【概(gai)要描(miao)述(shu)】人大隱靜(jing)脈(mai)內(nei)皮細(xi)胞公(gong)司(si)正在出售(shou)的產品：CCRF-CEM白血(xue)病(bing)U-2 OS [U2OS] (人(ren)骨肉瘤(liu)細(xi)胞) (STR鑒(jian)定(ding)正確)U251 (人膠質瘤(liu)細(xi)胞) (STR鑒(jian)定(ding)正確)U-87 MG (人腦(nao)星形(xing)膠質母(mu)細(xi)胞瘤(liu)細(xi)胞) (STR鑒(jian)定(ding)正確)U-937 (人組(zu)織(zhi)細(xi)胞淋巴(ba)瘤(liu)細胞) (STR鑒(jian)定(ding)正確)VCaP (人前列腺(xian)癌細(xi)胞) (STR鑒(jian)定(ding)正確)WI-38 (人胚(pei)肺細(xi)胞) (STR鑒(jian)定(ding)正確)WISH (人羊(yang)

人大(da)隱靜(jing)脈(mai)內(nei)皮分(fen)離自大(da)隱(yin)靜(jing)脈(mai)；大(da)隱靜(jing)脈(mai)起於足(zu)背靜(jing)脈(mai)弓(gong)內(nei)側端(duan)，經內(nei)踝前方(fang)，沿小腿(tui)內(nei)側緣伴(ban)隱(yin)神(shen)經上行(xing)，經股(gu)骨(gu)內(nei)側髁(ke)後方(fang)，進(jin)入大腿(tui)內(nei)側部(bu)，與股內(nei)側皮(pi)神(shen)經伴(ban)行(xing)，逐(zhu)漸向前上，在恥骨結節外下方(fang)穿隱(yin)靜(jing)脈(mai)裂(lie)孔(kong)，匯入股靜(jing)脈(mai)，其(qi)匯入點稱為(wei)隱(yin)股點。有5條(tiao)屬支：旋髂淺(qian)靜(jing)脈(mai)、腹壁(bi)淺(qian)靜(jing)脈(mai)、外靜(jing)脈(mai)、股(gu)內(nei)側淺(qian)靜(jing)脈(mai)和(he)股外側淺(qian)靜(jing)脈(mai)，它們匯入大隱(yin)靜(jing)脈(mai)的形(xing)式多樣(yang)，相互(hu)間(jian)吻合豐(feng)富(fu)。大(da)隱(yin)靜(jing)脈(mai)曲(qu)張(zhang)行高(gao)位結紮(zha)時(shi)，須分(fen)別結紮(zha)、切(qie)斷各(ge)屬(shu)支，以防(fang)復(fu)發(fa)。大隱靜(jing)脈(mai)內(nei)皮細(xi)胞對(dui)維(wei)持大(da)隱(yin)靜(jing)脈(mai)動(dong)態平(ping)衡起著重要作(zuo)用(yong)。它們合成、分(fen)泌凝血和(he)纖溶(rong)系(xi)統的激(ji)活(huo)因子和抑制(zhi)因(yin)子、影響(xiang)血(xue)小板粘附和聚(ju)集(ji)的調(tiao)節因子；大隱(yin)靜(jing)脈(mai)內(nei)皮細(xi)胞還釋放(fang)控制(zhi)細(xi)胞增殖(zhi)和(he)調節(jie)血管壁(bi)緊(jin)張(zhang)度的分(fen)子。
方(fang)法簡介：

公司(si)實(shi)驗室分(fen)離的人(ren)大隱靜(jing)脈(mai)內(nei)皮采(cai)用(yong)yi蛋(dan)白酶(mei)-膠原(yuan)酶(mei)聯合消化(hua)法結合差速(su)貼(tie)壁(bi)法(fa)、並(bing)通(tong)過內(nei)皮細(xi)胞專用(yong)培養基(ji)培(pei)養篩選(xuan)制備(bei)而來(lai)，細(xi)胞總(zong)量(liang)約為(wei)5×10?cells/瓶。
質量(liang)檢(jian)測：

公司(si)實(shi)驗室分(fen)離的人(ren)大隱靜(jing)脈(mai)內(nei)皮經CD31免疫熒(ying)光鑒定(ding)，純(chun)度(du)可(ke)達90%以上，且(qie)不含有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體、細菌、酵母和真菌等(deng)。

