【概(gai)要描述】人(ren)骨骼肌細(xi)胞(bao)公司(si)正(zheng)在出售的(de)產品(pin)：Jurkat白血(xue)病(bing)SW1116 (人(ren)結腸腺癌細(xi)胞(bao)) (STR鑒(jian)定正(zheng)確)TE-13 (人食管癌細(xi)胞(bao))TG-905 (人腦(nao)膠(jiao)質(zhi)母(mu)細(xi)胞(bao)瘤(liu)細(xi)胞(bao))VE (人血(xue)管內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao))293E (人胚(pei)腎(shen)細(xi)胞(bao)(EBNA1基因(yin)修飾))293ET (人胚腎(shen)細(xi)胞(bao)(SV40T和(he)EBNA1基因(yin)修飾細(xi)胞(bao)))293FT (人胚(pei)腎(shen)細(xi)胞(bao))2V6.11 (人胚(pei)腎(shen)細(xi)胞(bao)) (STR鑒(jian)定正(zheng)確)Jurkat clone

本(ben)公(gong)司(si)所(suo)有產品(pin)僅供科(ke)學(xue)實(shi)驗，不做其(qi)他科學(xue)實(shi)驗外的(de)使用(yong)！

人(ren)骨骼肌分離自(zi)四(si)肢(zhi)肌肉(rou)組(zu)織(zhi)；骨骼肌又(you)稱橫(heng)紋(wen)肌，肌肉(rou)中的壹(yi)種(zhong)，約(yue)占全身(shen)重(zhong)量的(de)40%。骨(gu)骼肌纖維為(wei)長(chang)柱(zhu)形的多核細(xi)胞(bao)，肌膜(mo)的(de)外面(mian)有基膜(mo)緊(jin)密貼(tie)附(fu)。屬於(yu)橫(heng)紋(wen)肌，橫(heng)紋(wen)肌還(hai)包(bao)括(kuo)心(xin)肌與(yu)內(nei)臟橫(heng)紋(wen)肌，其(qi)中骨骼肌主(zhu)要分布於(yu)四(si)肢(zhi)。每(mei)塊肌肉(rou)都(dou)是(shi)具(ju)有(you)壹定形態、結構(gou)和(he)功(gong)能的(de)器官，有(you)豐富(fu)的血(xue)管、淋(lin)巴(ba)分布，在(zai)軀體神經支(zhi)配下(xia)收(shou)縮或(huo)舒張(zhang)，進(jin)行(xing)隨意運動(dong)。肌肉(rou)可(ke)根據(ju)共形狀(zhuang)、大小(xiao)、位(wei)置(zhi)、起(qi)止點(dian)、纖維方向和(he)作用(yong)等(deng)命名(ming)。依(yi)形態命名(ming)的(de)如(ru)斜方肌、菱形肌、三(san)角(jiao)肌、梨(li)狀(zhuang)肌等(deng)。骨骼肌細(xi)胞(bao)呈(cheng)纖維狀(zhuang)，不分支(zhi)，有明顯橫(heng)紋(wen)，核很多，且(qie)都(dou)位(wei)於(yu)細(xi)胞(bao)膜下(xia)方。肌細(xi)胞(bao)內(nei)有許(xu)多沿細(xi)胞(bao)長軸平行(xing)排(pai)列的細(xi)絲狀(zhuang)肌原纖維。每(mei)壹肌原纖維都(dou)有(you)相(xiang)間排(pai)列的明帶(dai)（Ⅰ帶(dai)）及(ji)暗帶(dai)（A帶(dai)）。明帶(dai)染色(se)較(jiao)淺(qian)，而暗帶(dai)染色(se)較(jiao)深(shen)。暗帶(dai)中間有壹(yi)條較(jiao)明亮(liang)的(de)線(xian)稱H線(xian)。H線(xian)的中部有壹(yi)M線(xian)。明帶(dai)中間，有壹(yi)條較(jiao)暗的線(xian)稱為(wei)Z線(xian)。兩個Z線(xian)之間的區段(duan)，叫(jiao)做壹(yi)個肌節(jie)。骨(gu)骼肌細(xi)胞(bao)也(ye)稱(cheng)橫(heng)紋(wen)肌細(xi)胞(bao)，細(xi)胞(bao)呈(cheng)纖維狀(zhuang)，不分支(zhi)，有明顯橫(heng)紋(wen)，核很多，且(qie)都(dou)位(wei)於(yu)細(xi)胞(bao)膜下(xia)方，細(xi)胞(bao)多呈(cheng)梭行(xing)，具(ju)有(you)壹定的方向性。骨(gu)骼肌細(xi)胞(bao)原代分離培養3天(tian)後(hou)，可見細(xi)胞(bao)貼(tie)壁(bi)伸展(zhan)，細(xi)胞(bao)形態大小(xiao)不壹，呈(cheng)梭形、不規則(ze)形、三角(jiao)形或(huo)扇形，核卵(luan)圓形、居中；2周後(hou)細(xi)胞(bao)匯(hui)合(he)，多數細(xi)胞(bao)伸展(zhan)呈(cheng)長梭形，胞(bao)漿(jiang)豐富(fu)，有分枝狀(zhuang)突起(qi)，細(xi)胞(bao)平行(xing)排(pai)列成單層(ceng)或(huo)部分區域多層(ceng)重(zhong)疊生(sheng)長，高低起(qi)伏；細(xi)胞(bao)密度(du)低時(shi)，常交(jiao)織(zhi)成網(wang)狀(zhuang)；密度(du)高(gao)時(shi)，則(ze)排(pai)列為旋(xuan)渦狀(zhuang)或(huo)柵欄(lan)狀(zhuang)。傳代後(hou)細(xi)胞(bao)生長(chang)較(jiao)快(kuai)，4-6天(tian)即可匯(hui)合(he)，並保(bao)持上述形態學(xue)特征和(he)生(sheng)長(chang)特點(dian)。
方法(fa)簡(jian)介：

