【概(gai)要(yao)描述】人前列腺(xian)平滑(hua)肌細(xi)胞公(gong)司正(zheng)在出售(shou)的產(chan)品：SW620人結直(zhi)腸(chang)腺(xian)癌(ai)細(xi)胞人(ren)膠質母(mu)細胞瘤(liu)細(xi)胞A172 (STR鑒(jian)定正(zheng)確)人B淋巴細胞GM12878(STR鑒(jian)定正(zheng)確)小鼠骨(gu)髓瘤(liu)B淋(lin)巴細胞SP2/MIL-6（種(zhong)屬鑒定）人卵(luan)巢(chao)顆(ke)粒腫瘤(liu)細(xi)胞COV434(STR鑒(jian)定正(zheng)確)小鼠主(zhu)動(dong)脈內(nei)皮細(xi)胞MAEC（種(zhong)屬鑒定）大(da)鼠雪旺細(xi)胞RSC96（種(zhong)屬鑒定）犬腎細(xi)胞MDCK(NBL-2)（種(zhong)屬鑒定）人肝(gan)癌(ai)細(xi)胞QGY-7703 (S

本公司所有(you)產(chan)品僅供科(ke)學實驗(yan)，不(bu)做其(qi)他(ta)科(ke)學實驗(yan)外的(de)使(shi)用！

人前列腺(xian)平滑(hua)肌分(fen)離自(zi)前(qian)列腺(xian)組(zu)織；前(qian)列腺(xian)（Prostate）是雄性(xing)的(de)性(xing)腺(xian)器(qi)官(guan)；前列腺(xian)是不(bu)成(cheng)對(dui)的(de)實(shi)質性器(qi)宮，由(you)腺(xian)組(zu)織和肌組(zu)織構(gou)成(cheng)。前(qian)列腺(xian)如栗(li)子(zi)，底(di)朝上(shang)，與(yu)膀胱(guang)相(xiang)貼(tie)，尖朝(chao)下，抵(di)泌(mi)尿生殖(zhi)膈，前(qian)面貼(tie)恥(chi)骨(gu)聯(lian)合(he)，後(hou)面(mian)依直(zhi)腸(chang)。前(qian)列腺(xian)腺(xian)體的中(zhong)間(jian)有(you)尿道穿(chuan)過(guo)，扼守(shou)著(zhe)尿道上(shang)口，所以(yi)，前(qian)列腺(xian)有(you)問題時，排(pai)尿首先受(shou)影響(xiang)。前列腺(xian)是機(ji)體非常少有(you)的(de)，具(ju)有(you)內(nei)、外(wai)雙重分(fen)泌(mi)功能的(de)性分(fen)泌(mi)腺(xian)。作為(wei)外(wai)分(fen)泌(mi)腺(xian)，前列腺(xian)每天分(fen)泌(mi)前(qian)列腺(xian)液，是(shi)構(gou)成(cheng)精(jing)液(ye)主(zhu)要(yao)成(cheng)分(fen)；作(zuo)為(wei)內(nei)分(fen)泌(mi)腺(xian)，前列腺(xian)分泌(mi)的(de)激(ji)素稱為(wei)“前列腺(xian)素"。前(qian)列腺(xian)平滑(hua)肌細(xi)胞是(shi)前列腺(xian)的重(zhong)要(yao)結構組(zu)成(cheng)細(xi)胞之(zhi)壹(yi)，在機(ji)體的正常生理(li)過(guo)程中(zhong)發(fa)揮(hui)著(zhe)重要(yao)作用。前列腺(xian)平滑(hua)肌細(xi)胞原代(dai)分離培(pei)養3天後(hou)，可(ke)見細(xi)胞貼(tie)壁(bi)伸展，細胞形(xing)態(tai)大(da)小不(bu)壹(yi)，呈梭(suo)形(xing)、不(bu)規則(ze)形(xing)、三(san)角(jiao)形(xing)或扇形(xing)，核(he)卵圓形(xing)、居中(zhong)；2周後(hou)細(xi)胞匯(hui)合(he)，多(duo)數(shu)細(xi)胞伸展呈長(chang)梭(suo)形(xing)，胞漿豐富，有(you)分(fen)枝(zhi)狀突(tu)起，細胞平(ping)行(xing)排(pai)列成(cheng)單層或部(bu)分區(qu)域(yu)多(duo)層重疊生長(chang)，高低起伏；細胞密(mi)度低時，常交(jiao)織成(cheng)網(wang)狀；密度高時，則(ze)排(pai)列為(wei)旋(xuan)渦(wo)狀或柵欄狀。傳代(dai)後(hou)細(xi)胞生長(chang)較(jiao)快，4-6天即(ji)可匯合(he)，並保持(chi)上(shang)述形(xing)態(tai)學特(te)征(zheng)和生長(chang)特(te)點。
方法(fa)簡(jian)介(jie)：

