【概要(yao)描(miao)述】人(ren)乳(ru)腺(xian)癌成(cheng)纖維細胞(bao)公(gong)司正在(zai)出(chu)售(shou)的(de)產品：ND7/23大鼠(shu)神經(jing)母細胞(bao)大鼠(shu)肌腱幹(gan)細胞(bao)人骨(gu)髓間(jian)充質(zhi)幹(gan)細胞(bao)小鼠(shu)背(bei)根(gen)神(shen)經(jing)元(yuan)細胞(bao)大鼠(shu)肌源(yuan)性幹(gan)細胞(bao)人冠狀動(dong)脈平(ping)滑肌(ji)細胞(bao)小鼠(shu)表皮成(cheng)纖維細胞(bao)大鼠(shu)脊(ji)髓(sui)成(cheng)纖維細胞(bao)人源NK細胞(bao)小鼠(shu)表皮角(jiao)化細胞(bao)

本(ben)公(gong)司所有(you)產品僅供科學實(shi)驗，不做(zuo)其他(ta)科學(xue)實驗外的(de)使用(yong)！

人乳(ru)腺(xian)癌成(cheng)纖維分(fen)離自(zi)患(huan)有(you)乳腺(xian)癌的(de)女(nv)性乳腺組織；女性乳腺(xian)是(shi)由皮膚(fu)、纖維(wei)組織、乳腺腺體(ti)和(he)脂(zhi)肪(fang)組成(cheng)的(de)，乳(ru)腺癌是(shi)發(fa)生(sheng)在(zai)乳腺(xian)腺上皮組織的(de)惡(e)性腫瘤。乳(ru)腺(xian)癌中(zhong)99%發(fa)生(sheng)在(zai)女性(xing)，男性(xing)僅占(zhan)1%。乳(ru)腺並不是維持(chi)機(ji)體(ti)生(sheng)命(ming)活動(dong)的(de)重要(yao)器(qi)官，原(yuan)位乳腺(xian)癌並不致命；但(dan)由於乳腺癌細胞(bao)喪失了正常(chang)細胞(bao)的(de)特(te)性，細胞(bao)之間(jian)連接松(song)散(san)，容易脫(tuo)落(luo)。癌細胞(bao)壹旦(dan)脫落(luo)，遊(you)離的(de)癌細胞(bao)可以(yi)隨(sui)血(xue)液(ye)或(huo)淋(lin)巴液播(bo)散全(quan)身，形(xing)成(cheng)轉(zhuan)移(yi)，危及(ji)生(sheng)命(ming)。目前(qian)，乳(ru)腺(xian)癌已成(cheng)為威脅女性(xing)身(shen)心健康的(de)常(chang)見(jian)腫瘤。成(cheng)纖維細胞(bao)（Fibroblast）是疏松(song)結(jie)締(di)組織的(de)主(zhu)要(yao)細胞(bao)成(cheng)分，由胚胎時期的(de)間(jian)充質(zhi)細胞(bao)分化而(er)來(lai)。成(cheng)纖維細胞(bao)較大，輪(lun)廓清(qing)楚，多(duo)為突(tu)起的(de)紡(fang)錘形或(huo)星(xing)形(xing)的(de)扁(bian)平(ping)狀結(jie)構，其細胞(bao)核(he)呈規則的(de)卵(luan)圓形，核(he)仁大而(er)明(ming)顯(xian)。成(cheng)纖維細胞(bao)功(gong)能活動旺(wang)盛(sheng)，細胞(bao)質嗜弱(ruo)堿性，具(ju)明(ming)顯(xian)的(de)蛋(dan)白(bai)質合(he)成(cheng)和(he)分(fen)泌活動，在(zai)壹定(ding)條(tiao)件(jian)下，它可以(yi)實現跟(gen)纖維(wei)細胞(bao)的(de)互(hu)相轉(zhuan)化；成(cheng)纖維細胞(bao)對不同(tong)程度(du)的(de)細胞(bao)變(bian)性(xing)、壞(huai)死(si)和(he)組織缺(que)損的(de)修復(fu)有(you)著十分(fen)重要(yao)的(de)作(zuo)用。剛分離的(de)乳(ru)腺癌成(cheng)纖維細胞(bao)呈圓形(xing)、折(zhe)光(guang)性(xing)良(liang)好，懸(xuan)浮於培養(yang)基中。30min細胞(bao)貼壁，其中部(bu)分開始(shi)伸(shen)出偽(wei)足，表現為小的(de)突(tu)起；6h後(hou)細胞(bao)基本貼(tie)壁(bi)wan全(quan)，伸(shen)展成(cheng)梭形，胞(bao)核(he)清晰，分布(bu)較均(jun)勻，散在(zai)生(sheng)長(chang)，不聚(ju)集成(cheng)團；細胞(bao)生(sheng)長(chang)迅(xun)速(su)，5-7天(tian)即呈(cheng)融(rong)合(he)狀態，細胞(bao)排列(lie)緊密(mi)，有(you)的(de)交叉重疊生(sheng)長(chang)，平坦(tan)、胞體(ti)較大，細胞(bao)質透(tou)明(ming)，細胞(bao)核(he)較大，呈(cheng)橢圓(yuan)形，顏色淡(dan)。細胞(bao)融(rong)合(he)，並彼此連接成(cheng)網(wang)狀；細胞(bao)呈突(tu)起的(de)紡(fang)錘形或(huo)星(xing)形(xing)的(de)扁(bian)平(ping)分布(bu)。
方法(fa)簡(jian)介(jie)：

