【概要(yao)描(miao)述(shu)】人(ren)破(po)骨(gu)細(xi)胞公司(si)正在(zai)出售的(de)產(chan)品(pin)：M-NFS-60白(bai)血病JVM-2 (EB病毒感(gan)染(ran)的(de)人(ren)外周(zhou)淋(lin)巴(ba)細(xi)胞)SW48 (人(ren)結腸(chang)腺癌(ai)細(xi)胞)NCI-H441 (人(ren)肺腺(xian)癌(ai)細(xi)胞)Farage (人(ren)B淋(lin)巴(ba)瘤細(xi)胞) (STR鑒(jian)定正(zheng)確(que))MC/CAR (人(ren)外周(zhou)血淋(lin)巴(ba)細(xi)胞)HA-VSMC (人(ren)主(zhu)動(dong)脈(mai)血管(guan)平(ping)滑(hua)肌細(xi)胞)A549/DDP (人(ren)肺腺(xian)癌(ai)耐株(zhu))MCF-7/DDP (人(ren)乳腺(xian)癌(ai)耐藥(yao)性細(xi)胞)MCF-7/ADM (人(ren)乳腺(xian)癌(ai)耐藥(yao)性細(xi)

本公司(si)所有產(chan)品(pin)僅供科學實驗，不(bu)做(zuo)其(qi)他科(ke)學實驗外的使用！

人(ren)破(po)骨(gu)分離自(zi)骨(gu)組織(zhi)和骨(gu)髓；破(po)骨(gu)細(xi)胞是骨(gu)組織(zhi)中的多(duo)核(he)巨細(xi)胞，位(wei)於骨(gu)組織(zhi)表面的淺凹處。目前壹般(ban)認為(wei)破(po)骨(gu)細(xi)胞是分離自(zi)骨(gu)骼(ge)外的造血系統(tong)，其(qi)前體可(ke)能屬於造血幹細(xi)胞的前單(dan)核(he)細(xi)胞。破(po)骨(gu)細(xi)胞的主(zhu)要(yao)功(gong)能是維持(chi)骨(gu)吸收(shou)和骨(gu)形成的(de)相對平(ping)衡，若(ruo)失去(qu)這種平(ping)衡則(ze)發(fa)生(sheng)病(bing)理性變化。因(yin)此(ci)多數學者從(cong)破(po)骨(gu)細(xi)胞著(zhe)手(shou)研究(jiu)破(po)骨(gu)細(xi)胞的結構(gou)、功(gong)能探討骨(gu)吸收(shou)，形成相(xiang)互平(ping)衡的(de)機制。但(dan)破(po)骨(gu)細(xi)胞是壹種終末分化細(xi)胞，屬於不(bu)增(zeng)殖細(xi)胞群(qun)，不(bu)能增殖和傳代(dai)，只(zhi)能進行原代(dai)培(pei)養(yang)且(qie)存活(huo)時(shi)間(jian)較(jiao)短。
方(fang)法(fa)簡(jian)介(jie)：

公司(si)實驗室(shi)分離的(de)人(ren)破(po)骨(gu)采用(yong)機械分離法(fa)/密(mi)度梯(ti)度離心(xin)法(fa)和骨(gu)髓單(dan)核(he)細(xi)胞誘導法(fa)制(zhi)備而來，細(xi)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhi)量檢測：

公司(si)實驗室(shi)分離的(de)人(ren)破(po)骨(gu)經(jing)TRAP染(ran)色檢(jian)測，純度可(ke)達(da)30%以上，且(qie)不(bu)含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體(ti)、細(xi)菌、酵(jiao)母(mu)和真菌(jun)等。

培(pei)養(yang)基(ji) 含(han)FBS、生(sheng)長(chang)添加劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液(ye)頻率 每(mei)2-3天(tian)換(huan)液(ye)壹次

生(sheng)長(chang)特性 貼壁

細(xi)胞形態(tai) 多(duo)核(he)巨細(xi)胞

傳(chuan)代(dai)特(te)性 屬(shu)於終末分化細(xi)胞；屬於不(bu)增(zeng)殖細(xi)胞群(qun)

消(xiao)化液(ye) 0.25%yi蛋白(bai)酶(mei)

