【概要(yao)描(miao)述(shu)】人(ren)膠(jiao)質(zhi)瘤(liu)組織(zhi)源(yuan)細胞公司正在(zai)出售(shou)的(de)產品：RL1大鼠肺成纖(xian)維細胞(bao)小鼠腸(chang)巨噬(shi)細胞(bao)大鼠(shu)腸(chang)巨噬(shi)細胞兔胰腺(xian)星狀(zhuang)細(xi)胞(bao)人(ren)直腸(chang)平(ping)滑肌細(xi)胞(bao)小鼠子(zi)宮(gong)內(nei)膜(mo)上(shang)皮(pi)細胞大鼠子(zi)宮(gong)內(nei)膜(mo)上(shang)皮(pi)細胞兔外周(zhou)血(xue)白(bai)細(xi)胞人胎(tai)盤羊(yang)膜(mo)細胞(bao)小鼠卵(luan)巢顆(ke)粒細(xi)胞(bao)

本(ben)公司所(suo)有產品僅(jin)供(gong)科(ke)學(xue)實(shi)驗，不做(zuo)其他(ta)科(ke)學(xue)實(shi)驗外(wai)的使用！

人(ren)膠(jiao)質(zhi)瘤(liu)組織(zhi)源(yuan)分離自(zi)癌組織(zhi)；癌（cancer）是(shi)指(zhi)起(qi)源(yuan)於上(shang)皮(pi)組織(zhi)的惡性腫(zhong)瘤，是(shi)惡性腫(zhong)瘤中(zhong)最(zui)常(chang)見(jian)的壹(yi)類。相(xiang)對應的(de)，起源(yuan)於間葉(ye)組織(zhi)的惡性腫(zhong)瘤統(tong)稱(cheng)為(wei)肉(rou)瘤。有(you)少數惡性腫(zhong)瘤不按(an)上(shang)述(shu)原(yuan)則命(ming)名，如腎(shen)母細胞(bao)瘤、惡性畸(ji)胎(tai)瘤等。壹(yi)般(ban)人們(men)所(suo)說的“癌癥"習(xi)慣(guan)上(shang)泛指(zhi)所(suo)有惡性腫(zhong)瘤。癌癥具(ju)有(you)細(xi)胞(bao)分化和增殖(zhi)異常(chang)、生長失(shi)去控制、浸潤性和轉(zhuan)移(yi)性(xing)等(deng)生物學特(te)征，其(qi)發(fa)生是壹(yi)個(ge)多(duo)因(yin)子(zi)、多(duo)步(bu)驟(zhou)的復(fu)雜(za)過(guo)程，分為(wei)致癌、促癌、演進(jin)三個(ge)過(guo)程，與(yu)吸煙、感染、職(zhi)業暴露(lu)、環境汙(wu)染、不合理膳(shan)食、遺(yi)傳因(yin)素密(mi)切(qie)相關(guan)。癌細胞(bao)，是壹(yi)種(zhong)變(bian)異的(de)細(xi)胞，是產生癌癥的(de)病(bing)源(yuan)。癌細胞(bao)與正常(chang)細胞(bao)不同(tong)，有無限(xian)增殖(zhi)、可轉(zhuan)化和易(yi)轉(zhuan)移(yi)三(san)大(da)特(te)點，能夠無限(xian)增殖(zhi)並(bing)破(po)壞(huai)正常(chang)的細(xi)胞(bao)組織(zhi)。癌細胞(bao)除了(le)分裂失(shi)控外(wai)（能進(jin)行多(duo)極分裂），還(hai)會(hui)局部侵入周圍正常(chang)組織(zhi)甚(shen)至經由(you)體內(nei)循(xun)環(huan)系(xi)統(tong)或(huo)淋巴(ba)系(xi)統(tong)轉(zhuan)移(yi)到(dao)身(shen)體其(qi)他(ta)部分。分惡性和良(liang)性兩種(zhong)。
方法簡介(jie)：

公司實(shi)驗室(shi)分離的癌組織(zhi)源(yuan)采用膠(jiao)原(yuan)酶消化、經Percoll離心(xin)純(chun)化制(zhi)備而來(lai)，細胞總(zong)量約為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量檢測(ce)：

公司實(shi)驗室(shi)分離的人膠(jiao)質(zhi)瘤(liu)組織(zhi)源(yuan)經檢測(ce)，純(chun)度(du)可達(da)90%以上(shang)，且不含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體、細(xi)菌、酵(jiao)母和真菌等(deng)。