公(gong)司實驗室(shi)分離的(de)人(ren)乳腺癌成(cheng)纖維采用yi蛋白(bai)酶(mei)-膠原(yuan)酶(mei)混(hun)合(he)消化法(fa)結(jie)合(he)差(cha)速(su)貼壁法制備(bei)而(er)來(lai)，細胞(bao)總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhi)量檢(jian)測：

公(gong)司實驗室(shi)分離的(de)人(ren)乳腺癌成(cheng)纖維經(jing)Vimentin免疫熒(ying)光(guang)鑒(jian)定(ding)，純(chun)度可達(da)90%以(yi)上，且不含有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體、細菌、酵母和(he)真(zhen)菌等(deng)。

培養(yang)基 含(han)FBS、生(sheng)長(chang)添(tian)加劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液頻(pin)率(lv) 每(mei)2-3天(tian)換液(ye)壹次(ci)

生(sheng)長(chang)特性(xing) 貼壁(bi)

細胞(bao)形態 成(cheng)纖維細胞(bao)樣

傳代(dai)特(te)性 可(ke)傳(chuan)5代(dai)左(zuo)右(you)；3代(dai)以(yi)內狀態好

消化液 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)

培養(yang)條件(jian) 氣(qi)相：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工作(zuo)

1. 實(shi)驗器材(cai)準備(bei)：準備(bei)無菌的(de)培養(yang)皿、培養(yang)瓶、移(yi)液(ye)管、離心管、手(shou)術(shu)器(qi)械(xie)等(deng)，並進(jin)行(xing)高壓滅菌或其他(ta)合(he)適的(de)消(xiao)毒處理。

2. 試(shi)劑準備(bei)：配(pei)制或(huo)購(gou)買合(he)適的(de)培養(yang)基、消化(hua)酶(mei)（如(ru)、膠原(yuan)酶(mei)等(deng)）、胎牛(niu)血(xue)清(qing)、雙(shuang)抗(kang)等(deng)試(shi)劑，確保其無菌且在有(you)效(xiao)期內。

3. 實驗動物(wu)或(huo)組織來(lai)源準(zhun)備(bei)：根據(ju)實(shi)驗需求，選擇合(he)適的(de)動(dong)物並進(jin)行(xing)相應的(de)麻(ma)醉(zui)或(huo)處死(si)，獲取(qu)所需組織；或從已有(you)的(de)組織樣本庫(ku)中(zhong)獲取(qu)組織。

取(qu)材(cai)與處理

1. 取(qu)材(cai)：在無(wu)菌條件(jian)下，迅(xun)速(su)取(qu)出目(mu)標組織，盡量減少對組織的(de)損傷，並去除(chu)多(duo)余(yu)的(de)脂(zhi)肪(fang)、結(jie)締(di)組織等(deng)非(fei)目(mu)的(de)組織。

2. 清洗：將取(qu)出的(de)組織用預(yu)冷的(de)無(wu)菌PBS沖洗數次(ci)，以(yi)去除(chu)血(xue)液(ye)和(he)雜(za)質(zhi)。

3. 剪切：將組織剪成(cheng)約1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊(kuai)，以(yi)便(bian)後續(xu)消(xiao)化(hua)。

細胞(bao)分離

1. 消化(hua)：將(jiang)剪碎(sui)的(de)組織塊(kuai)放入(ru)含有(you)適量(liang)消(xiao)化(hua)酶(mei)的(de)離心管中，在(zai)37℃恒(heng)溫(wen)搖(yao)床(chuang)或培養(yang)箱(xiang)中消(xiao)化(hua)壹段(duan)時間(jian)。期間(jian)可輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃離心管，使消(xiao)化更(geng)均(jun)勻。

2. 終止消(xiao)化(hua)：當組織塊(kuai)大部(bu)分被消(xiao)化成(cheng)單(dan)細胞(bao)懸(xuan)液或(huo)小(xiao)細胞(bao)團時，加入(ru)含血(xue)清(qing)的(de)培養(yang)基終止消(xiao)化(hua)。

