【概(gai)要(yao)描(miao)述(shu)】人腎成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出(chu)售的產(chan)品(pin)：EBV-Human2轉(zhuan)化(hua)人(ren)淋(lin)巴細(xi)胞小鼠(shu)結(jie)腸(chang)癌(ai)細胞(bao)帶熒(ying)光(guang)酶(mei)CT26.WT+LUC（種(zhong)屬鑒(jian)定）鼻咽癌(ai)細胞(bao)株 6-10b(STR鑒(jian)定正(zheng)確)小(xiao)鼠腦(nao)神(shen)經(jing)瘤細胞(bao)Neuro-2a（種(zhong)屬鑒(jian)定）小鼠乳(ru)腺(xian)癌(ai)細胞(bao)帶熒(ying)光(guang)酶(mei)E0771+LUC（種(zhong)屬鑒(jian)定）小鼠淋巴結(jie)上(shang)皮(pi)細胞(bao)SVEC4-10（種(zhong)屬鑒(jian)定）小鼠結腸(chang)癌(ai)細胞(bao)株轉(zhuan)染MC-38+OVA（種(zhong)屬鑒(jian)定）人心臟微(wei)血(xue)管內(nei)皮(pi)細胞(bao)-永(yong)生(sheng)化HCMEC猴脈(mai)

人(ren)腎成(cheng)纖(xian)維(wei)分(fen)離(li)自腎組(zu)織；腎臟是(shi)機(ji)體的重(zhong)要(yao)器(qi)官(guan)，它的基本功能是生成(cheng)尿(niao)液(ye)，借以(yi)清除(chu)體內(nei)代(dai)謝(xie)產物(wu)及某(mou)些(xie)廢物、毒(du)物，同(tong)時(shi)經重(zhong)吸(xi)收功能保留(liu)水份(fen)及其他(ta)有(you)用物質，如葡萄(tao)糖、蛋白質、氨基酸、鈉(na)離(li)子、鉀離(li)子、碳(tan)suan氫(qing)鈉(na)等(deng)，以(yi)調節(jie)水、電(dian)解(jie)質平衡(heng)及維(wei)護(hu)酸(suan)堿平衡(heng)。腎臟同(tong)時(shi)還有(you)內(nei)分(fen)泌(mi)功能，生成腎素(su)、促(cu)紅(hong)細(xi)胞生成素(su)、活(huo)性維(wei)生(sheng)D3、前(qian)列腺素(su)、激(ji)肽等(deng)，又(you)為(wei)機體部(bu)分(fen)內(nei)分(fen)泌(mi)激(ji)素(su)的降(jiang)解(jie)場所(suo)和(he)腎外(wai)激(ji)素(su)的靶(ba)器(qi)官(guan)。腎臟的這(zhe)些功能，保證了機(ji)體內(nei)環(huan)境的穩定(ding)，使新(xin)陳(chen)代(dai)謝(xie)得以(yi)正(zheng)常進(jin)行。成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞(bao)（Fibroblast）是(shi)疏(shu)松結締組織的主(zhu)要(yao)細胞成分(fen)，由(you)胚胎時(shi)期(qi)的間(jian)充質細胞分(fen)化(hua)而(er)來(lai)。成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)較大，輪(lun)廓(kuo)清楚，多為(wei)突(tu)起(qi)的紡(fang)錘形或星(xing)形的扁(bian)平狀(zhuang)結(jie)構，其細(xi)胞核呈規(gui)則(ze)的卵圓(yuan)形，核仁大而(er)明顯(xian)。成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞(bao)功能活動旺盛(sheng)，細(xi)胞質嗜弱堿性，具明(ming)顯(xian)的蛋(dan)白質合成和(he)分(fen)泌(mi)活動，在(zai)壹(yi)定條(tiao)件(jian)下(xia)，它可(ke)以(yi)實現(xian)跟(gen)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)的互相(xiang)轉(zhuan)化(hua)；成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)對不(bu)同(tong)程(cheng)度的細(xi)胞變性、壞死(si)和(he)組織缺損以(yi)及骨創傷的修復有(you)著(zhe)十(shi)分(fen)重(zhong)要(yao)的作(zuo)用。腎成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)是(shi)腎臟結(jie)締組織中最重(zhong)要(yao)的細(xi)胞類型(xing)，在(zai)體外(wai)培(pei)養(yang)中，壹般大致成梭(suo)形、多角形或不(bu)規(gui)則(ze)形等，為(wei)貼(tie)壁(bi)生長型(xing)細胞(bao)。剛分(fen)離(li)的腎成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)呈圓形、折(zhe)光(guang)性(xing)良(liang)好(hao)，懸浮(fu)於(yu)培(pei)養(yang)基中。30min細胞(bao)貼(tie)壁(bi)，其中部(bu)分(fen)開(kai)始(shi)伸(shen)出偽(wei)足(zu)，表(biao)現為(wei)小的突(tu)起(qi)；6h後(hou)細(xi)胞(bao)基本貼(tie)壁(bi)wan全，伸(shen)展(zhan)成(cheng)梭(suo)形，胞核(he)清晰，分(fen)布(bu)較均勻(yun)，散(san)在(zai)生(sheng)長，不(bu)聚集成團；細胞(bao)生(sheng)長迅(xun)速(su)，5-7天即呈融(rong)合狀(zhuang)態(tai)，細胞(bao)排列緊密(mi)，有(you)的交(jiao)叉重(zhong)疊(die)生長，平坦(tan)、胞體較大，細(xi)胞質透(tou)明(ming)，細(xi)胞(bao)核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞(bao)融(rong)合，並彼(bi)此(ci)連接(jie)成(cheng)網(wang)狀(zhuang)；細(xi)胞呈突(tu)起(qi)的紡(fang)錘形或星(xing)形的扁(bian)平分(fen)布(bu)。其主(zhu)要(yao)功能有(you)：①組(zu)成(cheng)過濾(lv)屏障(zhang)內壁(bi)的重(zhong)要(yao)部(bu)分(fen)；②在(zai)炎(yan)癥(zheng)和(he)致血栓(shuan)物質的刺(ci)激(ji)合成必(bi)要(yao)的生(sheng)物活(huo)性分(fen)子(zi)；③受損後(hou)影(ying)響(xiang)系膜細(xi)胞(bao)和(he)上(shang)皮(pi)細胞(bao)，進(jin)而(er)影響腎臟病(bing)變。
方(fang)法(fa)簡(jian)介：

