【概要描(miao)述(shu)】人皮膚肥大細(xi)胞(bao)公(gong)司(si)正在(zai)出(chu)售的(de)產品(pin)：MOLM-13白血(xue)病(bing)NK-92 (人(ren)惡(e)性非霍(huo)奇金淋巴(ba)瘤患者的自然(ran)殺傷(shang)細(xi)胞(bao)) (STR鑒定(ding)正確)NK-92MI (人(ren)惡(e)性非霍(huo)奇金淋巴(ba)瘤患者的自然(ran)殺傷(shang)細(xi)胞(bao)) (STR鑒定(ding)正確)IMR-90 (人(ren)胚(pei)肺(fei)成纖維細(xi)胞(bao))(STR鑒定(ding)正確)M-7 (人(ren)胚(pei)胎(tai)成纖維細(xi)胞(bao))M-20 (人胚胎成纖維細(xi)胞(bao))M-22 (人胚胎成纖維細(xi)胞(bao))293H (人胚腎細(xi)胞(bao))293F (人胚腎細(xi)胞(bao))HSP

本公(gong)司(si)所(suo)有產品(pin)僅供(gong)科學實(shi)驗(yan)，不(bu)做其(qi)他(ta)科學實(shi)驗(yan)外(wai)的使用(yong)！

人皮膚肥大分離自皮膚組織；皮膚肥大細(xi)胞(bao)廣泛分布於皮膚微血(xue)管(guan)周(zhou)圍(wei)，分泌(mi)多種(zhong)細(xi)胞(bao)因子，參與免疫調節(jie)（T細(xi)胞(bao)、B細(xi)胞(bao)、APC細(xi)胞(bao)活化(hua)）。皮膚肥大細(xi)胞(bao)表達MHC分子、B7分子，具(ju)有APC功能(neng)。表達大量的IgE-Fc受體，釋(shi)放過敏介質(zhi)。具(ju)有弱吞(tun)噬功(gong)能(neng)，和血(xue)液(ye)的(de)嗜(shi)堿(jian)粒細(xi)胞(bao)同樣(yang)，具(ju)有強嗜(shi)堿(jian)性顆(ke)粒的(de)組織細(xi)胞(bao)。存在(zai)於血(xue)液(ye)中(zhong)的(de)這(zhe)類顆(ke)粒，含(han)有肝素(su)、組(zu)織胺(an)、5-羥(qiang)色胺(an)，由細(xi)胞(bao)崩解釋(shi)放出(chu)顆(ke)粒以(yi)及(ji)顆(ke)粒中(zhong)的(de)物質(zhi)，可在(zai)組織內引(yin)起(qi)速發(fa)型(xing)過敏反(fan)應(ying)（炎癥）。由於在(zai)肥大細(xi)胞(bao)上(shang)結合的IgE抗(kang)體(ti)和抗(kang)原的(de)接(jie)觸(chu)，使細(xi)胞(bao)多陷於崩壞。肥大細(xi)胞(bao)呈(cheng)圓(yuan)形或卵圓(yuan)形，細(xi)胞(bao)核小，呈(cheng)圓(yuan)形或橢圓形，染色淺，位(wei)於(yu)細(xi)胞(bao)中(zhong)央(yang)。細(xi)胞(bao)常成堆或單(dan)個分布於血(xue)管(guan)附(fu)近(jin)。細(xi)胞(bao)呈(cheng)圓(yuan)形或卵圓(yuan)形，細(xi)胞(bao)質(zhi)中(zhong)充(chong)滿大小壹致(zhi)、染成藍紫(zi)色的顆(ke)粒，均(jun)勻(yun)分布在(zai)核周(zhou)圍。
方法(fa)簡(jian)介(jie)：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室分離的(de)人(ren)皮膚肥大采(cai)用膠(jiao)原酶(mei)-yi蛋(dan)白酶(mei)混合消化(hua)法(fa)制備而來，細(xi)胞(bao)總量約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量檢測(ce)：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室分離的(de)人(ren)皮膚肥大經MCG-35免疫熒光(guang)鑒(jian)定(ding)，純(chun)度(du)可達(da)90%以(yi)上(shang)，且不(bu)含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti)、細(xi)菌、酵(jiao)母和真(zhen)菌等(deng)。

