【概要描述】人脈絡(luo)膜(mo)血管(guan)內皮(pi)細(xi)胞(bao)公(gong)司正在出(chu)售(shou)的產(chan)品(pin)：HEL 92.1.7白(bai)血病(bing)AM (人腺(xian)樣囊(nang)性癌細(xi)胞(bao)(高轉移))BC-009 (人乳腺(xian)癌細(xi)胞(bao))BC-019 (人乳腺(xian)癌細(xi)胞(bao))BC-020 (人乳腺(xian)癌細(xi)胞(bao))BC-021 (人乳腺(xian)癌細(xi)胞(bao))BC-022 (人乳腺(xian)癌細(xi)胞(bao))BE (2)-M17 (人神(shen)經(jing)母(mu)細(xi)胞(bao)瘤細(xi)胞(bao))C918 (人眼脈(mai)絡(luo)黑(hei)色瘤(liu)細(xi)胞(bao)) (STR鑒定(ding)正確)CAL 27 (人舌鱗(lin)癌細(xi)胞(bao)) (STR鑒定(ding)正確)

人脈絡(luo)膜(mo)血管(guan)內皮(pi)分離自眼球(qiu)脈(mai)絡(luo)膜(mo)組(zu)織(zhi)；脈絡(luo)膜(mo)在視網膜(mo)和鞏(gong)膜(mo)之間，含有豐(feng)富(fu)血(xue)管(guan)和色素(su)細(xi)胞(bao)，對外力沖(chong)擊(ji)的耐受(shou)性較視網膜(mo)差，當(dang)眼球(qiu)受(shou)到從前面(mian)來的外力的沖(chong)擊(ji)作(zuo)用通過玻(bo)璃體(ti)傳(chuan)到(dao)後極部(bu)時(shi)，堅硬(ying)的鞏(gong)膜(mo)在其(qi)外面又(you)有抵(di)抗(kang)作(zuo)用，使(shi)脈絡(luo)膜(mo)在內(nei)外兩種作(zuo)用夾攻下而發生破裂和出(chu)血(xue)。脈(mai)絡(luo)膜(mo)呈(cheng)暗(an)褐(he)色，圍繞(rao)視神(shen)經(jing)乳(ru)頭(tou)部有照(zhao)膜(mo)，為青(qing)綠色帶(dai)金(jin)屬光(guang)澤(ze)的三(san)角形(xing)區(qu)。脈絡(luo)膜(mo)是眼球(qiu)中膜(mo)的後2/3處(chu)的薄(bo)膜(mo)，由纖(xian)維(wei)組(zu)織(zhi)、小血管(guan)和毛(mao)細(xi)血(xue)管(guan)組(zu)成(cheng)，軟而薄，棕紅色，在鞏(gong)膜(mo)和視網膜(mo)之間，續(xu)連(lian)於睫狀(zhuang)體(ti)後方。脈(mai)絡(luo)膜(mo)的血(xue)循(xun)環(huan)營養(yang)視網膜(mo)外層(ceng)，其(qi)含有的豐(feng)富(fu)色素(su)起遮光(guang)暗(an)房作(zuo)用。主要功能(neng)是營養(yang)視網膜(mo)外層(ceng)及(ji)玻(bo)璃體(ti)，並(bing)有遮(zhe)光(guang)作(zuo)用，使(shi)反(fan)射(she)的物象(xiang)清楚(chu)。同(tong)時對(dui)視覺(jiao)系(xi)統(tong)起保護(hu)作(zuo)用，對整個(ge)視覺(jiao)神(shen)經(jing)有調節(jie)作(zuo)用。續(xu)連(lian)於睫狀(zhuang)體(ti)後方，含豐(feng)富(fu)的血(xue)管(guan)和色素(su)細(xi)胞(bao)，有營養(yang)和遮(zhe)光(guang)作(zuo)用。
方法簡(jian)介(jie)：

公(gong)司實驗(yan)室(shi)分離的人脈絡(luo)膜(mo)血管(guan)內皮(pi)采(cai)用膠原酶-中性dan白(bai)酶混合(he)消(xiao)化(hua)法並通過內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)專用培養(yang)基培養(yang)篩(shai)選制備而來，細(xi)胞(bao)總量(liang)約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶。
質量(liang)檢(jian)測(ce)：