公(gong)司(si)實驗(yan)室分(fen)離(li)的人(ren)腎成(cheng)纖(xian)維(wei)采(cai)用yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)-膠(jiao)原(yuan)酶(mei)混合消化法(fa)結(jie)合差速(su)貼(tie)壁(bi)法制(zhi)備而(er)來(lai)，細胞(bao)總(zong)量約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶。
質量檢測(ce)：

公(gong)司(si)實驗(yan)室分(fen)離(li)的人(ren)腎成(cheng)纖(xian)維(wei)經(jing)Vimentin免(mian)疫熒(ying)光(guang)鑒(jian)定(ding)，純度可(ke)達(da)90%以(yi)上(shang)，且(qie)不(bu)含有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體、細(xi)菌(jun)、酵母和(he)真(zhen)菌(jun)等(deng)。

本(ben)公(gong)司所(suo)有(you)產(chan)品(pin)僅(jin)供科學實(shi)驗(yan)，不(bu)做其他(ta)科學實(shi)驗(yan)外(wai)的使用！

培(pei)養(yang)基 含(han)FBS、生(sheng)長添(tian)加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液(ye)頻率 每(mei)2-3天(tian)換(huan)液壹(yi)次

生(sheng)長特性(xing) 貼(tie)壁(bi)

細(xi)胞(bao)形態(tai) 成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)樣

傳(chuan)代(dai)特(te)性(xing) 可(ke)傳(chuan)5代(dai)左右(you)；3代(dai)以(yi)內狀(zhuang)態(tai)

消化液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)

培(pei)養(yang)條件(jian) 氣(qi)相(xiang)：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工作(zuo)

