【概(gai)要描述】人(ren)髂動(dong)脈(mai)內(nei)皮細(xi)胞(bao)公司(si)正(zheng)在(zai)出(chu)售的產(chan)品：C8166白(bai)血(xue)病(bing)SPC-A-1 (人肺(fei)腺(xian)癌(ai)細(xi)胞(bao)) (Hela汙(wu)染(ran)細(xi)胞(bao)系)SV-HUC-1 (人(ren)輸尿(niao)管上皮永(yong)生化(hua)細(xi)胞(bao)) (STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確(que))SW480 [SW-480] (人結腸(chang)癌(ai)細(xi)胞(bao)) (STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確(que))SW579 [SW 579; SW-579] (人甲(jia)狀腺(xian)鱗癌(ai)細(xi)胞(bao)) (STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確(que))SW620 (人結腸(chang)癌(ai)細(xi)胞(bao)) (STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確(que))SW626 (人卵(luan)巢癌(ai)細(xi)胞(bao))

本(ben)公司(si)所有產(chan)品僅供科(ke)學(xue)實驗(yan)，不(bu)做其他科學(xue)實驗(yan)外(wai)的使(shi)用(yong)！

人(ren)髂(qia)動(dong)脈(mai)內(nei)皮分(fen)離自(zi)髂(qia)動(dong)脈(mai)組(zu)織(zhi)；髂(qia)總動(dong)脈(mai)位(wei)於(yu)人(ren)體(ti)的盆(pen)腔，人的髂總動(dong)脈(mai)有兩條，也(ye)就(jiu)是臨(lin)床(chuang)上(shang)左(zuo)右(you)兩條分(fen)支(zhi)，它(ta)是由(you)腹部最主要的動(dong)脈(mai)演化而來，由(you)腹部的腹主(zhu)動(dong)脈(mai)沿著人體的脊(ji)柱(zhu)方向向下(xia)進行，到(dao)達第(di)4腰(yao)椎(zhui)後開(kai)始(shi)分(fen)成(cheng)兩支(zhi)，這就是左(zuo)右(you)髂總動(dong)脈(mai)。動(dong)脈(mai)是介(jie)於(yu)心室(shi)與(yu)毛(mao)細(xi)血(xue)管之(zhi)間的管道(dao)，它(ta)接近(jin)心室(shi)的部分(fen)，管(guan)徑(jing)大，管(guan)壁較(jiao)厚。經(jing)過反(fan)復分(fen)支(zhi)，管徑(jing)逐(zhu)漸變(bian)小(xiao)，管(guan)壁(bi)變薄，最後形(xing)成(cheng)與(yu)毛(mao)細(xi)血(xue)管構(gou)造(zao)相(xiang)似(si)的毛細(xi)血(xue)管前(qian)小動(dong)脈(mai)，與(yu)毛(mao)細(xi)血(xue)管相(xiang)接(jie)。動(dong)脈(mai)的管徑(jing)大(da)小和管壁(bi)的厚薄，雖(sui)相(xiang)差(cha)很大，但(dan)構(gou)造上(shang)均(jun)有共同(tong)之(zhi)處(chu)。壹般均(jun)由(you)3層(ceng)膜組(zu)成(cheng)，最內(nei)層(ceng)稱為內(nei)膜，由(you)內(nei)皮及(ji)縱(zong)行排(pai)列(lie)的結締(di)組(zu)織(zhi)構(gou)成；中(zhong)間的壹層(ceng)稱為中(zhong)膜，由(you)環形(xing)排(pai)列(lie)的組(zu)織(zhi)構(gou)成；最外的壹層(ceng)叫(jiao)外(wai)膜，由(you)縱(zong)行排(pai)列(lie)的結締(di)組(zu)織(zhi)構(gou)成。動(dong)脈(mai)內(nei)皮細(xi)胞(bao)是覆(fu)蓋(gai)在主動(dong)脈(mai)內(nei)面的單(dan)層(ceng)細(xi)胞(bao)，可(ke)分(fen)泌(mi)壹系列(lie)血管活性物(wu)質(zhi)而保(bao)持血(xue)管穩態，當(dang)其受到(dao)炎癥(zheng)或其它(ta)因(yin)素(su)刺激後穩態被(bei)破壞而導致壹些(xie)心血管(guan)疾(ji)病(bing)的發生(sheng)。因(yin)此，動(dong)脈(mai)內(nei)皮細(xi)胞(bao)已(yi)成(cheng)為研(yan)究(jiu)心血管(guan)疾(ji)病(bing)發病(bing)機制(zhi)及(ji)治療藥物的工具。內(nei)皮細(xi)胞(bao)或(huo)血(xue)管(guan)內(nei)皮是壹薄層(ceng)的專門(men)上(shang)皮細(xi)胞(bao)，由(you)壹層(ceng)扁平(ping)細(xi)胞(bao)所組(zu)成(cheng)。它(ta)形成(cheng)血(xue)管(guan)的內(nei)壁，是血(xue)管(guan)管腔內(nei)血液(ye)及(ji)其他血管(guan)壁（單(dan)層(ceng)鱗狀上(shang)皮）的接口(kou)。內(nei)皮細(xi)胞(bao)是沿著整(zheng)個(ge)循(xun)環系統(tong)，由(you)心臟直(zhi)至最小的微(wei)血(xue)管(guan)。
方(fang)法簡(jian)介：