公(gong)司實驗(yan)室(shi)分離的人脈絡(luo)膜(mo)血管(guan)內皮(pi)經(jing)CD31免疫熒光(guang)鑒(jian)定(ding)，純度(du)可(ke)達90%以上(shang)，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體、細(xi)菌、酵(jiao)母和真(zhen)菌等(deng)。

本公(gong)司所(suo)有產(chan)品(pin)僅(jin)供(gong)科學(xue)實驗(yan)，不做其(qi)他科學實(shi)驗(yan)外的使(shi)用！

包(bao)被條(tiao)件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yang)基 含FBS、生長(chang)添(tian)加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液頻率(lv) 每(mei)2-3天換(huan)液壹次(ci)

生長(chang)特(te)性 貼壁

細(xi)胞(bao)形(xing)態 內皮細(xi)胞(bao)樣

傳代特性 可傳2-3代

消(xiao)化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋白(bai)酶

培養(yang)條(tiao)件 氣(qi)相(xiang)：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備工(gong)作(zuo)

1. 實驗(yan)器(qi)材(cai)準(zhun)備：準(zhun)備無(wu)菌的培養(yang)皿(min)、培養(yang)瓶、移(yi)液(ye)管(guan)、離心管(guan)、手(shou)術(shu)器(qi)械等(deng)，並進(jin)行(xing)高壓滅菌或(huo)其(qi)他合(he)適的消(xiao)毒(du)處(chu)理。

2. 試(shi)劑準(zhun)備：配(pei)制或(huo)購(gou)買(mai)合(he)適的培養(yang)基、消(xiao)化(hua)酶(mei)（如、膠原酶等(deng)）、胎(tai)牛(niu)血(xue)清(qing)、雙(shuang)抗等(deng)試(shi)劑，確(que)保其(qi)無(wu)菌且在有效(xiao)期(qi)內。

3. 實驗(yan)動(dong)物或組(zu)織(zhi)來源準(zhun)備：根(gen)據實(shi)驗(yan)需求(qiu)，選擇合(he)適的動(dong)物並進行相(xiang)應(ying)的麻(ma)醉或處(chu)死，獲(huo)取所(suo)需組(zu)織(zhi)；或從已有的組(zu)織(zhi)樣本庫中獲取組(zu)織(zhi)。

取材與處(chu)理

1. 取材：在無(wu)菌條(tiao)件下，迅速取出(chu)目(mu)標(biao)組(zu)織(zhi)，盡量(liang)減(jian)少對組(zu)織(zhi)的損傷，並(bing)去除(chu)多(duo)余(yu)的脂肪(fang)、結締(di)組(zu)織(zhi)等(deng)非目(mu)的組(zu)織(zhi)。

2. 清洗：將取出(chu)的組(zu)織(zhi)用預冷(leng)的無(wu)菌PBS沖(chong)洗(xi)數次(ci)，以去(qu)除(chu)血液(ye)和雜(za)質。

3. 剪切(qie)：將組(zu)織(zhi)剪成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的小(xiao)塊(kuai)，以便(bian)後續(xu)消(xiao)化(hua)。

細(xi)胞(bao)分離

1. 消(xiao)化(hua)：將剪碎的組(zu)織(zhi)塊放入含有適(shi)量(liang)消(xiao)化(hua)酶(mei)的離心管(guan)中，在37℃恒溫(wen)搖床(chuang)或(huo)培養(yang)箱(xiang)中消(xiao)化(hua)壹(yi)段(duan)時(shi)間(jian)。期(qi)間可(ke)輕(qing)輕(qing)搖晃(huang)離心管(guan)，使(shi)消(xiao)化(hua)更(geng)均(jun)勻。

2. 終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)：當(dang)組(zu)織(zhi)塊大部分被消(xiao)化(hua)成(cheng)單細(xi)胞(bao)懸液(ye)或小細(xi)胞(bao)團(tuan)時(shi)，加(jia)入含血(xue)清的培養(yang)基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。

3. 過濾與離心：用細(xi)胞(bao)篩過(guo)濾細(xi)胞(bao)懸液(ye)，去除未消(xiao)化(hua)的組(zu)織(zhi)碎片，然(ran)後將濾液(ye)以適(shi)當(dang)的轉(zhuan)速離心，收(shou)集細(xi)胞(bao)沈澱。

細(xi)胞(bao)觀(guan)察與檢測(ce)