培養(yang)基 含FBS、生長(chang)添加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液(ye)頻率(lv) 每2-3天換(huan)液壹次

生長(chang)特(te)性 貼壁

細(xi)胞(bao)形態 梭(suo)形、多角(jiao)形

傳代(dai)特(te)性 可傳(chuan)1-2代

消化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白酶(mei)

培養(yang)條(tiao)件 氣(qi)相：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準備(bei)工作(zuo)

1. 實(shi)驗(yan)器材準(zhun)備(bei)：準備無(wu)菌的培養(yang)皿、培(pei)養瓶(ping)、移(yi)液管、離(li)心(xin)管、手術(shu)器械等(deng)，並(bing)進(jin)行高壓(ya)滅(mie)菌或其(qi)他(ta)合(he)適(shi)的消毒處(chu)理。

2. 試劑準備(bei)：配制或購買(mai)合適的(de)培(pei)養(yang)基、消化(hua)酶(mei)（如(ru)、膠(jiao)原酶(mei)等(deng)）、胎(tai)牛血(xue)清(qing)、雙(shuang)抗(kang)等(deng)試劑，確保(bao)其(qi)無(wu)菌且在(zai)有效期(qi)內。

3. 實(shi)驗(yan)動物或組(zu)織來源(yuan)準備：根(gen)據實(shi)驗(yan)需求(qiu)，選(xuan)擇合適的(de)動物並進(jin)行相應(ying)的麻(ma)醉(zui)或(huo)處(chu)死(si)，獲(huo)取(qu)所(suo)需組(zu)織；或從已有的組(zu)織樣(yang)本(ben)庫(ku)中(zhong)獲(huo)取(qu)組織。

取(qu)材與處(chu)理

1. 取(qu)材：在(zai)無菌條(tiao)件下，迅(xun)速(su)取(qu)出(chu)目標(biao)組(zu)織，盡(jin)量減(jian)少(shao)對組(zu)織的損(sun)傷(shang)，並去(qu)除多(duo)余的(de)脂(zhi)肪(fang)、結締(di)組織等(deng)非目(mu)的組織。

2. 清洗：將取(qu)出(chu)的組(zu)織用預冷(leng)的(de)無(wu)菌PBS沖洗數次，以(yi)去(qu)除血(xue)液(ye)和雜質(zhi)。

3. 剪(jian)切：將組織剪(jian)成約(yue)1 - 2mm³的小塊，以(yi)便(bian)後續(xu)消化(hua)。

細(xi)胞(bao)分離

1. 消化(hua)：將剪(jian)碎的(de)組織塊放入(ru)含有適量消化(hua)酶(mei)的(de)離(li)心(xin)管中(zhong)，在(zai)37℃恒溫搖床或培(pei)養箱(xiang)中(zhong)消化(hua)壹段(duan)時(shi)間(jian)。期(qi)間(jian)可(ke)輕輕搖晃離心(xin)管(guan)，使(shi)消化(hua)更(geng)均(jun)勻(yun)。

2. 終(zhong)止(zhi)消化(hua)：當(dang)組(zu)織塊大部分被(bei)消化(hua)成單細(xi)胞(bao)懸液或小細(xi)胞(bao)團時，加(jia)入含(han)血(xue)清(qing)的(de)培(pei)養基終(zhong)止(zhi)消化(hua)。

3. 過濾與離(li)心(xin)：用細(xi)胞(bao)篩過濾細(xi)胞(bao)懸液，去(qu)除未(wei)消化(hua)的(de)組(zu)織碎片(pian)，然後將濾液以(yi)適(shi)當(dang)的(de)轉速離(li)心，收(shou)集細(xi)胞(bao)沈(chen)澱(dian)。

細(xi)胞(bao)觀察與檢(jian)測(ce)

1. 日常觀察(cha)：每天用(yong)倒(dao)置顯微鏡(jing)觀察(cha)細(xi)胞(bao)的形態、生長(chang)狀態(tai)、密(mi)度(du)等(deng)，記錄細(xi)胞(bao)的變化(hua)情(qing)況(kuang)，如發(fa)現細(xi)胞(bao)汙(wu)染(ran)或(huo)異(yi)常(chang)，及時采(cai)取(qu)相應(ying)措(cuo)施(shi)。
2. 細(xi)胞(bao)計數與活力(li)檢測(ce)：在(zai)需要(yao)時，可(ke)采(cai)用臺(tai)盼藍染(ran)色等(deng)方(fang)法(fa)對(dui)細(xi)胞(bao)進行計數和活力(li)檢測(ce)，以(yi)了(le)解(jie)細(xi)胞(bao)的生長(chang)情況(kuang)和健(jian)康狀(zhuang)態(tai)。