培(pei)養(yang)條件 氣(qi)相(xiang)：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備工作

1. 實驗器材(cai)準(zhun)備：準(zhun)備無菌(jun)的(de)培養(yang)皿、培(pei)養瓶、移液(ye)管(guan)、離心(xin)管(guan)、手術(shu)器械(xie)等，並進行高壓滅菌或(huo)其(qi)他合(he)適的消(xiao)毒(du)處理。

2. 試(shi)劑(ji)準(zhun)備：配制或購(gou)買合適(shi)的培(pei)養基(ji)、消(xiao)化酶(mei)（如(ru)、膠(jiao)原(yuan)酶(mei)等）、胎(tai)牛(niu)血清、雙抗(kang)等試(shi)劑(ji)，確(que)保其(qi)無菌(jun)且(qie)在(zai)有效(xiao)期(qi)內(nei)。

3. 實驗動物(wu)或組織(zhi)來(lai)源準(zhun)備：根(gen)據(ju)實驗需(xu)求，選(xuan)擇合(he)適的(de)動物(wu)並進行相應(ying)的麻(ma)醉或處死，獲(huo)取(qu)所(suo)需(xu)組(zu)織；或從(cong)已有(you)的組織樣(yang)本庫中獲(huo)取(qu)組(zu)織(zhi)。

取(qu)材(cai)與處理

1. 取(qu)材(cai)：在(zai)無菌(jun)條(tiao)件下，迅(xun)速(su)取(qu)出(chu)目標組(zu)織(zhi)，盡(jin)量減少對組(zu)織(zhi)的損傷，並去(qu)除多余(yu)的脂(zhi)肪、結締組織等非目的組織(zhi)。

2. 清洗：將(jiang)取出(chu)的(de)組(zu)織用預(yu)冷(leng)的(de)無菌(jun)PBS沖(chong)洗(xi)數次，以去(qu)除血液(ye)和雜質(zhi)。

3. 剪(jian)切(qie)：將(jiang)組織(zhi)剪(jian)成約1 - 2mm³的小(xiao)塊(kuai)，以便後續消(xiao)化。

細(xi)胞分離

1. 消(xiao)化：將(jiang)剪(jian)碎(sui)的組(zu)織塊(kuai)放入(ru)含(han)有適(shi)量消(xiao)化酶(mei)的(de)離心(xin)管(guan)中，在(zai)37℃恒溫搖(yao)床或(huo)培(pei)養箱(xiang)中消(xiao)化壹段時間(jian)。期間(jian)可(ke)輕輕搖(yao)晃(huang)離心(xin)管(guan)，使消(xiao)化更(geng)均(jun)勻。

2. 終(zhong)止(zhi)消(xiao)化：當組(zu)織(zhi)塊大(da)部(bu)分被消(xiao)化成單(dan)細(xi)胞懸液(ye)或(huo)小(xiao)細(xi)胞團時，加入(ru)含(han)血清的培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化。

3. 過(guo)濾與(yu)離心(xin)：用細(xi)胞篩過(guo)濾細(xi)胞懸液(ye)，去(qu)除未消(xiao)化的(de)組織(zhi)碎片(pian)，然(ran)後將(jiang)濾液(ye)以適當的(de)轉(zhuan)速離心(xin)，收(shou)集(ji)細(xi)胞沈(chen)澱(dian)。

細(xi)胞觀察(cha)與(yu)檢(jian)測

1. 日(ri)常觀(guan)察(cha)：每(mei)天(tian)用倒置顯(xian)微(wei)鏡觀(guan)察(cha)細(xi)胞的形態(tai)、生(sheng)長狀態(tai)、密(mi)度等，記(ji)錄細(xi)胞的變化情況，如(ru)發(fa)現細(xi)胞汙染(ran)或(huo)異(yi)常，及時(shi)采(cai)取(qu)相應措施(shi)。
2. 細(xi)胞計(ji)數與活(huo)力(li)檢(jian)測：在(zai)需(xu)要(yao)時，可(ke)采用臺(tai)盼藍染(ran)色等方法(fa)對細(xi)胞進行計(ji)數和活(huo)力(li)檢(jian)測，以了解細(xi)胞的生長情況和健(jian)康狀(zhuang)態(tai)。