公司(si)實驗(yan)室(shi)分(fen)離的人髂(qia)動(dong)脈(mai)內(nei)皮采用(yong)yi蛋(dan)白(bai)酶-膠原酶聯合消(xiao)化法結合差(cha)速貼壁法、並(bing)通過內(nei)皮細(xi)胞(bao)專用(yong)培養(yang)基(ji)培養(yang)篩(shai)選制(zhi)備而來，細(xi)胞(bao)總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhi)量檢測：

公司(si)實驗(yan)室(shi)分(fen)離的人髂(qia)動(dong)脈(mai)內(nei)皮經(jing)CD31免(mian)疫熒光(guang)鑒定(ding)，純(chun)度(du)可達(da)90%以(yi)上，且不(bu)含有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體(ti)、細(xi)菌(jun)、酵(jiao)母(mu)和真菌(jun)等(deng)。

包(bao)被(bei)條件(jian) PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yang)基(ji) 含(han)FBS、生(sheng)長(chang)添加劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液(ye)頻(pin)率(lv) 每(mei)2-3天(tian)換(huan)液(ye)壹次

生(sheng)長(chang)特(te)性 貼(tie)壁(bi)

細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai) 內(nei)皮細(xi)胞(bao)樣(yang)

傳代(dai)特(te)性 可(ke)傳2-3代(dai)

消(xiao)化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶

培養(yang)條(tiao)件 氣(qi)相：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準備工作

1. 實(shi)驗(yan)器(qi)材(cai)準備：準備無菌(jun)的培養(yang)皿、培養(yang)瓶(ping)、移液(ye)管(guan)、離心管、手(shou)術(shu)器械等(deng)，並(bing)進(jin)行高(gao)壓滅菌(jun)或(huo)其他合適的消毒(du)處(chu)理(li)。

2. 試(shi)劑準備：配(pei)制或購買合適的培養(yang)基(ji)、消化(hua)酶（如(ru)、膠原酶等(deng)）、胎(tai)牛(niu)血清、雙抗(kang)等(deng)試(shi)劑，確(que)保(bao)其無菌(jun)且在有效期(qi)內(nei)。

3. 實(shi)驗(yan)動(dong)物(wu)或組(zu)織(zhi)來源(yuan)準備：根據實(shi)驗(yan)需(xu)求，選(xuan)擇合適的動(dong)物(wu)並(bing)進(jin)行相(xiang)應的麻醉(zui)或(huo)處(chu)死(si)，獲(huo)取所需(xu)組(zu)織(zhi)；或(huo)從已(yi)有的組(zu)織(zhi)樣(yang)本(ben)庫(ku)中(zhong)獲(huo)取組(zu)織(zhi)。

取材(cai)與(yu)處(chu)理(li)

1. 取材(cai)：在(zai)無菌(jun)條(tiao)件下(xia)，迅(xun)速(su)取出目(mu)標(biao)組(zu)織(zhi)，盡量減少對(dui)組(zu)織(zhi)的損傷，並(bing)去(qu)除多余(yu)的脂肪(fang)、結締(di)組(zu)織(zhi)等(deng)非(fei)目的組(zu)織(zhi)。

2. 清洗(xi)：將(jiang)取出的組(zu)織(zhi)用(yong)預冷的無菌(jun)PBS沖(chong)洗(xi)數(shu)次，以(yi)去(qu)除血液(ye)和雜質(zhi)。

3. 剪(jian)切(qie)：將(jiang)組(zu)織(zhi)剪(jian)成約1 - 2mm³的小塊，以(yi)便(bian)後續(xu)消(xiao)化。

細(xi)胞(bao)分(fen)離

1. 消(xiao)化(hua)：將(jiang)剪碎的組(zu)織(zhi)塊放入(ru)含(han)有適量消化酶的離心管中(zhong)，在(zai)37℃恒(heng)溫搖(yao)床(chuang)或(huo)培養(yang)箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)壹段時間。期(qi)間可輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃離心管，使(shi)消化(hua)更(geng)均(jun)勻(yun)。

2. 終(zhong)止(zhi)消(xiao)化：當組(zu)織(zhi)塊大部(bu)分(fen)被(bei)消化(hua)成單(dan)細(xi)胞(bao)懸液(ye)或(huo)小(xiao)細(xi)胞(bao)團(tuan)時，加入含血清的培養(yang)基(ji)終止(zhi)消化。

3. 過濾與(yu)離心：用(yong)細(xi)胞(bao)篩(shai)過濾細(xi)胞(bao)懸液(ye)，去(qu)除未消化的組(zu)織(zhi)碎(sui)片，然(ran)後將(jiang)濾(lv)液(ye)以(yi)適當(dang)的轉(zhuan)速離心，收集(ji)細(xi)胞(bao)沈澱(dian)。

