【概要(yao)描述(shu)】人視網膜Muller細胞(bao)公(gong)司(si)正在(zai)出(chu)售的(de)產品：BHK-21倉鼠(shu)腎成纖維(wei)細胞(bao)PC 61 5.3 [PC 61; PC 61.5.3]（雜(za)交瘤(liu)細胞(bao)CD25）原代(dai)細胞(bao)產品：雞(ji)卵泡顆粒細胞(bao)產品：人肺微(wei)血管內皮(pi)細胞(bao)產品：小鼠(shu)肺微(wei)血管內皮(pi)細胞(bao)產品：豬(zhu)主動(dong)脈內皮(pi)細胞(bao)大鼠(shu)肺微(wei)血管內皮(pi)細胞(bao)兔角(jiao)膜內皮(pi)細胞(bao)雞(ji)卵泡基(ji)膜細胞(bao)

人視網膜Muller分(fen)離自(zi)視網膜組織；視網膜居於眼(yan)球壁(bi)的內層(ceng)，是壹層(ceng)透明的(de)薄(bo)膜。視網膜由色(se)素上(shang)皮(pi)層(ceng)和視網膜感(gan)覺層(ceng)組成，兩層(ceng)間在(zai)病(bing)理(li)情況下可(ke)分(fen)開，稱(cheng)為視網膜脫離。色(se)素上(shang)皮(pi)層(ceng)與脈絡膜緊(jin)密(mi)相(xiang)連，由(you)色(se)素上(shang)皮(pi)細胞(bao)組成，它們(men)具有支(zhi)持(chi)和營養(yang)光(guang)感(gan)受器細胞(bao)、遮(zhe)光(guang)、散熱(re)以及再(zai)生(sheng)和修(xiu)復(fu)等(deng)作用。組織學上視網膜分為10層(ceng)，由外(wai)向內分別為：色(se)素上(shang)皮(pi)層(ceng)、視錐、視桿(gan)細胞(bao)層(ceng)、外(wai)界膜、外(wai)顆粒層(ceng)、外(wai)叢狀(zhuang)層(ceng)、內顆粒層(ceng)、內叢狀(zhuang)層(ceng)、神經(jing)節細胞(bao)層(ceng)、神經(jing)纖維(wei)層(ceng)、內界膜。視網膜內層(ceng)為襯(chen)於血管膜內面的(de)壹(yi)層(ceng)薄(bo)膜，有感(gan)光(guang)作用；後(hou)部(bu)鼻側有壹視神經(jing)乳(ru)頭(tou)。視網膜上的感(gan)覺層(ceng)是由三(san)個神經(jing)元(yuan)組成。神經(jing)元(yuan)是視細胞(bao)層(ceng)，專司(si)感(gan)光(guang)，它包(bao)括(kuo)錐細胞(bao)和桿(gan)細胞(bao)。視桿(gan)細胞(bao)主要(yao)在離(li)中心凹(ao)較遠(yuan)的視網膜上，而視錐細胞(bao)則在(zai)中心凹(ao)處最多。第二(er)層(ceng)叫雙(shuang)節細胞(bao)，約有(you)10到數(shu)百(bai)個視細胞(bao)通過(guo)雙(shuang)節細胞(bao)與壹(yi)個神經(jing)節細胞(bao)相(xiang)聯系，負(fu)責(ze)聯絡作用。第(di)三(san)層(ceng)叫節細胞(bao)層(ceng)，專管傳(chuan)導。視網膜是壹層(ceng)菲薄(bo)的(de)但(dan)又非(fei)常復(fu)雜(za)的(de)結(jie)構，它貼(tie)於眼(yan)球的(de)後(hou)壁(bi)部，傳(chuan)遞(di)來(lai)自(zi)視網膜感(gan)受器沖(chong)動(dong)的(de)神經(jing)纖維(wei)跨越視網膜表面，經由視神經(jing)到(dao)達(da)出(chu)口。視網膜的分辨力(li)是不均(jun)勻(yun)的，在(zai)黃(huang)斑區(qu)，其分辨(bian)能力強。視網膜Muller細胞(bao)作為視網膜中的主要(yao)膠質細胞(bao)，大約占(zhan)視網膜膠質細胞(bao)的90%，因(yin)而在視網膜疾(ji)病(bing)中(zhong)起(qi)著(zhe)何(he)種作用也(ye)受(shou)到(dao)越(yue)來越多的關(guan)註。在(zai)超微(wei)結(jie)構水平上(shang)，Muller細胞(bao)的胞(bao)質似(si)乎(hu)比(bi)臨(lin)近的其(qi)他(ta)細胞(bao)更高(gao)的(de)電(dian)子(zi)密(mi)度，更發(fa)達(da)的(de)內質網，細胞(bao)核是典(dian)型的(de)卵圓(yuan)形(xing)或多角(jiao)形(xing)。但(dan)在不同物種(zhong)中(zhong)或同壹物(wu)種(zhong)中的不(bu)同部位(wei)，Muller細胞(bao)形態也(ye)會(hui)有(you)所差(cha)異(yi)的。視網膜Muller細胞(bao)是壹種(zhong)特(te)化(hua)的(de)神經(jing)膠質細胞(bao)，不僅(jin)具有維(wei)持視網膜的正常結(jie)構和功能的作用，並(bing)調(tiao)制(zhi)視網膜神經(jing)元(yuan)活動(dong)，還能參與(yu)多種病(bing)理(li)過(guo)程(cheng)，尤(you)其(qi)是眼(yan)底(di)增殖性(xing)病(bing)變，如(ru)增生(sheng)性玻璃(li)體視網膜病(bing)變、增生(sheng)性糖尿(niao)病(bing)視網膜病(bing)變等(deng)，體外(wai)培(pei)養Muller細胞(bao)是研究(jiu)這(zhe)些(xie)增殖性(xing)病(bing)變途(tu)徑(jing)之(zhi)壹(yi)。
方法(fa)簡介(jie)：

