【概要描述】人(ren)乳腺癌(ai)血管(guan)內皮(pi)細(xi)胞公(gong)司正(zheng)在出售(shou)的產(chan)品(pin)：B104大鼠神經母(mu)細(xi)胞大鼠腹(fu)腔巨噬細(xi)胞人(ren)胚肺(fei)成纖(xian)維(wei)細(xi)胞小鼠結(jie)腸黏(nian)膜(mo)上皮細(xi)胞小鼠精(jing)原(yuan)幹細(xi)胞大鼠睪丸(wan)支(zhi)持細(xi)胞人(ren)骨髓(sui)來(lai)源(yuan)內(nei)皮(pi)祖細(xi)胞小鼠脊髓(sui)成纖(xian)維(wei)細(xi)胞大鼠骨髓(sui)樹(shu)突(tu)狀細(xi)胞(DC細(xi)胞)人(ren)外周(zhou)血來(lai)源(yuan)內(nei)皮(pi)祖細(xi)胞

人(ren)乳腺癌(ai)血管(guan)內皮(pi)分(fen)離(li)自(zi)患(huan)有乳腺癌(ai)的女性乳腺組(zu)織(zhi)；女性乳腺是(shi)由(you)皮(pi)膚(fu)、纖(xian)維(wei)組(zu)織(zhi)、乳(ru)腺腺體和(he)脂肪(fang)組(zu)成的，乳腺癌(ai)是(shi)發(fa)生在乳腺腺上皮組(zu)織(zhi)的惡(e)性腫瘤(liu)。乳腺癌(ai)中99%發(fa)生在女性，男(nan)性僅占(zhan)1%。乳腺並(bing)不(bu)是(shi)維(wei)持機(ji)體生命活動的重要器官(guan)，原位(wei)乳(ru)腺癌(ai)並(bing)不(bu)致(zhi)命；但由於(yu)乳腺癌(ai)細(xi)胞喪失(shi)了正(zheng)常(chang)細(xi)胞的特性，細(xi)胞之(zhi)間連(lian)接(jie)松(song)散(san)，容(rong)易脫落(luo)。癌(ai)細(xi)胞壹旦脫落(luo)，遊離(li)的癌(ai)細(xi)胞可以(yi)隨血液或(huo)淋(lin)巴液播(bo)散全(quan)身，形成(cheng)轉(zhuan)移，危(wei)及(ji)生命。目前(qian)，乳(ru)腺癌(ai)已成(cheng)為威(wei)脅(xie)女性身心(xin)健(jian)康的常(chang)見(jian)腫(zhong)瘤(liu)。
方(fang)法簡介：

公(gong)司實(shi)驗室分(fen)離(li)的人(ren)乳腺癌(ai)血管(guan)內皮(pi)采用(yong)yi蛋(dan)白(bai)酶-膠(jiao)原(yuan)酶混合消(xiao)化法結(jie)合差速貼壁法，並(bing)通(tong)過(guo)內(nei)皮細(xi)胞專用(yong)培(pei)養(yang)基培(pei)養(yang)篩選(xuan)制(zhi)備(bei)而(er)來(lai)，細(xi)胞總量(liang)約為5×10?cells/瓶。
質量(liang)檢測：

公(gong)司實(shi)驗室分(fen)離(li)的人(ren)乳腺癌(ai)血管(guan)內皮(pi)經CD31免(mian)疫(yi)熒(ying)光(guang)鑒(jian)定(ding)，純度(du)可達90%以上，且不(bu)含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體(ti)、細(xi)菌(jun)、酵(jiao)母(mu)和(he)真菌(jun)等。

本(ben)公(gong)司所有產(chan)品(pin)僅供科學(xue)實(shi)驗，不(bu)做其(qi)他科(ke)學(xue)實(shi)驗外的使(shi)用(yong)！

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明(ming)膠(jiao)（0.1%）

培(pei)養(yang)基 含(han)FBS、生長添(tian)加劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液頻(pin)率 每(mei)2-3天(tian)換液壹(yi)次

生長特(te)性 貼壁

細(xi)胞形態 內(nei)皮細(xi)胞樣

傳代(dai)特性 可傳2-3代(dai)