1. 日常(chang)觀(guan)察：每(mei)天用倒置(zhi)顯微鏡(jing)觀(guan)察細(xi)胞(bao)的形(xing)態、生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)、密(mi)度(du)等(deng)，記錄(lu)細(xi)胞(bao)的變(bian)化(hua)情(qing)況，如發現細(xi)胞(bao)汙染(ran)或(huo)異常(chang)，及(ji)時(shi)采(cai)取相應(ying)措(cuo)施(shi)。
2. 細(xi)胞(bao)計數與活力(li)檢測：在需(xu)要時(shi)，可(ke)采(cai)用臺盼藍染(ran)色等(deng)方法對細(xi)胞(bao)進行(xing)計數和活(huo)力檢測(ce)，以了解細(xi)胞(bao)的生(sheng)長(chang)情(qing)況和健(jian)康狀(zhuang)態(tai)。

壹、取材與分離

1. 快速操(cao)作(zuo)

- 組(zu)織(zhi)取材後需立(li)即(ji)處(chu)理，避(bi)免長(chang)時(shi)間暴露(lu)於室(shi)溫(wen)或非(fei)營養(yang)環(huan)境。

- 使(shi)用無(wu)菌 PBS 或(huo)生理鹽(yan)水沖(chong)洗(xi)組(zu)織(zhi)，去除血液(ye)、雜質(zhi)。

2. 消(xiao)化(hua)酶(mei)選擇

- 根(gen)據組(zu)織(zhi)類型選擇消(xiao)化(hua)酶(mei)，避(bi)免(mian)過(guo)度消(xiao)化(hua)導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)損傷。

- 消(xiao)化(hua)時(shi)間(jian)需(xu)嚴(yan)格(ge)控制（通常(chang) 10-30 分鐘），可(ke)通過顯(xian)微鏡(jing)觀(guan)察細(xi)胞(bao)解離狀(zhuang)態(tai)。

二(er)、培養(yang)條(tiao)件優(you)化(hua)

1. 培養(yang)基選擇

- 使(shi)用含血(xue)清或特(te)定(ding)生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)的培養(yang)基（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分細(xi)胞(bao)需添(tian)加(jia)胰島素(su)、EGF 等(deng)。

- 避免頻繁(fan)更(geng)換(huan)培養(yang)基品(pin)牌或批次，減(jian)少細(xi)胞(bao)適應(ying)壓力。

2. 貼壁與傳代

- 原代細(xi)胞(bao)貼壁(bi)能(neng)力較弱，可(ke)能(neng)需要包(bao)被培養(yang)皿(min)（如膠原蛋白(bai)、多聚賴氨酸(suan)）。

- 傳代時密(mi)度(du)建(jian)議(yi)控制在 70%-80%，過(guo)度匯(hui)合(he)會導致(zhi)接觸(chu)抑(yi)制和分化(hua)。

三、汙染(ran)控制

1. 無(wu)菌操(cao)作(zuo)

- 全程(cheng)在超凈臺操(cao)作(zuo)，使(shi)用壹次性耗材(cai)，避免交叉汙染(ran)。

- 培養(yang)基中可添(tian)加(jia)雙(shuang)抗，但長(chang)期(qi)使(shi)用可能(neng)影響細(xi)胞(bao)活性。

2. 支(zhi)原體檢測

- 定(ding)期(qi)檢測(ce)支(zhi)原體汙染(ran)（如 PCR 法），汙染(ran)後需及(ji)時(shi)丟(diu)棄(qi)細(xi)胞(bao)。

四(si)、狀(zhuang)態(tai)監控

1. 日常(chang)觀(guan)察

- 每(mei)天檢(jian)查細(xi)胞(bao)形(xing)態、密(mi)度及(ji)培養(yang)基顏色，及(ji)時(shi)更(geng)換(huan)培養(yang)基（通常(chang)每(mei) 2-3 天換(huan)液壹次(ci)）。

- 異常(chang)形(xing)態（如細(xi)胞(bao)變(bian)圓(yuan)、碎片增(zeng)多(duo)）可能(neng)提示汙染(ran)或(huo)營養(yang)不足。

2. 傳代與凍存(cun)

- 原代細(xi)胞(bao)分裂次數有限(xian)（壹(yi)般 5-10 代），需及(ji)時(shi)凍存(cun)早(zao)期(qi)代次細(xi)胞(bao)。

- 凍存(cun)液(ye)建(jian)議(yi)使(shi)用 DMSO+血清（或專用凍存(cun)培養(yang)基），梯(ti)度(du)降溫(wen)後液氮(dan)保存(cun)。