壹、取(qu)材與(yu)分離

1. 快(kuai)速(su)操作

- 組(zu)織(zhi)取材後需(xu)立即處理，避免(mian)長(chang)時間暴露(lu)於室(shi)溫或(huo)非營養(yang)環境(jing)。

- 使(shi)用(yong)無菌(jun) PBS 或(huo)生理(li)鹽(yan)水沖(chong)洗(xi)組(zu)織，去(qu)除血液(ye)、雜(za)質(zhi)。

2. 消(xiao)化酶(mei)選(xuan)擇

- 根(gen)據(ju)組織(zhi)類(lei)型(xing)選(xuan)擇消(xiao)化酶(mei)，避免(mian)過(guo)度消(xiao)化導(dao)致細(xi)胞損傷。

- 消(xiao)化時(shi)間需(xu)嚴(yan)格(ge)控(kong)制(zhi)（通常 10-30 分鐘），可(ke)通過(guo)顯(xian)微(wei)鏡觀(guan)察(cha)細(xi)胞解離狀(zhuang)態(tai)。

二、培養條件優化

1. 培(pei)養(yang)基(ji)選(xuan)擇

- 使(shi)用(yong)含(han)血清或特(te)定(ding)生(sheng)長(chang)因(yin)子的(de)培(pei)養基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部分細(xi)胞需(xu)添(tian)加胰島(dao)素(su)、EGF 等。

- 避免(mian)頻繁(fan)更(geng)換(huan)培(pei)養基(ji)品(pin)牌或(huo)批次，減少(shao)細(xi)胞適應壓力(li)。

2. 貼壁與(yu)傳(chuan)代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞貼壁能力較(jiao)弱(ruo)，可(ke)能需(xu)要(yao)包被(bei)培(pei)養(yang)皿（如(ru)膠(jiao)原(yuan)蛋白(bai)、多聚(ju)賴氨(an)酸）。

- 傳(chuan)代(dai)時(shi)密(mi)度建(jian)議(yi)控(kong)制(zhi)在(zai) 70%-80%，過(guo)度匯(hui)合(he)會(hui)導致接(jie)觸(chu)抑制(zhi)和分化。

三(san)、汙(wu)染(ran)控(kong)制(zhi)

1. 無菌(jun)操(cao)作

- 全程在(zai)超(chao)凈臺操(cao)作，使(shi)用(yong)壹次性耗(hao)材(cai)，避免(mian)交叉(cha)汙(wu)染(ran)。

- 培(pei)養(yang)基(ji)中可(ke)添加雙抗(kang)，但(dan)長期(qi)使用可(ke)能影響(xiang)細(xi)胞活(huo)性。

2. 支(zhi)原(yuan)體檢測

- 定(ding)期(qi)檢測支(zhi)原(yuan)體(ti)汙染(ran)（如(ru) PCR 法(fa)），汙(wu)染(ran)後需(xu)及時(shi)丟(diu)棄細(xi)胞。

四(si)、狀(zhuang)態(tai)監控(kong)

1. 日(ri)常觀(guan)察(cha)

- 每(mei)天(tian)檢查(zha)細(xi)胞形態(tai)、密(mi)度及培(pei)養(yang)基(ji)顏色，及時(shi)更(geng)換(huan)培養基(ji)（通常每(mei) 2-3 天(tian)換液(ye)壹次）。

- 異(yi)常形態(tai)（如(ru)細(xi)胞變圓、碎片(pian)增(zeng)多(duo)）可(ke)能提示(shi)汙染(ran)或(huo)營(ying)養(yang)不(bu)足(zu)。

2. 傳(chuan)代(dai)與(yu)凍(dong)存

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞分裂次數有限(xian)（壹般(ban) 5-10 代(dai)），需(xu)及時(shi)凍(dong)存早期代(dai)次細(xi)胞。

- 凍(dong)存液(ye)建(jian)議(yi)使(shi)用(yong) DMSO+血清（或專(zhuan)用(yong)凍(dong)存培養基(ji)），梯(ti)度降(jiang)溫後液(ye)氮(dan)保存。