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支(zhi)原體elisa檢(jian)測試(shi)劑盒
使(shi)用目的(de):
本試(shi)劑盒用於(yu)測定大(da)鼠血(xue)清,血(xue)漿及(ji)相(xiang)關(guan)液體樣本中含量(liang)。
試(shi)劑盒組(zu)成:
| 1 | 30倍濃縮(suo)洗滌(di)液 | 20ml×1瓶(ping) | 7 | 終(zhong)止(zhi)液 | 6ml×1瓶(ping) |
| 2 | 酶(mei)標試(shi)劑 | 6ml×1瓶(ping) | 8 | 標準品(240ng/L) | 0.5ml×1瓶(ping) |
| 3 | 酶(mei)標包被板(ban) | 12孔×8條(tiao) | 9 | 標準品稀(xi)釋(shi)液 | 1.5ml×1瓶(ping) |
| 4 | 樣品稀(xi)釋(shi)液 | 6ml×1瓶(ping) | 10 | 說(shuo)明書 | 1份 |
| 5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶(ping) | 11 | 封板(ban)膜 | 2張 |
| 6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶(ping) | 12 | 密(mi)封袋(dai) | 1個(ge) |
標本要(yao)求:
1.標本采(cai)集(ji)後盡(jin)早(zao)進(jin)行(xing)提(ti)取(qu),提(ti)取(qu)按相(xiang)關(guan)文獻進(jin)行(xing),提(ti)取(qu)後應(ying)盡快進行(xing)實(shi)驗(yan)。若(ruo)不(bu)能馬(ma)上進(jin)行(xing)試(shi)驗(yan),可(ke)將(jiang)標本放(fang)於(yu)-20℃保存,但(dan)應(ying)避(bi)免(mian)反(fan)復凍(dong)融(rong)
2.不(bu)能檢(jian)測含NaN3的(de)樣品,因(yin)NaN3抑制辣(la)根過氧化物(wu)酶(mei)的(HRP)活(huo)性。
操(cao)作步驟(zhou)
1.標準品的稀釋(shi):本試(shi)劑盒提(ti)供(gong)原倍標準品壹(yi)支(zhi),用戶可按(an)照下列圖表(biao)在(zai)小(xiao)試(shi)管(guan)中進(jin)行(xing)稀(xi)釋(shi)。
| 120ng/L | 5號(hao)標準品 | 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液(ye) |
| 60ng/L | 4號(hao)標準品 | 150μl的5號(hao)標準品加入150μl標準品稀釋液(ye) |
| 30ng/L | 3號(hao)標準品 | 150μl的4號(hao)標準品加入150μl標準品稀釋液(ye) |
| 15ng/L | 2號(hao)標準品 | 150μl的3號(hao)標準品加入150μl標準品稀釋液(ye) |
| 7.5ng/L | 1號(hao)標準品 | 150μl的2號(hao)標準品加入150μl標準品稀釋液(ye) |
2.加(jia)樣:分別設空(kong)白(bai)孔(空(kong)白(bai)對照孔不(bu)加(jia)樣品及(ji)酶(mei)標試(shi)劑,其余(yu)各(ge)步操(cao)作相(xiang)同(tong))、標準孔、待(dai)測樣品孔。在(zai)酶(mei)標包被板上標準品準確(que)加(jia)樣50μl,待(dai)測樣品孔中先加樣品稀釋液(ye)40μl,然(ran)後再(zai)加待(dai)測樣品10μl(樣品最(zui)終(zhong)稀(xi)釋(shi)度為(wei)5倍)。加(jia)樣將樣品加於(yu)酶(mei)標板孔底(di)部(bu),盡量(liang)不(bu)觸及(ji)孔壁,輕(qing)輕晃動(dong)混勻(yun)。
3.溫育:用封板(ban)膜封板(ban)後置(zhi)37℃溫(wen)育30分鐘。
4.配液(ye):將(jiang)30倍濃縮(suo)洗滌(di)液用蒸餾(liu)水(shui)30倍稀(xi)釋後備用
5.洗滌(di):小心(xin)揭(jie)掉封板(ban)膜,棄去液(ye)體(ti),甩(shuai)幹,每(mei)孔加(jia)滿洗(xi)滌(di)液,靜置(zhi)30秒後棄去,如(ru)此(ci)重(zhong)復5次,拍幹。
6.加(jia)酶(mei):每(mei)孔加(jia)入酶(mei)標試(shi)劑50μl,空(kong)白(bai)孔除(chu)外。
7.溫育:操(cao)作同(tong)3。
8.洗(xi)滌(di):操(cao)作同(tong)5。
9.顯色:每(mei)孔先加入顯色劑A50μl,再加(jia)入(ru)顯色劑B50μl,輕輕(qing)震(zhen)蕩(dang)混勻(yun),37℃避光顯色10分鐘.