消(xiao)化液 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶

培(pei)養(yang)條件 氣(qi)相：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工作

1. 實(shi)驗器材準備(bei)：準備(bei)無(wu)菌的培(pei)養(yang)皿(min)、培(pei)養(yang)瓶、移液管(guan)、離(li)心(xin)管(guan)、手術器械等，並(bing)進行(xing)高壓滅(mie)菌或其(qi)他合適(shi)的消(xiao)毒處(chu)理。

2. 試(shi)劑準(zhun)備(bei)：配制(zhi)或(huo)購買(mai)合適(shi)的培(pei)養(yang)基、消(xiao)化酶（如(ru)、膠(jiao)原(yuan)酶等(deng)）、胎(tai)牛(niu)血清、雙抗(kang)等試(shi)劑(ji)，確(que)保其(qi)無(wu)菌且在有效期內。

3. 實(shi)驗動物或組(zu)織(zhi)來(lai)源(yuan)準(zhun)備(bei)：根(gen)據(ju)實(shi)驗需求，選(xuan)擇(ze)合適(shi)的動物並(bing)進行(xing)相應的麻醉(zui)或(huo)處死(si)，獲取所需組(zu)織(zhi)；或(huo)從已(yi)有的組(zu)織(zhi)樣(yang)本(ben)庫中(zhong)獲取組(zu)織(zhi)。

取(qu)材與處理

1. 取(qu)材：在無(wu)菌條件下，迅速取(qu)出目標(biao)組(zu)織(zhi)，盡(jin)量(liang)減少(shao)對組(zu)織(zhi)的損(sun)傷，並(bing)去(qu)除(chu)多(duo)余(yu)的脂肪(fang)、結(jie)締組(zu)織(zhi)等(deng)非(fei)目(mu)的組(zu)織(zhi)。

2. 清洗(xi)：將取(qu)出的組(zu)織(zhi)用(yong)預(yu)冷(leng)的無(wu)菌PBS沖洗(xi)數次，以去(qu)除血液和(he)雜質。

3. 剪(jian)切：將組(zu)織(zhi)剪(jian)成約1 - 2mm³的小塊(kuai)，以(yi)便後(hou)續(xu)消(xiao)化。

細(xi)胞分(fen)離(li)

1. 消(xiao)化：將剪(jian)碎的組(zu)織(zhi)塊(kuai)放(fang)入(ru)含有適(shi)量(liang)消(xiao)化酶的離(li)心(xin)管(guan)中，在37℃恒(heng)溫(wen)搖床(chuang)或培(pei)養(yang)箱(xiang)中消(xiao)化壹(yi)段(duan)時間。期間可輕(qing)輕搖晃(huang)離(li)心(xin)管(guan)，使(shi)消(xiao)化更(geng)均勻。

2. 終(zhong)止(zhi)消(xiao)化：當(dang)組(zu)織(zhi)塊(kuai)大(da)部分(fen)被消(xiao)化成(cheng)單(dan)細(xi)胞懸液或(huo)小(xiao)細(xi)胞團(tuan)時，加入(ru)含(han)血清的培(pei)養(yang)基終止(zhi)消(xiao)化。

3. 過(guo)濾與(yu)離(li)心(xin)：用(yong)細(xi)胞篩過濾(lv)細(xi)胞懸液，去(qu)除(chu)未消(xiao)化的組(zu)織(zhi)碎片(pian)，然後(hou)將濾(lv)液以(yi)適(shi)當的轉速離(li)心(xin)，收(shou)集細(xi)胞沈(chen)澱(dian)。

細(xi)胞觀(guan)察(cha)與(yu)檢測

1. 日常(chang)觀(guan)察(cha)：每(mei)天(tian)用(yong)倒置(zhi)顯(xian)微鏡觀(guan)察(cha)細(xi)胞的形態、生長狀態、密(mi)度(du)等，記(ji)錄細(xi)胞的變(bian)化情(qing)況(kuang)，如(ru)發(fa)現細(xi)胞汙染或異(yi)常(chang)，及(ji)時采取相應措施。
2. 細(xi)胞計數與活(huo)力(li)檢測：在需要時，可采用(yong)臺(tai)盼(pan)藍染色等(deng)方(fang)法對細(xi)胞進行(xing)計數和(he)活力(li)檢測，以(yi)了(le)解(jie)細(xi)胞的生長情(qing)況(kuang)和(he)健(jian)康狀態。