公(gong)司(si)實(shi)驗室分離的(de)人骨(gu)骼肌采(cai)用膠(jiao)原酶(mei)消(xiao)化(hua)法(fa)制(zhi)備而(er)來，細(xi)胞(bao)總量(liang)約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量(liang)檢測：

公(gong)司(si)實(shi)驗室分離的(de)人骨(gu)骼肌經α-Sarcometric actin免(mian)疫熒(ying)光(guang)鑒(jian)定，純(chun)度(du)可(ke)達(da)90%以上，且(qie)不含有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體、細(xi)菌(jun)、酵(jiao)母和(he)真(zhen)菌(jun)等(deng)。

包(bao)被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養基 含FBS、生(sheng)長添(tian)加劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液頻(pin)率(lv) 每(mei)2-3天(tian)換(huan)液壹次

生(sheng)長特性 貼(tie)壁(bi)

細(xi)胞(bao)形態 成(cheng)纖維細(xi)胞(bao)樣(yang)

傳代特性 可(ke)傳3代(dai)左(zuo)右

消(xiao)化液 0.25%yi蛋(dan)白酶(mei)

培養條件 氣(qi)相(xiang)：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備工(gong)作

1. 實(shi)驗器材準備(bei)：準(zhun)備無(wu)菌(jun)的(de)培養皿(min)、培養瓶(ping)、移(yi)液管、離心(xin)管、手術(shu)器械等(deng)，並進(jin)行(xing)高(gao)壓滅菌或(huo)其(qi)他合(he)適(shi)的消毒(du)處理。

2. 試(shi)劑準(zhun)備(bei)：配制(zhi)或(huo)購買(mai)合(he)適(shi)的培養基、消(xiao)化(hua)酶(mei)（如(ru)、膠原酶(mei)等(deng)）、胎牛(niu)血(xue)清(qing)、雙(shuang)抗等(deng)試劑(ji)，確保(bao)其(qi)無(wu)菌(jun)且(qie)在有(you)效期(qi)內(nei)。

