【概要(yao)描述(shu)】人(ren)顱蓋造(zao)骨(gu)細胞(bao)公司(si)正在出售(shou)的產(chan)品(pin)：HL-60白(bai)血(xue)病D283 Med（人(ren)腦(nao)髓母(mu)細胞(bao)瘤細(xi)胞(bao)）（STR鑒定(ding)正確）EA.hy926 (人(ren)臍靜(jing)脈細(xi)胞(bao)融合細胞(bao)) (STR鑒定(ding)正確)ECV-304 (人(ren)臍靜(jing)脈內(nei)皮(pi)細胞(bao)) (T24汙染細(xi)胞(bao)系(xi))EJ-1 (人(ren)膀胱癌細(xi)胞(bao)) (T24汙染細(xi)胞(bao)系(xi))NCI-H1395 (人(ren)肺腺(xian)癌(ai)細胞(bao)) (STR鑒定(ding)正確)H-97 (人(ren)高轉(zhuan)移肝癌(ai)細(xi)胞(bao))HCC 94 [HCC941122] (

本(ben)公司(si)所有產(chan)品(pin)僅供(gong)科(ke)學(xue)實(shi)驗(yan)，不做(zuo)其他(ta)科(ke)學(xue)實(shi)驗(yan)外(wai)的使用！

人(ren)顱蓋造(zao)骨(gu)分離(li)自顱骨組(zu)織(zhi)；造(zao)骨(gu)細胞(bao)（osteoblast）亦(yi)稱成骨細胞(bao)。是參與骨(gu)組(zu)織(zhi)形(xing)成的(de)細(xi)胞(bao)。顱骨位(wei)於(yu)脊柱上方(fang)，由(you)23塊(kuai)形(xing)狀和(he)大(da)小不同的扁(bian)骨(gu)和不規(gui)則骨(gu)組(zu)成(cheng)。除下頜(he)骨及(ji)舌(she)骨(gu)外(wai)，其余(yu)各(ge)骨(gu)彼此(ci)借(jie)縫(feng)或(huo)軟(ruan)骨牢(lao)固連結，起(qi)著保護(hu)和(he)支持腦(nao)、感(gan)覺(jiao)器(qi)官以及消(xiao)化器(qi)和(he)呼吸器(qi)的起始部(bu)分的作(zuo)用(yong)。顱分腦(nao)顱和面(mian)顱兩(liang)部(bu)分。腦(nao)顱位(wei)於(yu)顱的後上(shang)部(bu)，內(nei)有顱腔(qiang)，容納腦(nao)，共8塊(kuai)。面顱為(wei)顱的前(qian)下部(bu)分，包含(han)眶、鼻腔(qiang)、口腔(qiang)等結構(gou)，構成面(mian)部(bu)的支(zhi)架(jia)，共15塊(kuai)。成骨細胞(bao)是骨形(xing)成的(de)主(zhu)要(yao)功能(neng)細(xi)胞(bao)，負責骨基質(zhi)的(de)合成、分泌和(he)礦(kuang)化。骨(gu)不斷(duan)地(di)進(jin)行著重(zhong)建(jian)，骨重建過(guo)程包括(kuo)破骨(gu)細(xi)胞(bao)貼附(fu)在舊骨區(qu)域(yu)，分泌酸(suan)性物質溶(rong)解礦(kuang)物質，分泌蛋(dan)白酶(mei)消(xiao)化骨(gu)基質(zhi)，形(xing)成骨(gu)吸(xi)收(shou)陷窩；其後，成(cheng)骨(gu)細胞(bao)移行至被吸(xi)收(shou)部(bu)位(wei)，分泌骨(gu)基質(zhi)，骨(gu)基質(zhi)礦(kuang)化而(er)形(xing)成新(xin)骨(gu)；破(po)骨與成(cheng)骨(gu)過(guo)程的平(ping)衡是維持(chi)正常骨(gu)量(liang)的關(guan)鍵。成(cheng)骨細(xi)胞(bao)培(pei)養不僅有(you)助(zhu)於(yu)了解(jie)骨(gu)形(xing)成機制、骨(gu)骼(ge)系(xi)統疾(ji)病的分子和(he)細(xi)胞(bao)學基礎(chu)，也(ye)是藥物篩選(xuan)、生物材料開發和生物工(gong)程研(yan)究的(de)重要(yao)手(shou)段(duan)。
方法(fa)簡(jian)介(jie)：