公司實驗(yan)室分(fen)離的(de)人(ren)前(qian)列腺(xian)平滑(hua)肌采(cai)用yi蛋白(bai)酶-膠原酶(mei)聯合(he)消(xiao)化(hua)法(fa)結(jie)合(he)差(cha)速(su)貼(tie)壁(bi)法(fa)制(zhi)備而(er)來，細(xi)胞總(zong)量(liang)約(yue)為5×10?cells/瓶。
質量(liang)檢(jian)測(ce)：

公司實驗(yan)室分(fen)離的(de)人(ren)前(qian)列腺(xian)平滑(hua)肌經(jing)α-SMA免(mian)疫熒(ying)光(guang)鑒定(ding)，純度可達(da)90%以(yi)上(shang)，且不(bu)含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌(jun)、酵(jiao)母(mu)和真(zhen)菌(jun)等。

培養基(ji) 含(han)FBS、生長(chang)添(tian)加劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液頻率(lv) 每2-3天換(huan)液壹(yi)次

生長(chang)特(te)性(xing) 貼(tie)壁(bi)

細胞形(xing)態(tai) 成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞樣

傳代(dai)特(te)性(xing) 可傳5代(dai)左右(you)；3代(dai)以(yi)內(nei)狀態

消(xiao)化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋白(bai)酶

培養條(tiao)件(jian) 氣相(xiang)：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準備工(gong)作

1. 實驗(yan)器(qi)材準(zhun)備：準(zhun)備無菌(jun)的培養皿(min)、培養瓶、移液(ye)管、離心(xin)管(guan)、手術器(qi)械(xie)等，並進行(xing)高壓(ya)滅(mie)菌(jun)或其他(ta)合(he)適(shi)的(de)消(xiao)毒(du)處理。

2. 試劑準備：配(pei)制或購買合(he)適(shi)的(de)培(pei)養基(ji)、消(xiao)化(hua)酶(mei)（如、膠原酶(mei)等）、胎牛血(xue)清、雙(shuang)抗等(deng)試劑，確保其(qi)無菌(jun)且在有(you)效(xiao)期內(nei)。

3. 實驗(yan)動(dong)物(wu)或組(zu)織來(lai)源準(zhun)備：根據實(shi)驗(yan)需求(qiu)，選擇合(he)適(shi)的(de)動(dong)物(wu)並進行(xing)相(xiang)應(ying)的(de)麻醉(zui)或處死，獲取所需(xu)組(zu)織；或從(cong)已有(you)的(de)組(zu)織樣本庫(ku)中(zhong)獲取組(zu)織。

取材與(yu)處理

1. 取材：在無菌(jun)條件(jian)下，迅(xun)速(su)取(qu)出目標組(zu)織，盡(jin)量(liang)減少對組(zu)織的(de)損(sun)傷(shang)，並去(qu)除多余的脂肪、結(jie)締(di)組(zu)織等(deng)非目的(de)組(zu)織。

2. 清洗(xi)：將取(qu)出的(de)組(zu)織用預冷的無菌(jun)PBS沖(chong)洗(xi)數次(ci)，以(yi)去(qu)除血液和雜(za)質。

3. 剪切(qie)：將(jiang)組(zu)織剪(jian)成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的小塊(kuai)，以(yi)便後(hou)續(xu)消(xiao)化(hua)。

細胞分(fen)離

1. 消(xiao)化(hua)：將(jiang)剪(jian)碎(sui)的(de)組(zu)織塊(kuai)放(fang)入含(han)有(you)適(shi)量(liang)消(xiao)化(hua)酶(mei)的(de)離心(xin)管(guan)中(zhong)，在37℃恒溫(wen)搖(yao)床(chuang)或培養箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)壹(yi)段(duan)時間(jian)。期(qi)間(jian)可(ke)輕輕搖晃離心(xin)管(guan)，使(shi)消(xiao)化(hua)更(geng)均(jun)勻(yun)。

2. 終止消(xiao)化(hua)：當(dang)組(zu)織塊(kuai)大(da)部(bu)分被(bei)消(xiao)化(hua)成(cheng)單細(xi)胞懸液或小細(xi)胞團時，加(jia)入含(han)血清(qing)的培養基(ji)終(zhong)止消(xiao)化(hua)。

3. 過(guo)濾與(yu)離心(xin)：用細胞篩過(guo)濾細(xi)胞懸液，去(qu)除未(wei)消(xiao)化(hua)的(de)組(zu)織碎(sui)片(pian)，然後(hou)將(jiang)濾液(ye)以(yi)適(shi)當(dang)的(de)轉速(su)離心(xin)，收(shou)集(ji)細胞沈(chen)澱(dian)。

細胞觀(guan)察與(yu)檢(jian)測(ce)