公(gong)司(si)實驗(yan)室(shi)分離(li)的(de)人視網膜Muller采用膠原酶消(xiao)化(hua)法(fa)和yi蛋(dan)白(bai)酶反復(fu)消化法(fa)制(zhi)備(bei)而來(lai)，細胞(bao)總(zong)量(liang)約(yue)為5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量(liang)檢測：

公(gong)司(si)實驗(yan)室(shi)分離(li)的(de)人視網膜Muller經(jing)GFAP免疫(yi)熒光(guang)鑒定(ding)，純度(du)可達(da)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體、細菌、酵(jiao)母和真菌等(deng)。

本(ben)公(gong)司(si)所有產(chan)品僅供科學實驗(yan)，不做其他(ta)科學實驗(yan)外(wai)的(de)使(shi)用(yong)！

培(pei)養基(ji) 含(han)FBS、生(sheng)長(chang)添加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液(ye)頻率(lv) 每(mei)2-3天換液(ye)壹(yi)次

生(sheng)長(chang)特(te)性(xing) 貼(tie)壁(bi)

細胞(bao)形態 梭(suo)形、多角(jiao)形(xing)

傳(chuan)代(dai)特(te)性(xing) 可(ke)傳(chuan)5代(dai)左(zuo)右；3代以內狀(zhuang)態

消(xiao)化液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶

培(pei)養條(tiao)件 氣(qi)相(xiang)：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工作

1. 實驗(yan)器材準備(bei)：準備(bei)無(wu)菌的培(pei)養皿(min)、培(pei)養瓶(ping)、移(yi)液(ye)管、離心管、手術器械(xie)等(deng)，並進行(xing)高(gao)壓滅菌或其(qi)他(ta)合適的消毒處(chu)理(li)。

2. 試(shi)劑準(zhun)備(bei)：配制(zhi)或購(gou)買(mai)合適的培(pei)養基(ji)、消(xiao)化(hua)酶（如(ru)、膠原酶等(deng)）、胎牛(niu)血清(qing)、雙(shuang)抗(kang)等(deng)試劑，確(que)保(bao)其(qi)無(wu)菌且在有效(xiao)期(qi)內。

3. 實驗(yan)動(dong)物(wu)或組織來源準(zhun)備(bei)：根據實驗(yan)需求，選(xuan)擇合(he)適的動(dong)物(wu)並(bing)進行(xing)相(xiang)應的(de)麻醉(zui)或處(chu)死(si)，獲(huo)取所需組織；或從已有的組織樣本(ben)庫中(zhong)獲(huo)取組織。

取(qu)材與處理

1. 取(qu)材：在無(wu)菌條(tiao)件下(xia)，迅(xun)速(su)取(qu)出目標組織，盡量(liang)減少(shao)對組織的損(sun)傷(shang)，並(bing)去(qu)除(chu)多余的脂(zhi)肪(fang)、結(jie)締組織等(deng)非(fei)目的組織。

2. 清(qing)洗(xi)：將取出的組織用預(yu)冷(leng)的無(wu)菌PBS沖洗數(shu)次，以去(qu)除(chu)血液(ye)和雜(za)質(zhi)。

3. 剪(jian)切：將(jiang)組織剪成約(yue)1 - 2mm³的(de)小塊，以便後(hou)續消(xiao)化(hua)。

細胞(bao)分離(li)

1. 消(xiao)化：將(jiang)剪(jian)碎(sui)的組織塊放入含有適量(liang)消(xiao)化(hua)酶的(de)離(li)心管中，在(zai)37℃恒溫(wen)搖床(chuang)或培(pei)養箱(xiang)中消(xiao)化(hua)壹(yi)段時間(jian)。期(qi)間可(ke)輕(qing)輕(qing)搖晃離(li)心管，使(shi)消(xiao)化(hua)更均(jun)勻。

2. 終(zhong)止消化(hua)：當組織塊大部分(fen)被(bei)消(xiao)化(hua)成單(dan)細胞(bao)懸液(ye)或小細胞(bao)團時，加(jia)入(ru)含血清(qing)的(de)培(pei)養基(ji)終(zhong)止消化(hua)。