10.終止(zhi):每(mei)孔加(jia)終止(zhi)液50μl,終止(zhi)反應(此(ci)時藍(lan)色(se)立轉(zhuan)黃色)。
11.測定:以(yi)空(kong)白(bai)孔調(tiao)零(ling),450nm波長(chang)依序測量(liang)各(ge)孔的(de)吸光度(OD值(zhi))。 測定應(ying)在加(jia)終(zhong)止(zhi)液後15分鐘以內(nei)進(jin)行(xing)。
操(cao)作程(cheng)序(xu)總(zong)結:

支(zhi)原體elisa檢(jian)測試(shi)劑盒計(ji)算(suan)
以標準物(wu)的(de)濃度為(wei)橫坐(zuo)標,OD值(zhi)為(wei)縱坐(zuo)標,在坐(zuo)標紙(zhi)上繪出(chu)標準曲(qu)線,根(gen)據(ju)樣品的OD值(zhi)由(you)標準曲(qu)線查(zha)出(chu)相(xiang)應(ying)的(de)濃度;再乘(cheng)以稀釋倍數(shu);或用標準物(wu)的(de)濃度與OD值(zhi)計(ji)算(suan)出(chu)標準曲(qu)線的(de)直線(xian)回(hui)歸(gui)方(fang)程式,將(jiang)樣品的OD值(zhi)代(dai)入方(fang)程式(shi),計(ji)算(suan)出(chu)樣品濃度,再乘(cheng)以稀釋倍數(shu),即(ji)為(wei)樣品的實際(ji)濃度。
註意(yi)事(shi)項
1.試(shi)劑盒從冷藏(zang)環(huan)境(jing)中取(qu)出(chu)應(ying)在(zai)室(shi)溫(wen)平衡(heng)15-30分鐘後方(fang)可使(shi)用,酶(mei)標包被板開(kai)封後如(ru)未(wei)用完(wan),板(ban)條(tiao)應(ying)裝入密(mi)封袋(dai)中保(bao)存。
2.濃洗滌(di)液可能會(hui)有(you)結(jie)晶(jing)析(xi)出(chu),稀(xi)釋(shi)時可(ke)在(zai)水(shui)浴中加(jia)溫助(zhu)溶(rong),洗滌(di)時不(bu)影(ying)響結(jie)果。
3.各(ge)步加樣均應(ying)使(shi)用加樣器(qi),並(bing)經(jing)常(chang)校對其準確(que)性(xing),以避(bi)免試(shi)驗(yan)誤(wu)差。壹(yi)次加樣時間(jian)最(zui)好(hao)控(kong)制在(zai)5分鐘內(nei),如(ru)標本數(shu)量(liang)多(duo),推(tui)薦使(shi)用排槍(qiang)加(jia)樣。
4.請(qing)每(mei)次測定的(de)同時做(zuo)標準曲(qu)線,最(zui)好(hao)做(zuo)復孔。如(ru)標本中待(dai)測物質含量(liang)過高(樣本OD值(zhi)大(da)於(yu)標準品孔第(di)壹(yi)孔的(de)OD值(zhi)),請(qing)先用樣品稀釋液(ye)稀(xi)釋壹(yi)定倍數(shu)(n倍)後再(zai)測定,計(ji)算(suan)時請(qing)最(zui)後乘(cheng)以總(zong)稀釋倍數(shu)(×n×5)。
5.封板(ban)膜只限(xian)壹(yi)次性使(shi)用,以避(bi)免(mian)交叉汙(wu)染(ran)。
6.底物(wu)請(qing)避光(guang)保(bao)存(cun)。
7.嚴(yan)格按(an)照說(shuo)明書的操(cao)作進(jin)行(xing),試(shi)驗(yan)結(jie)果判(pan)定必(bi)須以(yi)酶(mei)標儀讀(du)數為(wei)準.
8.所(suo)有(you)樣品,洗滌(di)液和各(ge)種廢棄物(wu)都(dou)應(ying)按傳染(ran)物處理。
9.本試(shi)劑不(bu)同(tong)批(pi)號(hao)組(zu)分不(bu)得(de)混用。
保存(cun)條(tiao)件(jian)及(ji)有(you)效期(qi)
1.試(shi)劑盒保(bao)存(cun):;2-8℃。
2.有(you)效期(qi):6個(ge)月(yue)
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