壹(yi)、取材與分(fen)離(li)

1. 快速操(cao)作

- 組(zu)織(zhi)取(qu)材後(hou)需立即處理(li)，避(bi)免(mian)長時間暴露(lu)於(yu)室溫或非營養(yang)環境(jing)。

- 使(shi)用(yong)無(wu)菌 PBS 或(huo)生理鹽(yan)水沖洗(xi)組(zu)織(zhi)，去(qu)除(chu)血液、雜質。

2. 消(xiao)化酶選(xuan)擇(ze)

- 根(gen)據(ju)組(zu)織(zhi)類(lei)型(xing)選(xuan)擇(ze)消(xiao)化酶，避(bi)免(mian)過(guo)度(du)消(xiao)化導(dao)致(zhi)細(xi)胞損(sun)傷。

- 消(xiao)化時間需嚴格控(kong)制(zhi)（通(tong)常(chang) 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可通(tong)過顯(xian)微鏡觀(guan)察(cha)細(xi)胞解離(li)狀態。

二(er)、培(pei)養(yang)條件優化

1. 培(pei)養(yang)基選(xuan)擇(ze)

- 使(shi)用(yong)含(han)血清或特(te)定(ding)生長因子的培(pei)養(yang)基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分(fen)細(xi)胞需添加胰島(dao)素(su)、EGF 等(deng)。

- 避(bi)免頻(pin)繁更(geng)換培(pei)養(yang)基品牌或(huo)批次，減少(shao)細(xi)胞適(shi)應壓力。

2. 貼壁與(yu)傳代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞貼壁能(neng)力較弱(ruo)，可能(neng)需要包被培(pei)養(yang)皿(min)（如膠(jiao)原(yuan)蛋(dan)白(bai)、多聚(ju)賴(lai)氨酸）。

- 傳代(dai)時密(mi)度(du)建議(yi)控(kong)制(zhi)在 70%-80%，過度(du)匯(hui)合會導致(zhi)接(jie)觸(chu)抑(yi)制和(he)分(fen)化。

三(san)、汙染控(kong)制(zhi)

1. 無(wu)菌操(cao)作

- 全(quan)程(cheng)在超(chao)凈(jing)臺(tai)操(cao)作，使(shi)用(yong)壹(yi)次性耗材，避免交叉汙染。

- 培(pei)養(yang)基中可添(tian)加雙(shuang)抗(kang)，但長期使(shi)用(yong)可能(neng)影響(xiang)細(xi)胞活性。

2. 支(zhi)原體(ti)檢測

- 定(ding)期檢測支(zhi)原體(ti)汙染（如 PCR 法），汙染後(hou)需及(ji)時丟棄(qi)細(xi)胞。

四、狀態監(jian)控(kong)

1. 日常(chang)觀(guan)察(cha)

- 每(mei)天(tian)檢查(zha)細(xi)胞形態、密(mi)度(du)及(ji)培(pei)養(yang)基顏色，及(ji)時更(geng)換培(pei)養(yang)基（通常(chang)每(mei) 2-3 天(tian)換液壹(yi)次）。

- 異(yi)常(chang)形態（如(ru)細(xi)胞變(bian)圓(yuan)、碎片(pian)增多(duo)）可能(neng)提示(shi)汙染或營(ying)養(yang)不(bu)足(zu)。

2. 傳代(dai)與凍存

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞分(fen)裂(lie)次數有限（壹(yi)般(ban) 5-10 代(dai)），需及(ji)時凍(dong)存(cun)早期代(dai)次細(xi)胞。

- 凍(dong)存液建(jian)議(yi)使(shi)用(yong) DMSO+血清（或專(zhuan)用(yong)凍(dong)存培(pei)養(yang)基），梯度(du)降(jiang)溫(wen)後(hou)液氮(dan)保存(cun)。