3. 過(guo)濾與離(li)心：用細胞(bao)篩過(guo)濾細胞(bao)懸液(ye)，去(qu)除(chu)未消(xiao)化(hua)的組織碎(sui)片，然後(hou)將(jiang)濾液(ye)以適當的轉(zhuan)速(su)離(li)心，收(shou)集細胞(bao)沈澱(dian)。

細胞(bao)觀察(cha)與檢測

1. 日(ri)常觀(guan)察(cha)：每(mei)天用(yong)倒(dao)置顯(xian)微鏡觀察(cha)細胞(bao)的形(xing)態、生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態、密(mi)度等(deng)，記錄(lu)細胞(bao)的變化(hua)情(qing)況，如(ru)發(fa)現(xian)細胞(bao)汙染或異(yi)常，及時采取相(xiang)應措施。
2. 細胞(bao)計數(shu)與活(huo)力(li)檢測：在需(xu)要(yao)時，可(ke)采用臺(tai)盼(pan)藍(lan)染色(se)等(deng)方法(fa)對細胞(bao)進行(xing)計數(shu)和活(huo)力(li)檢測，以了解(jie)細胞(bao)的生(sheng)長(chang)情況和健康狀(zhuang)態。

壹(yi)、取材與分離

1. 快(kuai)速(su)操(cao)作

- 組織取材後(hou)需(xu)立即(ji)處(chu)理，避免長(chang)時間(jian)暴(bao)露於室(shi)溫(wen)或非(fei)營養(yang)環境。

- 使(shi)用(yong)無(wu)菌 PBS 或生(sheng)理鹽水沖洗(xi)組織，去(qu)除(chu)血液(ye)、雜(za)質(zhi)。

2. 消(xiao)化酶選(xuan)擇

- 根(gen)據組織類型選(xuan)擇消(xiao)化(hua)酶，避免過(guo)度(du)消化導致細胞(bao)損傷(shang)。

- 消(xiao)化時間(jian)需(xu)嚴格(ge)控(kong)制(zhi)（通常(chang) 10-30 分鐘），可(ke)通(tong)過(guo)顯(xian)微鏡觀察(cha)細胞(bao)解離(li)狀(zhuang)態。

二(er)、培(pei)養條(tiao)件優(you)化(hua)

1. 培(pei)養基(ji)選(xuan)擇

- 使(shi)用(yong)含(han)血清(qing)或特(te)定(ding)生(sheng)長(chang)因(yin)子的培(pei)養基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分細胞(bao)需添加(jia)胰島(dao)素、EGF 等(deng)。

- 避免頻繁(fan)更換培(pei)養基(ji)品牌(pai)或批次，減少(shao)細胞(bao)適應壓力。

2. 貼(tie)壁(bi)與傳(chuan)代(dai)

- 原(yuan)代細胞(bao)貼(tie)壁(bi)能力較(jiao)弱(ruo)，可能需要(yao)包(bao)被(bei)培(pei)養皿(min)（如(ru)膠原蛋(dan)白(bai)、多聚(ju)賴(lai)氨酸）。

- 傳(chuan)代(dai)時密(mi)度建(jian)議控制(zhi)在 70%-80%，過(guo)度(du)匯合會導致接觸抑制(zhi)和分(fen)化(hua)。

三(san)、汙染控制(zhi)

1. 無(wu)菌操(cao)作

- 全(quan)程在(zai)超(chao)凈臺操(cao)作，使(shi)用(yong)壹(yi)次性(xing)耗(hao)材，避免交叉汙染。

- 培(pei)養基(ji)中(zhong)可(ke)添加(jia)雙(shuang)抗(kang)，但(dan)長(chang)期(qi)使(shi)用(yong)可(ke)能影響細胞(bao)活性(xing)。

2. 支(zhi)原體(ti)檢測

- 定(ding)期(qi)檢測支原(yuan)體汙染（如(ru) PCR 法(fa)），汙染後(hou)需(xu)及時丟(diu)棄(qi)細胞(bao)。

四(si)、狀(zhuang)態監控

1. 日(ri)常觀(guan)察(cha)

- 每(mei)天檢查(zha)細胞(bao)形態、密(mi)度及培(pei)養基(ji)顏(yan)色(se)，及時更換培(pei)養基(ji)（通(tong)常(chang)每(mei) 2-3 天換液(ye)壹(yi)次）。

- 異(yi)常形(xing)態（如(ru)細胞(bao)變圓(yuan)、碎(sui)片增多）可能提示汙染或營養(yang)不(bu)足(zu)。

2. 傳(chuan)代(dai)與(yu)凍存(cun)

- 原(yuan)代細胞(bao)分裂(lie)次數(shu)有(you)限（壹(yi)般(ban) 5-10 代），需(xu)及時凍存(cun)早(zao)期(qi)代次細胞(bao)。

- 凍存(cun)液(ye)建(jian)議使(shi)用(yong) DMSO+血清(qing)（或專(zhuan)用(yong)凍存(cun)培(pei)養基(ji)），梯(ti)度(du)降(jiang)溫(wen)後(hou)液(ye)氮(dan)保(bao)存(cun)。