【概(gai)要描(miao)述】人(ren)子(zi)宮頸(jing)上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)公(gong)司(si)正(zheng)在出售的產(chan)品(pin)：WRL68人(ren)正(zheng)常(chang)肝(gan)細胞(bao)人(ren)肝(gan)星(xing)形細胞(bao)LX-2 (STR鑒定正(zheng)確(que))人(ren)肝(gan)癌細(xi)胞(bao)帶(dai)熒(ying)光酶HuH-7+LUC (STR鑒定正(zheng)確(que))小(xiao)鼠(shu)腦(nao)神經(jing)膠質(zhi)母(mu)細胞(bao)瘤(liu)瘤(liu)株(zhu)G422（種(zhong)屬鑒定）人(ren)彌漫(man)大(da)B淋巴(ba)瘤(liu)細胞(bao)HBL-1(STR鑒定正(zheng)確(que))人(ren)burkitt淋巴(ba)瘤(liu)細胞(bao)CA46(STR鑒定正(zheng)確(que))大(da)鼠回(hui)腸細(xi)胞(bao)IEC-18（種(zhong)屬(shu)鑒定）小鼠(shu)黑色瘤(liu)細胞(bao)B16-F0（種(zhong)屬(shu)鑒定）小鼠(shu)腎髓質細胞(bao)mIMCD-

本(ben)公(gong)司(si)所(suo)有產品(pin)僅(jin)供(gong)科(ke)學(xue)實驗(yan)，不(bu)做其他(ta)科(ke)學(xue)實驗(yan)外(wai)的使用(yong)！

人(ren)子(zi)宮頸(jing)上(shang)皮(pi)分(fen)離(li)自(zi)子(zi)宮頸(jing)組(zu)織；子(zi)宮頸(jing)位(wei)於(yu)子(zi)宮下部，近似(si)圓錐(zhui)體(ti)，上(shang)端(duan)與子(zi)宮體(ti)相(xiang)連，下端(duan)深入(ru)陰道。陰道頂端(duan)的穹(qiong)隆(long)又將子(zi)宮頸(jing)分(fen)為兩(liang)部分：宮頸(jing)突(tu)入陰道的部分稱宮(gong)頸(jing)陰道部，在陰道穹(qiong)隆(long)以上(shang)的部分稱宮(gong)頸(jing)陰道上(shang)部。宮頸(jing)的(de)中央(yang)為前後略扁(bian)的(de)長梭性管(guan)腔，其上(shang)端(duan)通(tong)過(guo)宮頸(jing)內口(kou)與子(zi)宮腔相(xiang)連，其下端(duan)通(tong)過(guo)宮頸(jing)外(wai)口(kou)開口(kou)於陰道。內外口(kou)之間(jian)即(ji)宮頸(jing)管(guan)。宮頸(jing)的(de)大(da)小與(yu)宮體(ti)比例(li)隨(sui)年齡及(ji)內分泌狀(zhuang)態等(deng)而(er)變化(hua)；宮(gong)頸(jing)壁由(you)黏(nian)膜(mo)、肌層(ceng)和(he)外膜(mo)組成(cheng)。子(zi)宮頸(jing)可(ke)有(you)多(duo)種疾(ji)病(bing)，包括胚胎發(fa)育異(yi)常(chang)、炎(yan)癥、瘤(liu)樣病(bing)變、良性腫瘤(liu)、惡(e)性腫瘤(liu)、損傷(shang)、宮頸(jing)性不孕、輔(fu)助生(sheng)育技(ji)術、宮(gong)頸(jing)與(yu)性、宮頸(jing)妊(ren)娠(shen)等(deng)許(xu)多(duo)問題(ti)，體(ti)外培(pei)養的子(zi)宮頸(jing)上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)對(dui)於(yu)研(yan)究(jiu)其生(sheng)理(li)功能(neng)、藥物作用(yong)以及各(ge)種致(zhi)病因(yin)素(su)作(zuo)用(yong)下的(de)病(bing)理生(sheng)理(li)改變具重要意(yi)義(yi)。
方(fang)法簡(jian)介：

公(gong)司(si)實驗(yan)室(shi)分離(li)的(de)人(ren)子(zi)宮頸(jing)上(shang)皮(pi)采(cai)用(yong)膠原(yuan)酶消化(hua)法，結合上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)專(zhuan)用(yong)培養基培(pei)養篩選(xuan)制(zhi)備(bei)而來(lai)，細胞(bao)總(zong)量(liang)約為5×10?cells/瓶。
質量(liang)檢測(ce)：