3. 實(shi)驗動(dong)物或(huo)組(zu)織(zhi)來源準(zhun)備：根(gen)據(ju)實(shi)驗需(xu)求，選(xuan)擇(ze)合(he)適(shi)的動(dong)物並進(jin)行(xing)相(xiang)應的麻醉或(huo)處死，獲(huo)取(qu)所(suo)需(xu)組(zu)織(zhi)；或(huo)從(cong)已有(you)的(de)組(zu)織(zhi)樣(yang)本(ben)庫中獲(huo)取(qu)組(zu)織(zhi)。

取(qu)材與處(chu)理(li)

1. 取(qu)材：在無(wu)菌(jun)條件下，迅(xun)速(su)取(qu)出(chu)目(mu)標組(zu)織(zhi)，盡量減少(shao)對(dui)組(zu)織(zhi)的損(sun)傷(shang)，並去(qu)除(chu)多余(yu)的(de)脂(zhi)肪(fang)、結締(di)組(zu)織(zhi)等(deng)非目(mu)的(de)組(zu)織(zhi)。

2. 清(qing)洗(xi)：將取出的(de)組(zu)織(zhi)用預(yu)冷的(de)無(wu)菌(jun)PBS沖洗(xi)數(shu)次，以去(qu)除(chu)血(xue)液和(he)雜(za)質(zhi)。

3. 剪(jian)切(qie)：將組(zu)織(zhi)剪成(cheng)約1 - 2mm³的小(xiao)塊，以便後(hou)續(xu)消化(hua)。

細(xi)胞(bao)分離

1. 消(xiao)化：將剪碎的組(zu)織(zhi)塊放(fang)入含有適(shi)量消(xiao)化(hua)酶(mei)的(de)離(li)心(xin)管中，在37℃恒(heng)溫(wen)搖(yao)床(chuang)或(huo)培養箱(xiang)中消化(hua)壹(yi)段(duan)時(shi)間。期(qi)間可輕(qing)輕搖(yao)晃(huang)離(li)心(xin)管，使消(xiao)化更(geng)均(jun)勻(yun)。

2. 終(zhong)止(zhi)消化：當(dang)組(zu)織(zhi)塊大部分被消(xiao)化成(cheng)單細(xi)胞(bao)懸液或(huo)小(xiao)細(xi)胞(bao)團時(shi)，加入含血(xue)清(qing)的(de)培養基終(zhong)止(zhi)消化。

3. 過濾與離心(xin)：用(yong)細(xi)胞(bao)篩過濾細(xi)胞(bao)懸液，去(qu)除(chu)未消化(hua)的(de)組(zu)織(zhi)碎片，然(ran)後(hou)將濾液以適當(dang)的(de)轉(zhuan)速(su)離(li)心(xin)，收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)沈澱(dian)。

細(xi)胞(bao)觀察與檢(jian)測(ce)

1. 日(ri)常觀察：每(mei)天(tian)用倒置(zhi)顯微(wei)鏡觀察細(xi)胞(bao)的形態、生長(chang)狀(zhuang)態、密度(du)等(deng)，記錄(lu)細(xi)胞(bao)的變(bian)化(hua)情(qing)況，如(ru)發(fa)現細(xi)胞(bao)汙染或(huo)異常，及(ji)時(shi)采(cai)取相(xiang)應措施。
2. 細(xi)胞(bao)計數與(yu)活(huo)力(li)檢測：在需(xu)要時(shi)，可(ke)采(cai)用臺盼藍染色(se)等(deng)方法(fa)對(dui)細(xi)胞(bao)進(jin)行(xing)計數和(he)活(huo)力(li)檢測，以了(le)解細(xi)胞(bao)的生(sheng)長(chang)情(qing)況和(he)健(jian)康狀(zhuang)態。

