）可能(neng)提示(shi)汙染(ran)或營(ying)養(yang)不(bu)足(zu)。

2. 傳代(dai)與(yu)凍(dong)存

- 原代(dai)細胞(bao)分裂次數(shu)有限(xian)（壹(yi)般 5-10 代(dai)），需及時(shi)凍存早期(qi)代(dai)次(ci)細胞(bao)。

- 凍存液(ye)建議(yi)使(shi)用 DMSO+血(xue)清（或專(zhuan)用凍存培養(yang)基），梯度降溫後液(ye)氮保存。