公(gong)司(si)實驗(yan)室(shi)分離(li)的(de)人(ren)子(zi)宮頸(jing)上(shang)皮(pi)經(jing)Cytokeratin-19免(mian)疫(yi)熒光(guang)鑒定，純(chun)度可(ke)達(da)90%以上(shang)，且不(bu)含有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體(ti)、細菌(jun)、酵(jiao)母(mu)和(he)真(zhen)菌等(deng)。

包被條件 鼠尾(wei)膠原(yuan)Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 含FBS、生(sheng)長添加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液(ye)頻(pin)率 每2-3天(tian)換(huan)液(ye)壹(yi)次

生(sheng)長特(te)性 貼壁

細胞(bao)形態 上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)樣(yang)

傳代(dai)特(te)性 可(ke)傳2-3代(dai)

消化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋白(bai)酶

培養條件(jian) 氣相(xiang)：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準備(bei)工作

1. 實驗(yan)器(qi)材準(zhun)備(bei)：準備無(wu)菌(jun)的培養皿(min)、培養瓶、移液(ye)管(guan)、離(li)心管(guan)、手術器(qi)械(xie)等(deng)，並(bing)進(jin)行(xing)高(gao)壓(ya)滅(mie)菌或其(qi)他(ta)合適(shi)的消毒(du)處理。

2. 試劑(ji)準備：配制(zhi)或購買合適(shi)的培養基、消化(hua)酶（如、膠(jiao)原酶等(deng)）、胎(tai)牛(niu)血(xue)清(qing)、雙(shuang)抗(kang)等(deng)試(shi)劑，確(que)保其(qi)無(wu)菌(jun)且在有效(xiao)期(qi)內。

3. 實驗(yan)動(dong)物或組(zu)織來(lai)源準備：根(gen)據實驗(yan)需(xu)求(qiu)，選(xuan)擇合適(shi)的動物(wu)並(bing)進(jin)行(xing)相(xiang)應的(de)麻醉(zui)或處死(si)，獲(huo)取(qu)所(suo)需組織；或從(cong)已(yi)有(you)的(de)組(zu)織樣(yang)本(ben)庫中(zhong)獲(huo)取(qu)組(zu)織。

取(qu)材與(yu)處理

1. 取(qu)材：在無(wu)菌(jun)條件下，迅(xun)速(su)取(qu)出(chu)目標組(zu)織，盡量(liang)減少(shao)對組(zu)織的(de)損(sun)傷(shang)，並(bing)去除多(duo)余的(de)脂(zhi)肪(fang)、結締(di)組(zu)織等(deng)非(fei)目的組(zu)織。

2. 清(qing)洗(xi)：將取(qu)出(chu)的組織用(yong)預冷(leng)的(de)無(wu)菌(jun)PBS沖洗(xi)數次，以去除血液(ye)和(he)雜(za)質。

3. 剪切(qie)：將(jiang)組(zu)織剪(jian)成(cheng)約1 - 2mm³的小(xiao)塊，以便(bian)後續(xu)消化(hua)。

細胞(bao)分(fen)離(li)

1. 消化(hua)：將(jiang)剪(jian)碎(sui)的(de)組織塊(kuai)放(fang)入(ru)含(han)有適(shi)量(liang)消化(hua)酶的離(li)心管(guan)中，在37℃恒(heng)溫(wen)搖(yao)床(chuang)或培(pei)養箱中(zhong)消化(hua)壹(yi)段(duan)時(shi)間(jian)。期(qi)間(jian)可(ke)輕(qing)輕(qing)搖晃(huang)離(li)心管(guan)，使消化(hua)更(geng)均勻(yun)。

2. 終止消化(hua)：當(dang)組(zu)織塊(kuai)大(da)部分被消化(hua)成(cheng)單(dan)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)或小(xiao)細(xi)胞(bao)團(tuan)時(shi)，加(jia)入(ru)含血清(qing)的培養基終止消化(hua)。

3. 過濾(lv)與離(li)心：用(yong)細胞(bao)篩(shai)過(guo)濾(lv)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)，去除未消化(hua)的(de)組(zu)織碎(sui)片(pian)，然(ran)後將濾(lv)液(ye)以適(shi)當(dang)的(de)轉(zhuan)速(su)離(li)心，收集細(xi)胞(bao)沈(chen)澱。

細胞(bao)觀(guan)察(cha)與(yu)檢測(ce)