壹(yi)、取材與分離

1. 快(kuai)速(su)操(cao)作

- 組(zu)織(zhi)取材後(hou)需(xu)立(li)即處理，避免(mian)長時(shi)間暴露(lu)於(yu)室溫(wen)或(huo)非營養環境。

- 使(shi)用無(wu)菌(jun) PBS 或(huo)生理(li)鹽(yan)水(shui)沖洗(xi)組(zu)織(zhi)，去(qu)除(chu)血(xue)液、雜(za)質(zhi)。

2. 消(xiao)化酶(mei)選(xuan)擇(ze)

- 根(gen)據(ju)組(zu)織(zhi)類(lei)型選(xuan)擇(ze)消化(hua)酶(mei)，避免(mian)過度消化導(dao)致細(xi)胞(bao)損(sun)傷(shang)。

- 消(xiao)化時(shi)間需(xu)嚴格控制(zhi)（通常 10-30 分鐘），可(ke)通過顯微鏡觀察細(xi)胞(bao)解離(li)狀(zhuang)態。

二(er)、培養條件優化(hua)

1. 培養基選(xuan)擇(ze)

- 使(shi)用含血(xue)清(qing)或(huo)特定生長因子的培養基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分細(xi)胞(bao)需(xu)添加胰島素(su)、EGF 等(deng)。

- 避免(mian)頻(pin)繁(fan)更(geng)換(huan)培養基品(pin)牌或(huo)批次，減(jian)少(shao)細(xi)胞(bao)適應壓力。

2. 貼(tie)壁(bi)與(yu)傳代

- 原代細(xi)胞(bao)貼(tie)壁(bi)能力(li)較(jiao)弱，可(ke)能需(xu)要包(bao)被培養皿(min)（如(ru)膠原蛋白、多聚賴(lai)氨酸）。

- 傳代時(shi)密(mi)度建(jian)議(yi)控制(zhi)在 70%-80%，過度匯(hui)合(he)會(hui)導(dao)致接觸抑(yi)制(zhi)和(he)分化。

三(san)、汙染控制(zhi)

1. 無(wu)菌(jun)操(cao)作

- 全(quan)程在(zai)超(chao)凈(jing)臺操(cao)作，使(shi)用(yong)壹次性(xing)耗材，避免(mian)交(jiao)叉汙染。

- 培養基中可添(tian)加雙(shuang)抗，但長期(qi)使(shi)用(yong)可能影(ying)響(xiang)細(xi)胞(bao)活(huo)性(xing)。

2. 支(zhi)原體檢(jian)測

- 定期(qi)檢(jian)測(ce)支(zhi)原體汙(wu)染（如(ru) PCR 法(fa)），汙(wu)染後(hou)需(xu)及(ji)時(shi)丟(diu)棄細(xi)胞(bao)。

四(si)、狀(zhuang)態監控

1. 日(ri)常觀察

- 每(mei)天(tian)檢查細(xi)胞(bao)形態、密度(du)及(ji)培養基顏(yan)色(se)，及(ji)時(shi)更(geng)換(huan)培養基（通(tong)常每(mei) 2-3 天(tian)換(huan)液壹次）。

- 異(yi)常形態（如(ru)細(xi)胞(bao)變圓、碎片增(zeng)多）可能提(ti)示汙(wu)染或(huo)營養不足(zu)。

2. 傳代與(yu)凍存

- 原代細(xi)胞(bao)分裂(lie)次數(shu)有(you)限(xian)（壹(yi)般 5-10 代），需(xu)及(ji)時(shi)凍(dong)存早(zao)期(qi)代(dai)次細(xi)胞(bao)。

- 凍(dong)存液建議(yi)使用(yong) DMSO+血(xue)清(qing)（或(huo)專用(yong)凍(dong)存(cun)培養基），梯(ti)度降溫(wen)後(hou)液氮保(bao)存。