1. 實(shi)驗(yan)器(qi)材準(zhun)備：準(zhun)備無菌(jun)的培(pei)養(yang)皿、培(pei)養(yang)瓶、移(yi)液(ye)管、離(li)心(xin)管、手(shou)術(shu)器(qi)械(xie)等，並進(jin)行高(gao)壓滅(mie)菌(jun)或其(qi)他(ta)合適(shi)的消毒(du)處理(li)。

2. 試劑(ji)準(zhun)備(bei)：配(pei)制(zhi)或購買(mai)合適(shi)的培(pei)養(yang)基、消化酶(mei)（如、膠(jiao)原(yuan)酶(mei)等）、胎牛(niu)血(xue)清、雙抗(kang)等試劑(ji)，確(que)保(bao)其(qi)無菌(jun)且(qie)在(zai)有(you)效(xiao)期(qi)內(nei)。

3. 實(shi)驗(yan)動物(wu)或組(zu)織來(lai)源準(zhun)備(bei)：根據實(shi)驗(yan)需(xu)求，選擇合適(shi)的動物(wu)並進(jin)行相(xiang)應的麻(ma)醉(zui)或處死(si)，獲(huo)取(qu)所(suo)需(xu)組(zu)織；或從(cong)已有(you)的組(zu)織樣本庫中獲取(qu)組(zu)織。

取(qu)材與(yu)處理(li)

1. 取(qu)材：在(zai)無菌(jun)條(tiao)件(jian)下(xia)，迅(xun)速(su)取(qu)出(chu)目(mu)標(biao)組織，盡(jin)量減(jian)少(shao)對組織的損(sun)傷，並去除(chu)多余(yu)的脂肪、結締組織等非(fei)目(mu)的組(zu)織。

2. 清洗：將取(qu)出(chu)的組(zu)織用預冷(leng)的無菌(jun)PBS沖(chong)洗數次(ci)，以(yi)去除(chu)血液(ye)和(he)雜質。

3. 剪(jian)切：將組織剪(jian)成約1 - 2mm³的小(xiao)塊，以(yi)便後(hou)續(xu)消化。

細(xi)胞(bao)分(fen)離(li)

1. 消化：將剪(jian)碎(sui)的組(zu)織塊放(fang)入含有(you)適(shi)量消化酶(mei)的離(li)心管中，在(zai)37℃恒(heng)溫搖(yao)床(chuang)或培(pei)養(yang)箱(xiang)中消化壹(yi)段時(shi)間。期(qi)間(jian)可(ke)輕輕搖(yao)晃(huang)離心(xin)管，使消化更(geng)均勻(yun)。

2. 終止消化：當(dang)組(zu)織塊大部(bu)分(fen)被(bei)消化成(cheng)單細胞懸液或小(xiao)細胞(bao)團時(shi)，加(jia)入含血清的培(pei)養(yang)基終止消化。

3. 過濾(lv)與離心：用細胞(bao)篩過濾(lv)細胞懸液，去(qu)除(chu)未消化的組(zu)織碎(sui)片(pian)，然後(hou)將濾(lv)液以(yi)適(shi)當的轉(zhuan)速(su)離心(xin)，收集細胞沈(chen)澱。

細(xi)胞(bao)觀(guan)察(cha)與檢(jian)測

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察(cha)：每(mei)天用倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡觀(guan)察(cha)細胞(bao)的形態(tai)、生長狀(zhuang)態(tai)、密度(du)等，記(ji)錄細胞的變化情況，如發現細胞汙染或異(yi)常(chang)，及時(shi)采(cai)取(qu)相(xiang)應(ying)措施(shi)。
2. 細(xi)胞(bao)計數與(yu)活(huo)力檢測：在(zai)需(xu)要(yao)時(shi)，可(ke)采(cai)用臺(tai)盼藍(lan)染色等方(fang)法(fa)對細胞(bao)進(jin)行計數和(he)活力檢測，以(yi)了解(jie)細胞(bao)的生(sheng)長情況和(he)健康狀(zhuang)態(tai)。

壹(yi)、取(qu)材與(yu)分(fen)離(li)