3. 過濾與離心：用(yong)細胞(bao)篩過濾細胞(bao)懸(xuan)液，去(qu)除(chu)未(wei)消化的(de)組織碎(sui)片，然(ran)後(hou)將(jiang)濾液以(yi)適當的(de)轉(zhuan)速(su)離心，收(shou)集細胞(bao)沈澱。

細胞(bao)觀察與檢(jian)測

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察：每(mei)天(tian)用倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀察細胞(bao)的(de)形(xing)態、生(sheng)長(chang)狀態、密度(du)等(deng)，記錄(lu)細胞(bao)的(de)變(bian)化(hua)情(qing)況(kuang)，如(ru)發(fa)現細胞(bao)汙染或(huo)異(yi)常(chang)，及(ji)時采取(qu)相應措施(shi)。
2. 細胞(bao)計數(shu)與活(huo)力檢(jian)測：在(zai)需要(yao)時，可采用臺(tai)盼藍染色等(deng)方法對細胞(bao)進(jin)行(xing)計數(shu)和(he)活(huo)力檢(jian)測，以(yi)了解(jie)細胞(bao)的(de)生(sheng)長(chang)情(qing)況(kuang)和(he)健康狀態。

壹、取(qu)材(cai)與分(fen)離

1. 快(kuai)速(su)操作

- 組織取(qu)材(cai)後需立即(ji)處理，避免長(chang)時間(jian)暴露(lu)於室(shi)溫(wen)或(huo)非(fei)營(ying)養(yang)環(huan)境(jing)。

- 使用(yong)無菌 PBS 或生(sheng)理鹽水沖洗組織，去除(chu)血(xue)液(ye)、雜(za)質(zhi)。

2. 消化酶(mei)選(xuan)擇

- 根(gen)據組織類型(xing)選(xuan)擇(ze)消化酶(mei)，避免過度消(xiao)化導(dao)致細胞(bao)損傷。

- 消(xiao)化時間(jian)需嚴(yan)格控制（通(tong)常(chang) 10-30 分(fen)鐘），可通(tong)過顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀察細胞(bao)解離狀態。

二(er)、培養(yang)條件(jian)優化

1. 培養(yang)基選擇(ze)

- 使用(yong)含血(xue)清(qing)或(huo)特(te)定(ding)生(sheng)長(chang)因子的(de)培養(yang)基（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分細胞(bao)需添(tian)加胰(yi)島(dao)素、EGF 等(deng)。

- 避免頻(pin)繁(fan)更換(huan)培養(yang)基品牌(pai)或批(pi)次(ci)，減少細胞(bao)適應壓力。

2. 貼壁與傳(chuan)代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細胞(bao)貼壁能力較弱，可能需要(yao)包被培養(yang)皿（如(ru)膠原(yuan)蛋白(bai)、多(duo)聚賴(lai)氨(an)酸(suan)）。

- 傳(chuan)代(dai)時密度(du)建議(yi)控制在(zai) 70%-80%，過度匯(hui)合(he)會(hui)導(dao)致接觸抑制和(he)分(fen)化。

三(san)、汙(wu)染(ran)控制

1. 無菌操作

- 全(quan)程在(zai)超(chao)凈(jing)臺操作，使用(yong)壹次(ci)性耗材(cai)，避免交叉汙染。

- 培養(yang)基中可(ke)添(tian)加雙抗(kang)，但(dan)長期(qi)使用(yong)可能影響細胞(bao)活性。

2. 支(zhi)原(yuan)體檢(jian)測

- 定(ding)期(qi)檢(jian)測支(zhi)原(yuan)體汙(wu)染(ran)（如(ru) PCR 法），汙染(ran)後需及時丟棄細胞(bao)。

四、狀態監(jian)控

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察

- 每(mei)天(tian)檢(jian)查細胞(bao)形態、密度(du)及(ji)培養(yang)基顏色，及(ji)時更換(huan)培養(yang)基（通(tong)常(chang)每(mei) 2-3 天(tian)換液(ye)壹次(ci)）。

- 異常(chang)形(xing)態（如細胞(bao)變(bian)圓(yuan)、碎(sui)片增(zeng)多(duo)）可能提示(shi)汙染(ran)或(huo)營(ying)養(yang)不足。

2. 傳(chuan)代(dai)與凍(dong)存(cun)

- 原(yuan)代(dai)細胞(bao)分裂次(ci)數有(you)限(xian)（壹般(ban) 5-10 代(dai)），需及時凍存(cun)早期(qi)代(dai)次(ci)細胞(bao)。

- 凍(dong)存(cun)液(ye)建(jian)議(yi)使用(yong) DMSO+血(xue)清(qing)（或(huo)專(zhuan)用凍存(cun)培養(yang)基），梯(ti)度降溫(wen)後(hou)液(ye)氮保存(cun)。