本公司(si)所有(you)產品僅供科學(xue)實(shi)驗，不做(zuo)其(qi)他科學(xue)實(shi)驗外的使用(yong)！

包被條(tiao)件(jian) PLL（0.1mg/ml），明(ming)膠（0.1%）

培養(yang)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液(ye)頻率(lv) 每2-3天(tian)換液(ye)壹(yi)次

生長特性(xing) 貼(tie)壁(bi)

細胞形(xing)態 內(nei)皮細(xi)胞樣(yang)

傳代(dai)特性(xing) 可(ke)傳2-3代

消化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白酶(mei)

培養(yang)條(tiao)件(jian) 氣(qi)相：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備工作(zuo)

1. 實(shi)驗器材準(zhun)備：準(zhun)備無(wu)菌的培(pei)養皿、培養瓶、移(yi)液(ye)管(guan)、離(li)心(xin)管(guan)、手術(shu)器(qi)械(xie)等，並進(jin)行高(gao)壓(ya)滅(mie)菌或(huo)其(qi)他(ta)合適的消毒(du)處理。

2. 試劑準(zhun)備：配(pei)制或(huo)購買(mai)合適的培(pei)養基、消化(hua)酶(mei)（如、膠原(yuan)酶(mei)等）、胎(tai)牛(niu)血(xue)清、雙(shuang)抗等試劑，確保其無(wu)菌且(qie)在有效期(qi)內(nei)。

3. 實(shi)驗動物或組(zu)織來源準(zhun)備：根(gen)據實(shi)驗需(xu)求，選(xuan)擇(ze)合適的動(dong)物並進(jin)行相(xiang)應(ying)的麻醉或處死(si)，獲取(qu)所(suo)需(xu)組織；或從(cong)已有(you)的組(zu)織樣(yang)本庫(ku)中獲取(qu)組(zu)織(zhi)。

取(qu)材與處理

1. 取(qu)材：在無菌條(tiao)件(jian)下，迅速(su)取(qu)出(chu)目(mu)標組織(zhi)，盡(jin)量(liang)減少(shao)對(dui)組織(zhi)的損(sun)傷，並去除(chu)多余(yu)的脂(zhi)肪(fang)、結締組(zu)織(zhi)等非目(mu)的組(zu)織。

2. 清洗(xi)：將取(qu)出(chu)的組(zu)織用(yong)預冷(leng)的無(wu)菌PBS沖(chong)洗(xi)數(shu)次，以去除(chu)血液(ye)和(he)雜(za)質。

3. 剪切(qie)：將組(zu)織(zhi)剪(jian)成約1 - 2mm³的小(xiao)塊，以便(bian)後(hou)續消化(hua)。

細胞分(fen)離

1. 消化(hua)：將剪(jian)碎(sui)的組(zu)織塊放(fang)入含有(you)適量消化(hua)酶(mei)的離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，在37℃恒溫搖(yao)床(chuang)或(huo)培(pei)養(yang)箱中消化(hua)壹段時間(jian)。期(qi)間(jian)可(ke)輕(qing)輕搖(yao)晃(huang)離心(xin)管(guan)，使消化(hua)更均勻(yun)。

2. 終(zhong)止(zhi)消化(hua)：當組(zu)織(zhi)塊大(da)部(bu)分(fen)被消化(hua)成單細(xi)胞懸(xuan)液(ye)或(huo)小(xiao)細胞團(tuan)時(shi)，加入含血(xue)清的培(pei)養基終(zhong)止(zhi)消化(hua)。

3. 過濾(lv)與離心(xin)：用(yong)細胞篩(shai)過濾(lv)細胞懸(xuan)液(ye)，去除(chu)未消化(hua)的組(zu)織碎(sui)片(pian)，然後(hou)將濾液(ye)以適當的轉速(su)離(li)心(xin)，收(shou)集細(xi)胞沈(chen)澱(dian)。