1. 快速(su)操作(zuo)

- 組(zu)織取(qu)材後(hou)需(xu)立(li)即處理(li)，避(bi)免(mian)長時(shi)間暴(bao)露(lu)於(yu)室溫(wen)或非(fei)營(ying)養(yang)環境(jing)。

- 使用無菌(jun) PBS 或生(sheng)理(li)鹽(yan)水沖(chong)洗組織，去除(chu)血液(ye)、雜質。

2. 消化酶(mei)選擇

- 根據組(zu)織類型(xing)選擇消化酶(mei)，避(bi)免(mian)過度消化導(dao)致細胞(bao)損傷。

- 消化時(shi)間需(xu)嚴(yan)格(ge)控制(zhi)（通(tong)常(chang) 10-30 分(fen)鐘），可(ke)通(tong)過顯(xian)微(wei)鏡觀(guan)察(cha)細胞(bao)解(jie)離狀(zhuang)態(tai)。

二(er)、培(pei)養(yang)條件(jian)優(you)化

1. 培(pei)養(yang)基選擇

- 使用含血(xue)清或特(te)定生(sheng)長因(yin)子(zi)的培(pei)養(yang)基（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分(fen)細(xi)胞需(xu)添(tian)加(jia)胰島(dao)素(su)、EGF 等(deng)。

- 避(bi)免(mian)頻繁更(geng)換(huan)培(pei)養(yang)基品(pin)牌(pai)或批(pi)次，減(jian)少(shao)細(xi)胞(bao)適(shi)應壓(ya)力。

2. 貼(tie)壁(bi)與傳(chuan)代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞(bao)貼(tie)壁(bi)能力較弱(ruo)，可(ke)能需(xu)要(yao)包被(bei)培(pei)養(yang)皿（如膠(jiao)原(yuan)蛋(dan)白(bai)、多(duo)聚賴氨(an)酸(suan)）。

- 傳(chuan)代(dai)時(shi)密度建議(yi)控制(zhi)在(zai) 70%-80%，過度匯合會導(dao)致接(jie)觸(chu)抑(yi)制(zhi)和(he)分(fen)化(hua)。

三、汙(wu)染控制(zhi)

1. 無菌(jun)操(cao)作(zuo)

- 全程(cheng)在(zai)超(chao)凈(jing)臺(tai)操作(zuo)，使用壹次(ci)性耗材，避(bi)免(mian)交叉汙(wu)染。

- 培(pei)養(yang)基中可(ke)添(tian)加(jia)雙抗(kang)，但(dan)長期(qi)使用可(ke)能影(ying)響(xiang)細胞(bao)活(huo)性。

2. 支(zhi)原(yuan)體檢(jian)測(ce)

- 定(ding)期(qi)檢(jian)測(ce)支(zhi)原(yuan)體汙(wu)染（如(ru) PCR 法），汙(wu)染後(hou)需(xu)及時(shi)丟棄細(xi)胞。

四(si)、狀(zhuang)態(tai)監控

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察(cha)

- 每(mei)天檢查細(xi)胞(bao)形態(tai)、密度(du)及培(pei)養(yang)基顏色，及時(shi)更換培(pei)養(yang)基（通(tong)常(chang)每(mei) 2-3 天換液(ye)壹次）。

- 異(yi)常(chang)形態(tai)（如細(xi)胞變圓、碎(sui)片(pian)增多(duo)）可(ke)能提(ti)示(shi)汙染或營(ying)養(yang)不(bu)足。

2. 傳(chuan)代(dai)與(yu)凍(dong)存(cun)

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞(bao)分(fen)裂(lie)次(ci)數有(you)限(xian)（壹(yi)般 5-10 代(dai)），需(xu)及時(shi)凍存(cun)早(zao)期(qi)代(dai)次(ci)細(xi)胞(bao)。

- 凍(dong)存(cun)液(ye)建議(yi)使用 DMSO+血清（或專(zhuan)用凍存(cun)培(pei)養(yang)基），梯(ti)度(du)降(jiang)溫(wen)後(hou)液(ye)氮(dan)保存(cun)。