壹、取(qu)材與分離

1. 快速(su)操作(zuo)

- 組織取(qu)材後(hou)需立(li)即處(chu)理，避免長(chang)時間(jian)暴(bao)露於室溫或非營養(yang)環境。

- 使用(yong)無(wu)菌 PBS 或生理鹽(yan)水沖洗組織，去(qu)除血(xue)液(ye)、雜質(zhi)。

2. 消化(hua)酶(mei)選(xuan)擇(ze)

- 根(gen)據組織類型(xing)選擇(ze)消化(hua)酶(mei)，避(bi)免過度(du)消化(hua)導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)損傷(shang)。

- 消化(hua)時(shi)間(jian)需嚴(yan)格(ge)控(kong)制（通常(chang) 10-30 分鐘），可(ke)通過顯微鏡觀察(cha)細(xi)胞(bao)解離狀態。

二、培(pei)養條(tiao)件優(you)化(hua)

1. 培養(yang)基選擇

- 使用(yong)含(han)血(xue)清(qing)或(huo)特(te)定(ding)生長(chang)因子的(de)培養(yang)基（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分細(xi)胞(bao)需添加(jia)胰島素(su)、EGF 等(deng)。

- 避免頻繁(fan)更(geng)換(huan)培養基品(pin)牌或(huo)批次，減(jian)少(shao)細(xi)胞(bao)適應(ying)壓(ya)力(li)。

2. 貼壁與傳(chuan)代(dai)

- 原代(dai)細(xi)胞(bao)貼壁能(neng)力(li)較(jiao)弱(ruo)，可(ke)能(neng)需要(yao)包(bao)被(bei)培(pei)養(yang)皿(min)（如(ru)膠原蛋(dan)白、多(duo)聚賴(lai)氨(an)酸）。

- 傳代(dai)時(shi)密(mi)度(du)建(jian)議控(kong)制在(zai) 70%-80%，過度(du)匯合會導致(zhi)接(jie)觸(chu)抑制和分化(hua)。

三、汙(wu)染(ran)控(kong)制

1. 無菌操作(zuo)

- 全程(cheng)在(zai)超凈臺操作(zuo)，使(shi)用(yong)壹次性耗材，避(bi)免交(jiao)叉汙(wu)染(ran)。

- 培養(yang)基中(zhong)可(ke)添加(jia)雙(shuang)抗(kang)，但(dan)長(chang)期使(shi)用(yong)可(ke)能影(ying)響(xiang)細(xi)胞(bao)活性。

2. 支原體(ti)檢測

- 定(ding)期(qi)檢(jian)測(ce)支(zhi)原體(ti)汙(wu)染(ran)（如(ru) PCR 法(fa)），汙(wu)染(ran)後(hou)需及(ji)時丟棄細(xi)胞(bao)。

四、狀態(tai)監控

1. 日常觀察(cha)

- 每天檢(jian)查細(xi)胞(bao)形態、密(mi)度(du)及培(pei)養(yang)基顏色，及時(shi)更(geng)換(huan)培養基（通常(chang)每 2-3 天換(huan)液壹次）。

- 異常(chang)形態（如(ru)細(xi)胞(bao)變圓(yuan)、碎(sui)片增多）可能提(ti)示(shi)汙(wu)染(ran)或(huo)營養(yang)不(bu)足(zu)。

2. 傳代(dai)與凍(dong)存(cun)

- 原代(dai)細(xi)胞(bao)分裂(lie)次數有限（壹般 5-10 代），需及(ji)時凍(dong)存(cun)早(zao)期代(dai)次(ci)細(xi)胞(bao)。

- 凍(dong)存(cun)液(ye)建(jian)議使(shi)用(yong) DMSO+血(xue)清(qing)（或(huo)專用凍(dong)存(cun)培(pei)養(yang)基），梯度(du)降(jiang)溫後液(ye)氮保存(cun)。