培(pei)養(yang)基(ji) 含(han)FBS、生長添(tian)加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液頻率 每(mei)2-3天(tian)換液壹(yi)次(ci)

生長特(te)性 貼(tie)壁(bi)

細(xi)胞(bao)形(xing)態 梭(suo)形(xing)、多角(jiao)形(xing)

傳(chuan)代特(te)性 可傳(chuan)5代左(zuo)右；3代以內(nei)狀(zhuang)態(tai)好

消(xiao)化液 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶

培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian) 氣(qi)相：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備工作

1. 實(shi)驗器(qi)材準(zhun)備：準備無菌的(de)培(pei)養(yang)皿、培(pei)養(yang)瓶(ping)、移(yi)液管(guan)、離心(xin)管(guan)、手(shou)術器械等(deng)，並(bing)進(jin)行高(gao)壓滅(mie)菌或(huo)其他(ta)合適的消毒(du)處(chu)理。

2. 試(shi)劑(ji)準(zhun)備：配制或(huo)購(gou)買合適的培(pei)養(yang)基(ji)、消化酶（如、膠(jiao)原(yuan)酶等）、胎(tai)牛血(xue)清(qing)、雙抗等(deng)試(shi)劑(ji)，確(que)保其(qi)無菌且(qie)在(zai)有效期內(nei)。

3. 實(shi)驗動(dong)物或(huo)組織(zhi)來(lai)源(yuan)準備：根(gen)據實(shi)驗需(xu)求(qiu)，選(xuan)擇合適的動物並(bing)進(jin)行相(xiang)應(ying)的麻醉或(huo)處死(si)，獲(huo)取(qu)所(suo)需組織(zhi)；或(huo)從已(yi)有的組織(zhi)樣本(ben)庫(ku)中(zhong)獲(huo)取(qu)組織(zhi)。

取(qu)材與(yu)處(chu)理

1. 取(qu)材：在(zai)無菌條(tiao)件(jian)下(xia)，迅速取(qu)出目標(biao)組織(zhi)，盡(jin)量減少(shao)對組織(zhi)的損傷，並(bing)去除多余(yu)的脂肪、結(jie)締(di)組織(zhi)等非目的(de)組織(zhi)。

2. 清(qing)洗：將(jiang)取(qu)出的(de)組織(zhi)用預(yu)冷的(de)無菌PBS沖(chong)洗數次(ci)，以去除血(xue)液和雜(za)質(zhi)。

3. 剪切：將(jiang)組織(zhi)剪成約1 - 2mm³的小塊，以便後(hou)續(xu)消化。

細(xi)胞(bao)分離

1. 消(xiao)化：將(jiang)剪碎的組織(zhi)塊放(fang)入含有適量消化酶的離心(xin)管(guan)中(zhong)，在(zai)37℃恒溫(wen)搖床或(huo)培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化壹(yi)段(duan)時(shi)間。期(qi)間可輕(qing)輕(qing)搖晃(huang)離心(xin)管(guan)，使(shi)消化更均(jun)勻(yun)。

2. 終止(zhi)消(xiao)化：當(dang)組織(zhi)塊大(da)部分被消(xiao)化成(cheng)單(dan)細胞(bao)懸液或(huo)小細胞(bao)團時(shi)，加(jia)入含血(xue)清(qing)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)終止(zhi)消(xiao)化。

3. 過(guo)濾與(yu)離心(xin)：用細胞篩(shai)過(guo)濾細(xi)胞(bao)懸液，去除未消化的(de)組織(zhi)碎片，然(ran)後(hou)將(jiang)濾液以適當(dang)的(de)轉(zhuan)速離心(xin)，收(shou)集(ji)細胞(bao)沈澱(dian)。

細(xi)胞(bao)觀察與(yu)檢測(ce)

1. 日(ri)常(chang)觀察：每(mei)天(tian)用倒置(zhi)顯微(wei)鏡觀察細(xi)胞(bao)的形(xing)態、生長狀(zhuang)態(tai)、密(mi)度(du)等，記錄(lu)細胞的變(bian)化情(qing)況(kuang)，如發(fa)現(xian)細(xi)胞(bao)汙(wu)染或(huo)異常(chang)，及時(shi)采(cai)取(qu)相應(ying)措(cuo)施。
2. 細(xi)胞(bao)計(ji)數與(yu)活(huo)力(li)檢測(ce)：在(zai)需(xu)要(yao)時(shi)，可采(cai)用臺盼(pan)藍染色(se)等方法對細胞(bao)進(jin)行計(ji)數和活(huo)力(li)檢測(ce)，以了(le)解細(xi)胞的生長情(qing)況(kuang)和健(jian)康狀(zhuang)態(tai)。