公司(si)實(shi)驗(yan)室分離(li)的人(ren)顱蓋造(zao)骨(gu)采(cai)用膠(jiao)原酶消(xiao)化法(fa)制(zhi)備(bei)而(er)來(lai)制備(bei)而(er)來(lai)，細胞(bao)總量(liang)約為(wei)5×10?cells/瓶。
質量(liang)檢測(ce)：

公司(si)實(shi)驗(yan)室分離(li)的人(ren)顱蓋造(zao)骨(gu)經ALP染色(se)檢測(ce)，純度(du)可(ke)達(da)90%以上，且不含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體(ti)、細菌(jun)、酵(jiao)母(mu)和真菌等(deng)。

培(pei)養基 含(han)FBS、生長添加劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液頻率 每2-3天換(huan)液壹次

生長特(te)性 貼壁(bi)

細胞(bao)形(xing)態 梭形(xing)、多角(jiao)形(xing)

傳(chuan)代(dai)特(te)性 可(ke)傳(chuan)5代(dai)左(zuo)右(you)；3代(dai)以內(nei)狀態

消(xiao)化液 0.25%yi蛋(dan)白酶(mei)

培(pei)養條件 氣(qi)相(xiang)：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工(gong)作

1. 實(shi)驗(yan)器(qi)材準(zhun)備(bei)：準(zhun)備(bei)無(wu)菌的(de)培(pei)養皿(min)、培(pei)養瓶(ping)、移液管、離(li)心管(guan)、手(shou)術(shu)器(qi)械等，並進(jin)行高壓(ya)滅(mie)菌或其他(ta)合適(shi)的(de)消(xiao)毒處(chu)理。

2. 試劑(ji)準(zhun)備(bei)：配(pei)制(zhi)或(huo)購買合適(shi)的(de)培(pei)養基、消(xiao)化酶(mei)（如(ru)、膠(jiao)原(yuan)酶(mei)等(deng)）、胎牛(niu)血(xue)清、雙(shuang)抗等(deng)試(shi)劑(ji)，確保其無(wu)菌且在有效期(qi)內(nei)。

3. 實(shi)驗(yan)動(dong)物或組(zu)織(zhi)來(lai)源(yuan)準(zhun)備(bei)：根據實(shi)驗(yan)需求(qiu)，選(xuan)擇合適(shi)的(de)動物並進(jin)行相應(ying)的(de)麻(ma)醉(zui)或(huo)處(chu)死(si)，獲(huo)取所需組織(zhi)；或從(cong)已(yi)有(you)的(de)組(zu)織(zhi)樣(yang)本(ben)庫中獲取組織(zhi)。

取材與處(chu)理(li)

1. 取材：在無(wu)菌條件下，迅速(su)取出目標組(zu)織(zhi)，盡(jin)量(liang)減少(shao)對組織(zhi)的損(sun)傷(shang)，並去(qu)除多余(yu)的脂肪(fang)、結締(di)組(zu)織(zhi)等非(fei)目(mu)的(de)組織(zhi)。

2. 清洗(xi)：將(jiang)取出的組(zu)織(zhi)用預(yu)冷的無(wu)菌PBS沖(chong)洗(xi)數次，以去(qu)除血(xue)液和雜(za)質(zhi)。

3. 剪切：將(jiang)組(zu)織(zhi)剪成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的(de)小塊(kuai)，以便(bian)後續(xu)消(xiao)化。

細胞(bao)分離(li)

1. 消(xiao)化：將(jiang)剪(jian)碎的(de)組織(zhi)塊(kuai)放(fang)入含(han)有(you)適(shi)量(liang)消(xiao)化酶(mei)的(de)離(li)心管(guan)中，在37℃恒溫(wen)搖(yao)床或培(pei)養箱(xiang)中消(xiao)化壹段(duan)時(shi)間。期(qi)間可(ke)輕輕搖晃(huang)離(li)心管(guan)，使消(xiao)化更均(jun)勻。

2. 終止消(xiao)化：當(dang)組(zu)織(zhi)塊(kuai)大(da)部(bu)分被消(xiao)化成(cheng)單細胞(bao)懸液或小(xiao)細(xi)胞(bao)團時(shi)，加(jia)入含(han)血(xue)清的(de)培(pei)養基終止消(xiao)化。

3. 過(guo)濾(lv)與離(li)心：用(yong)細胞(bao)篩過(guo)濾(lv)細胞(bao)懸液，去(qu)除未(wei)消(xiao)化的(de)組(zu)織(zhi)碎片，然後將(jiang)濾(lv)液以適(shi)當(dang)的轉(zhuan)速(su)離(li)心，收(shou)集(ji)細胞(bao)沈澱(dian)。