1. 日常觀(guan)察：每天用倒置顯微鏡觀(guan)察細胞的(de)形(xing)態(tai)、生長(chang)狀態、密(mi)度等，記錄細胞的(de)變化(hua)情(qing)況，如發(fa)現(xian)細胞汙(wu)染(ran)或異常，及(ji)時采(cai)取(qu)相(xiang)應(ying)措(cuo)施。
2. 細(xi)胞計(ji)數與(yu)活(huo)力檢(jian)測(ce)：在(zai)需(xu)要(yao)時，可(ke)采(cai)用臺(tai)盼(pan)藍(lan)染(ran)色等(deng)方法(fa)對(dui)細(xi)胞進行(xing)計(ji)數和活(huo)力檢(jian)測(ce)，以(yi)了(le)解細胞的(de)生長(chang)情(qing)況和健康狀態。

壹(yi)、取材與(yu)分離

1. 快速(su)操(cao)作(zuo)

- 組(zu)織取(qu)材(cai)後(hou)需(xu)立(li)即處理，避(bi)免(mian)長(chang)時間(jian)暴露(lu)於(yu)室(shi)溫(wen)或非營養環(huan)境(jing)。

- 使(shi)用無菌(jun) PBS 或生理(li)鹽(yan)水(shui)沖(chong)洗(xi)組(zu)織，去(qu)除血液、雜(za)質。

2. 消(xiao)化(hua)酶(mei)選(xuan)擇

- 根據組(zu)織類型選(xuan)擇消(xiao)化(hua)酶(mei)，避(bi)免(mian)過(guo)度消(xiao)化(hua)導(dao)致(zhi)細(xi)胞損(sun)傷(shang)。

- 消(xiao)化(hua)時間(jian)需(xu)嚴(yan)格控制(zhi)（通(tong)常 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可(ke)通(tong)過(guo)顯微鏡觀(guan)察細胞解(jie)離狀態。

二、培養條(tiao)件(jian)優化(hua)

1. 培養基(ji)選(xuan)擇

- 使(shi)用含(han)血清(qing)或特(te)定(ding)生長(chang)因(yin)子的培(pei)養基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分細(xi)胞需(xu)添加(jia)胰島(dao)素、EGF 等。

- 避(bi)免(mian)頻繁(fan)更(geng)換(huan)培(pei)養基(ji)品牌或批(pi)次(ci)，減少細胞適(shi)應(ying)壓(ya)力(li)。

2. 貼(tie)壁(bi)與(yu)傳代(dai)

- 原代(dai)細胞貼(tie)壁(bi)能(neng)力(li)較(jiao)弱，可能需要(yao)包被(bei)培養皿(min)（如膠原蛋(dan)白(bai)、多聚(ju)賴氨(an)酸(suan)）。

- 傳代(dai)時密(mi)度建(jian)議控(kong)制在(zai) 70%-80%，過(guo)度匯合(he)會(hui)導(dao)致(zhi)接(jie)觸抑制(zhi)和分(fen)化(hua)。

三(san)、汙(wu)染(ran)控(kong)制(zhi)

1. 無菌(jun)操作

- 全程(cheng)在(zai)超(chao)凈(jing)臺(tai)操(cao)作，使(shi)用壹(yi)次性耗材，避(bi)免(mian)交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran)。

- 培養基(ji)中(zhong)可添加(jia)雙抗，但長(chang)期(qi)使(shi)用可能影響(xiang)細胞活(huo)性。

2. 支原體檢(jian)測(ce)

- 定期檢(jian)測(ce)支原體汙(wu)染(ran)（如 PCR 法(fa)），汙(wu)染(ran)後(hou)需(xu)及(ji)時丟(diu)棄細胞。

四、狀態監(jian)控(kong)

1. 日常觀(guan)察

- 每天檢(jian)查細胞形(xing)態(tai)、密度及(ji)培養基(ji)顏色，及(ji)時更(geng)換(huan)培(pei)養基(ji)（通(tong)常每(mei) 2-3 天換(huan)液壹(yi)次）。

- 異常形(xing)態(tai)（如細(xi)胞變(bian)圓、碎(sui)片(pian)增(zeng)多(duo)）可(ke)能提示汙(wu)染(ran)或營養不(bu)足。

2. 傳代(dai)與(yu)凍存(cun)

- 原代(dai)細胞分(fen)裂(lie)次(ci)數(shu)有(you)限(xian)（壹(yi)般 5-10 代(dai)），需及(ji)時凍存(cun)早(zao)期(qi)代(dai)次細(xi)胞。

- 凍存(cun)液(ye)建(jian)議使(shi)用 DMSO+血清（或專用凍存(cun)培(pei)養基(ji)），梯度降溫(wen)後(hou)液(ye)氮保存(cun)。