細胞觀(guan)察(cha)與檢(jian)測

1. 日(ri)常觀察(cha)：每天(tian)用(yong)倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀(guan)察(cha)細胞的形(xing)態、生(sheng)長狀態(tai)、密度(du)等(deng)，記錄(lu)細(xi)胞的變(bian)化(hua)情(qing)況(kuang)，如發(fa)現細胞汙染(ran)或異常，及時采(cai)取(qu)相(xiang)應(ying)措(cuo)施(shi)。
2. 細胞計(ji)數與(yu)活(huo)力檢(jian)測：在需(xu)要時(shi)，可(ke)采(cai)用(yong)臺盼藍(lan)染(ran)色(se)等(deng)方(fang)法對(dui)細胞進(jin)行計(ji)數和(he)活(huo)力檢(jian)測，以了解細胞的生(sheng)長情(qing)況(kuang)和健(jian)康狀(zhuang)態。

壹、取(qu)材與分(fen)離

1. 快速(su)操(cao)作(zuo)

- 組織(zhi)取(qu)材後需(xu)立即處理，避(bi)免長時間(jian)暴(bao)露於室溫或非營養環境。

- 使用(yong)無菌 PBS 或(huo)生(sheng)理鹽水沖(chong)洗(xi)組織(zhi)，去除(chu)血液(ye)、雜(za)質。

2. 消化(hua)酶(mei)選擇(ze)

- 根據組織類型(xing)選(xuan)擇(ze)消化(hua)酶(mei)，避(bi)免過度(du)消化(hua)導致(zhi)細(xi)胞損(sun)傷(shang)。

- 消化(hua)時間(jian)需(xu)嚴格控制(zhi)（通(tong)常 10-30 分(fen)鐘），可(ke)通(tong)過顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀(guan)察(cha)細胞解離狀(zhuang)態。

二、培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)優(you)化(hua)

1. 培養(yang)基選擇(ze)

- 使用(yong)含血(xue)清或特定(ding)生長因子的培(pei)養基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分(fen)細胞需(xu)添加胰(yi)島素、EGF 等。

- 避(bi)免頻繁更(geng)換培(pei)養(yang)基(ji)品牌或(huo)批(pi)次，減少(shao)細(xi)胞適應壓力。

2. 貼(tie)壁(bi)與(yu)傳代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細胞貼(tie)壁(bi)能(neng)力(li)較(jiao)弱，可(ke)能(neng)需(xu)要包(bao)被培養(yang)皿（如(ru)膠原(yuan)蛋(dan)白、多聚(ju)賴(lai)氨(an)酸(suan)）。

- 傳代(dai)時(shi)密度(du)建議控制(zhi)在 70%-80%，過度(du)匯合會導致(zhi)接(jie)觸抑制(zhi)和(he)分(fen)化。

三、汙染(ran)控制(zhi)

1. 無菌操(cao)作(zuo)

- 全程在超凈臺操(cao)作(zuo)，使用(yong)壹次性耗(hao)材，避(bi)免交叉(cha)汙染(ran)。

- 培養(yang)基中可(ke)添(tian)加雙(shuang)抗，但(dan)長期(qi)使用(yong)可(ke)能(neng)影響(xiang)細(xi)胞活(huo)性。

2. 支原(yuan)體檢測(ce)

- 定(ding)期(qi)檢(jian)測(ce)支原(yuan)體汙染(ran)（如 PCR 法(fa)），汙染(ran)後需(xu)及時丟棄(qi)細(xi)胞。

四、狀(zhuang)態監控

1. 日(ri)常觀察(cha)

- 每天(tian)檢(jian)查細胞形(xing)態、密度(du)及(ji)培養(yang)基顏色(se)，及(ji)時(shi)更(geng)換培(pei)養(yang)基(ji)（通常每 2-3 天(tian)換液(ye)壹(yi)次）。

- 異常形(xing)態（如(ru)細胞變(bian)圓(yuan)、碎(sui)片(pian)增多）可(ke)能(neng)提(ti)示汙染(ran)或營養不足(zu)。

2. 傳代(dai)與(yu)凍存(cun)

- 原(yuan)代(dai)細胞分(fen)裂次數有限（壹(yi)般(ban) 5-10 代），需(xu)及時凍存(cun)早(zao)期(qi)代(dai)次細胞。

- 凍存(cun)液(ye)建議使用(yong) DMSO+血清（或(huo)專用(yong)凍存(cun)培(pei)養(yang)基(ji)），梯度(du)降(jiang)溫後液(ye)氮保存。