壹(yi)、取(qu)材與(yu)分離

1. 快(kuai)速操作

- 組織(zhi)取(qu)材後(hou)需立(li)即(ji)處(chu)理，避免(mian)長(chang)時(shi)間暴露(lu)於室(shi)溫(wen)或(huo)非營(ying)養(yang)環(huan)境。

- 使(shi)用無菌 PBS 或(huo)生理鹽水沖(chong)洗組織(zhi)，去除血(xue)液、雜(za)質(zhi)。

2. 消(xiao)化酶選(xuan)擇

- 根(gen)據組織(zhi)類型(xing)選(xuan)擇消(xiao)化酶，避免(mian)過(guo)度消(xiao)化導致細胞損傷。

- 消(xiao)化時(shi)間需(xu)嚴(yan)格(ge)控制(zhi)（通常(chang) 10-30 分鐘），可通(tong)過(guo)顯微(wei)鏡觀察細(xi)胞(bao)解離狀(zhuang)態(tai)。

二(er)、培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)優(you)化

1. 培(pei)養(yang)基(ji)選(xuan)擇

- 使(shi)用含血(xue)清(qing)或(huo)特(te)定生長因(yin)子(zi)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分細胞(bao)需(xu)添(tian)加(jia)胰島(dao)素、EGF 等(deng)。

- 避(bi)免(mian)頻繁更換培(pei)養(yang)基(ji)品牌或(huo)批次(ci)，減少(shao)細胞(bao)適(shi)應(ying)壓力(li)。

2. 貼(tie)壁(bi)與傳(chuan)代

- 原(yuan)代細(xi)胞(bao)貼(tie)壁(bi)能力(li)較弱(ruo)，可能需(xu)要(yao)包(bao)被培(pei)養(yang)皿（如膠(jiao)原(yuan)蛋(dan)白(bai)、多(duo)聚賴(lai)氨酸(suan)）。

- 傳(chuan)代時(shi)密(mi)度建(jian)議控制在 70%-80%，過(guo)度匯(hui)合會導致接觸(chu)抑制(zhi)和分化。

三(san)、汙(wu)染控(kong)制

1. 無菌操作

- 全程在(zai)超凈(jing)臺操作，使(shi)用壹(yi)次(ci)性(xing)耗材，避(bi)免(mian)交(jiao)叉(cha)汙(wu)染。

- 培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)可添(tian)加(jia)雙抗，但(dan)長(chang)期使(shi)用可能影(ying)響(xiang)細胞活(huo)性(xing)。

2. 支原(yuan)體檢測(ce)

- 定期檢測(ce)支原(yuan)體汙(wu)染（如 PCR 法(fa)），汙(wu)染後(hou)需及(ji)時(shi)丟(diu)棄細(xi)胞。

四(si)、狀(zhuang)態(tai)監(jian)控(kong)

1. 日(ri)常(chang)觀察

- 每(mei)天(tian)檢查(zha)細(xi)胞(bao)形(xing)態、密(mi)度(du)及(ji)培(pei)養(yang)基(ji)顏色(se)，及時(shi)更換培(pei)養(yang)基(ji)（通常(chang)每 2-3 天(tian)換液壹(yi)次(ci)）。

- 異(yi)常(chang)形(xing)態（如細(xi)胞變(bian)圓(yuan)、碎片增多(duo)）可能提(ti)示(shi)汙(wu)染或(huo)營(ying)養(yang)不足。

2. 傳(chuan)代與(yu)凍(dong)存

- 原(yuan)代細(xi)胞(bao)分裂次(ci)數有(you)限(xian)（壹(yi)般(ban) 5-10 代），需(xu)及(ji)時(shi)凍(dong)存早期(qi)代次(ci)細(xi)胞(bao)。

- 凍(dong)存液建(jian)議使用 DMSO+血(xue)清(qing)（或(huo)專用凍存培(pei)養(yang)基(ji)），梯(ti)度降溫(wen)後(hou)液氮保存。