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察(cha)：每天(tian)用(yong)倒置(zhi)顯(xian)微鏡觀察(cha)細(xi)胞(bao)的(de)形態、生(sheng)長狀態、密(mi)度等(deng)，記(ji)錄(lu)細胞(bao)的(de)變化(hua)情(qing)況，如(ru)發(fa)現細(xi)胞(bao)汙染或異(yi)常(chang)，及(ji)時(shi)采(cai)取(qu)相(xiang)應措(cuo)施。
2. 細胞(bao)計(ji)數(shu)與(yu)活力檢(jian)測(ce)：在需要時(shi)，可(ke)采(cai)用(yong)臺盼(pan)藍(lan)染色等(deng)方(fang)法對(dui)細(xi)胞(bao)進(jin)行(xing)計(ji)數(shu)和(he)活力檢(jian)測(ce)，以了(le)解(jie)細胞(bao)的(de)生(sheng)長情(qing)況和(he)健康狀態。

壹、取(qu)材與(yu)分(fen)離(li)

1. 快速(su)操作

- 組織取(qu)材後(hou)需(xu)立(li)即(ji)處理，避(bi)免(mian)長時(shi)間(jian)暴(bao)露(lu)於室溫(wen)或非(fei)營(ying)養環境(jing)。

- 使用(yong)無(wu)菌(jun) PBS 或生(sheng)理(li)鹽水(shui)沖洗(xi)組織，去除血液(ye)、雜(za)質。

2. 消化(hua)酶選(xuan)擇

- 根(gen)據組(zu)織類(lei)型(xing)選(xuan)擇消化(hua)酶，避(bi)免(mian)過(guo)度消化(hua)導(dao)致(zhi)細胞(bao)損(sun)傷(shang)。

- 消化(hua)時(shi)間(jian)需(xu)嚴格控制（通(tong)常(chang) 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可(ke)通(tong)過(guo)顯微鏡觀察(cha)細(xi)胞(bao)解(jie)離(li)狀(zhuang)態。

二、培(pei)養條件(jian)優(you)化(hua)

1. 培養基選(xuan)擇

- 使用(yong)含血(xue)清(qing)或特(te)定生(sheng)長因(yin)子(zi)的培(pei)養基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分細胞(bao)需(xu)添(tian)加(jia)胰(yi)島素(su)、EGF 等(deng)。

- 避(bi)免(mian)頻(pin)繁更(geng)換(huan)培養基品(pin)牌或批(pi)次，減(jian)少(shao)細胞(bao)適(shi)應壓(ya)力。

2. 貼壁與(yu)傳代(dai)

- 原代(dai)細(xi)胞(bao)貼壁能(neng)力較弱(ruo)，可(ke)能(neng)需(xu)要包被培養皿(min)（如膠原(yuan)蛋白(bai)、多(duo)聚(ju)賴氨(an)酸(suan)）。

- 傳代(dai)時(shi)密(mi)度(du)建議控制在 70%-80%，過度匯(hui)合會(hui)導(dao)致(zhi)接觸(chu)抑(yi)制(zhi)和(he)分化(hua)。

三、汙染控制

1. 無(wu)菌(jun)操作

- 全程(cheng)在超凈臺(tai)操(cao)作，使用(yong)壹次性耗材，避(bi)免(mian)交(jiao)叉(cha)汙染。

- 培養基中(zhong)可(ke)添(tian)加(jia)雙(shuang)抗(kang)，但(dan)長期(qi)使用(yong)可(ke)能(neng)影響細胞(bao)活(huo)性。

2. 支(zhi)原(yuan)體(ti)檢測(ce)

- 定期(qi)檢(jian)測(ce)支(zhi)原(yuan)體(ti)汙染（如 PCR 法），汙染後需及時(shi)丟(diu)棄(qi)細(xi)胞(bao)。

四、狀(zhuang)態監控

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察(cha)

- 每天(tian)檢查(zha)細胞(bao)形態、密(mi)度及(ji)培(pei)養基顏(yan)色，及時(shi)更(geng)換(huan)培養基（通(tong)常(chang)每 2-3 天(tian)換(huan)液(ye)壹(yi)次）。

- 異(yi)常(chang)形態（如(ru)細胞(bao)變圓、碎片增多(duo)）可(ke)能(neng)提(ti)示(shi)汙染或營(ying)養不足(zu)。

2. 傳代(dai)與(yu)凍(dong)存

- 原代(dai)細(xi)胞(bao)分(fen)裂(lie)次數(shu)有限(xian)（壹般 5-10 代(dai)），需(xu)及(ji)時(shi)凍(dong)存早(zao)期(qi)代(dai)次細(xi)胞(bao)。

- 凍(dong)存液(ye)建議使用(yong) DMSO+血清(qing)（或專(zhuan)用(yong)凍(dong)存培(pei)養基），梯(ti)度降溫後(hou)液(ye)氮(dan)保存(cun)。