細(xi)胞(bao)觀(guan)察(cha)與(yu)檢(jian)測

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察(cha)：每(mei)天用(yong)倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)的形態(tai)、生(sheng)長狀態(tai)、密度(du)等(deng)，記(ji)錄細(xi)胞(bao)的變化(hua)情況(kuang)，如(ru)發現細(xi)胞(bao)汙(wu)染(ran)或異(yi)常(chang)，及時采取相應措施。
2. 細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)與(yu)活力檢(jian)測(ce)：在需(xu)要時，可采用(yong)臺(tai)盼(pan)藍染(ran)色等(deng)方(fang)法對細(xi)胞(bao)進(jin)行計(ji)數(shu)和活力檢(jian)測(ce)，以(yi)了(le)解(jie)細(xi)胞(bao)的生長(chang)情況(kuang)和健康(kang)狀(zhuang)態。

壹、取材(cai)與(yu)分(fen)離

1. 快速操(cao)作

- 組(zu)織(zhi)取材(cai)後需(xu)立(li)即處(chu)理(li)，避免(mian)長時間暴露(lu)於(yu)室(shi)溫或非(fei)營(ying)養環境(jing)。

- 使(shi)用(yong)無菌(jun) PBS 或(huo)生理(li)鹽(yan)水(shui)沖(chong)洗(xi)組(zu)織(zhi)，去(qu)除血液(ye)、雜(za)質(zhi)。

2. 消(xiao)化(hua)酶選擇(ze)

- 根據組(zu)織(zhi)類(lei)型(xing)選(xuan)擇(ze)消(xiao)化(hua)酶，避免(mian)過度消(xiao)化導致細(xi)胞(bao)損(sun)傷。

- 消(xiao)化(hua)時間需(xu)嚴(yan)格控制（通常(chang) 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可(ke)通過顯微(wei)鏡(jing)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)解(jie)離狀態。

二、培養(yang)條(tiao)件優化(hua)

1. 培養(yang)基(ji)選擇(ze)

- 使(shi)用(yong)含血清或特(te)定(ding)生長因(yin)子的培養(yang)基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分(fen)細(xi)胞(bao)需(xu)添加胰(yi)島素(su)、EGF 等(deng)。

- 避(bi)免(mian)頻繁更(geng)換(huan)培養(yang)基(ji)品牌(pai)或批(pi)次，減少細(xi)胞(bao)適應壓力。

2. 貼(tie)壁(bi)與(yu)傳代(dai)

- 原代(dai)細(xi)胞(bao)貼(tie)壁(bi)能(neng)力較(jiao)弱，可(ke)能需(xu)要包(bao)被(bei)培養(yang)皿（如(ru)膠原蛋(dan)白(bai)、多(duo)聚(ju)賴氨酸）。

- 傳代(dai)時密度(du)建(jian)議(yi)控制在 70%-80%，過度匯(hui)合會導致接觸抑(yi)制和分(fen)化(hua)。

三(san)、汙(wu)染(ran)控制

1. 無菌(jun)操(cao)作

- 全(quan)程在超(chao)凈臺(tai)操(cao)作(zuo)，使(shi)用(yong)壹次性耗(hao)材(cai)，避(bi)免(mian)交叉汙(wu)染(ran)。

- 培養(yang)基(ji)中(zhong)可(ke)添加雙抗(kang)，但長期(qi)使(shi)用(yong)可能影響(xiang)細(xi)胞(bao)活性。

2. 支(zhi)原體(ti)檢(jian)測

- 定(ding)期(qi)檢(jian)測(ce)支(zhi)原體(ti)汙(wu)染(ran)（如(ru) PCR 法），汙(wu)染(ran)後需(xu)及時丟棄(qi)細(xi)胞(bao)。

四、狀態監控

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察(cha)

- 每(mei)天(tian)檢(jian)查細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)、密(mi)度及培養(yang)基(ji)顏(yan)色，及時更(geng)換(huan)培養(yang)基(ji)（通常(chang)每 2-3 天(tian)換(huan)液(ye)壹次）。

- 異(yi)常(chang)形態(tai)（如(ru)細(xi)胞(bao)變(bian)圓、碎片(pian)增(zeng)多）可(ke)能(neng)提(ti)示汙(wu)染(ran)或營(ying)養不(bu)足。

2. 傳代(dai)與(yu)凍存

- 原代(dai)細(xi)胞(bao)分(fen)裂次數(shu)有限(xian)（壹般 5-10 代(dai)），需(xu)及時凍存早期(qi)代(dai)次(ci)細(xi)胞(bao)。

- 凍存液(ye)建(jian)議(yi)使(shi)用(yong) DMSO+血清（或專用(yong)凍存培養(yang)基(ji)），梯(ti)度降(jiang)溫後液(ye)氮(dan)保(bao)存。