細胞(bao)觀察(cha)與檢(jian)測(ce)

1. 日(ri)常觀(guan)察：每天用倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡觀察細胞(bao)的形(xing)態、生長狀態、密(mi)度(du)等(deng)，記(ji)錄細(xi)胞(bao)的變化情(qing)況，如(ru)發(fa)現細胞(bao)汙染或(huo)異常，及(ji)時(shi)采(cai)取相應(ying)措(cuo)施。
2. 細胞(bao)計(ji)數與活力檢測：在需要(yao)時(shi)，可(ke)采(cai)用臺(tai)盼藍染色(se)等方(fang)法(fa)對(dui)細(xi)胞(bao)進(jin)行計(ji)數和活力檢測，以了解(jie)細(xi)胞(bao)的生長情(qing)況和(he)健(jian)康(kang)狀態。

壹、取材與分離(li)

1. 快速(su)操(cao)作(zuo)

- 組織(zhi)取材後需立即處(chu)理(li)，避免長時(shi)間暴露(lu)於室溫(wen)或(huo)非營(ying)養環(huan)境。

- 使用無(wu)菌 PBS 或(huo)生理(li)鹽水(shui)沖(chong)洗(xi)組織(zhi)，去(qu)除血(xue)液、雜質(zhi)。

2. 消(xiao)化酶(mei)選(xuan)擇

- 根據組織(zhi)類型(xing)選(xuan)擇消(xiao)化酶(mei)，避免過(guo)度消(xiao)化導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)損傷(shang)。

- 消(xiao)化時(shi)間需嚴格控(kong)制（通(tong)常 10-30 分鐘），可(ke)通(tong)過(guo)顯(xian)微(wei)鏡觀察細胞(bao)解離(li)狀態。

二、培(pei)養條件優(you)化

1. 培(pei)養基選(xuan)擇

- 使用含(han)血(xue)清或(huo)特(te)定生長因子(zi)的培(pei)養基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分細胞(bao)需添加胰島(dao)素(su)、EGF 等。

- 避免頻繁(fan)更換(huan)培(pei)養基品(pin)牌(pai)或(huo)批(pi)次，減少(shao)細(xi)胞(bao)適(shi)應(ying)壓力。

2. 貼壁(bi)與傳(chuan)代(dai)

- 原代(dai)細(xi)胞(bao)貼壁(bi)能(neng)力較(jiao)弱(ruo)，可(ke)能(neng)需要(yao)包被培(pei)養皿(min)（如(ru)膠(jiao)原(yuan)蛋(dan)白、多(duo)聚(ju)賴氨酸(suan)）。

- 傳(chuan)代(dai)時(shi)密(mi)度(du)建(jian)議(yi)控(kong)制在 70%-80%，過(guo)度匯(hui)合會導(dao)致(zhi)接觸抑制和(he)分化。

三、汙染控(kong)制

1. 無(wu)菌操(cao)作

- 全程在超(chao)凈臺(tai)操作，使用壹次性耗(hao)材，避免交(jiao)叉(cha)汙染。

- 培(pei)養基中可(ke)添加雙抗，但(dan)長期(qi)使用可(ke)能(neng)影(ying)響細胞(bao)活性。

2. 支原(yuan)體(ti)檢測(ce)

- 定期(qi)檢測(ce)支(zhi)原(yuan)體(ti)汙染（如(ru) PCR 法(fa)），汙染後需及時(shi)丟(diu)棄(qi)細(xi)胞(bao)。

四(si)、狀(zhuang)態監控(kong)

1. 日(ri)常觀(guan)察

- 每天檢查(zha)細(xi)胞(bao)形(xing)態、密(mi)度(du)及(ji)培(pei)養基顏(yan)色(se)，及時(shi)更換(huan)培(pei)養基（通(tong)常每(mei) 2-3 天換(huan)液壹次）。

- 異常形(xing)態（如(ru)細(xi)胞(bao)變圓(yuan)、碎(sui)片增多）可(ke)能(neng)提示(shi)汙染或(huo)營(ying)養不足(zu)。

2. 傳(chuan)代(dai)與凍存

- 原代(dai)細(xi)胞(bao)分裂次(ci)數有限（壹般 5-10 代(dai)），需及時(shi)凍存早期(qi)代(dai)次(ci)細(xi)胞(bao)。

- 凍存液建議(yi)使用 DMSO+血(xue)清（或(huo)專用(yong)凍存培(pei)養基），梯(ti)度(du)降(jiang)溫(wen)後液氮(dan)保存。