【概(gai)要描述】人淋巴(ba)管內(nei)皮(pi)細(xi)胞公(gong)司正(zheng)在(zai)出(chu)售(shou)的產(chan)品：T2 (174xcem.T2 )人淋巴(ba)母細(xi)胞小鼠(shu)黑(hei)色瘤(liu)帶(dai)綠(lv)色(se)熒(ying)光(guang)B16+GFP（種(zhong)屬(shu)鑒(jian)定(ding)）人卵(luan)巢(chao)癌腺癌細(xi)胞 NIH:OVCAR-8(STR鑒(jian)定(ding)正確(que))大(da)鼠(shu)腦I型(xing)星(xing)形膠(jiao)質細(xi)胞 CTX-TNA2（種(zhong)屬(shu)鑒(jian)定(ding)）昆蟲卵(luan)巢(chao)細(xi)胞Sf9（種(zhong)屬(shu)鑒(jian)定(ding)）小鼠(shu)乳(ru)腺癌細(xi)胞 E0771（種(zhong)屬(shu)鑒(jian)定(ding)）人食(shi)管(guan)鱗狀細(xi)胞癌COLO-680N(STR鑒(jian)定(ding)正確(que))大(da)鼠(shu)腎(shen)上腺嗜(shi)鉻細(xi)胞瘤(liu)細(xi)胞(低分化)PC-12

本(ben)公(gong)司所(suo)有(you)產(chan)品僅供科(ke)學(xue)實(shi)驗(yan)，不(bu)做(zuo)其他(ta)科(ke)學(xue)實(shi)驗(yan)外的使(shi)用！

人淋巴(ba)管內(nei)皮(pi)分離自淋巴(ba)管組織；淋巴(ba)管由(you)毛(mao)細(xi)淋巴(ba)管匯(hui)合(he)而(er)成。其形態(tai)結(jie)構(gou)與(yu)靜脈相似，但(dan)管徑較細(xi)，管(guan)壁(bi)較薄(bo)，瓣(ban)膜較多(duo)且發(fa)達(da)，外形呈(cheng)串(chuan)珠(zhu)狀。淋巴(ba)管根(gen)據(ju)其位置分為淺、深(shen)二(er)種(zhong)。它(ta)們(men)管位於皮下(xia)，常與(yu)淺(qian)靜脈伴(ban)行，收(shou)集(ji)皮(pi)膚和皮(pi)下(xia)組織的淋巴(ba)。深(shen)淋巴(ba)管與(yu)深(shen)部血管伴(ban)行，收(shou)集(ji)肌(ji)肉(rou)和內(nei)臟(zang)的淋巴(ba)。淺、深(shen)淋巴(ba)管之間有(you)廣泛(fan)的交通(tong)支。淋巴(ba)管在(zai)向(xiang)心(xin)行程(cheng)中(zhong)，通(tong)常經(jing)過(guo)壹個(ge)或多(duo)個(ge)淋巴(ba)結(jie)，從(cong)而(er)把淋巴(ba)細(xi)胞帶入(ru)淋巴(ba)液。主(zhu)要(yao)功能(neng)是濾過淋巴(ba)液，產(chan)生淋巴(ba)細(xi)胞和漿(jiang)細(xi)胞，參與(yu)機(ji)體的免疫反(fan)應(ying)。當(dang)局(ju)部感染(ran)時，細(xi)菌、病毒或(huo)癌(ai)細(xi)胞等可(ke)沿淋巴(ba)管侵(qin)入(ru)，引起(qi)局(ju)部淋巴(ba)結(jie)腫(zhong)大。如該(gai)淋巴(ba)結(jie)不(bu)能(neng)阻止(zhi)和(he)消(xiao)滅它(ta)們(men)，則病變可(ke)沿淋巴(ba)管的流註方向擴散和轉移。淋巴(ba)管內(nei)皮(pi)細(xi)胞（LEC）是襯覆於淋巴(ba)管內(nei)表(biao)面的壹種(zhong)單(dan)層扁平上皮，是構(gou)成(cheng)淋巴(ba)管壁(bi)的主(zhu)要(yao)結(jie)構(gou)，參(can)與(yu)維持體液平衡(heng)，調節(jie)淋巴(ba)細(xi)胞再循(xun)環(huan)和(he)機(ji)體的免疫反(fan)應(ying)和(he)組織液及蛋白(bai)質的運(yun)輸(shu)，在疾病過程(cheng)中(zhong)也起(qi)著重要作用(yong)。近(jin)年(nian)研(yan)究(jiu)表明，LEC還(hai)在(zai)傷(shang)口愈合(he)、淋巴(ba)管水(shui)腫(zhong)和炎(yan)癥擴散等病理過(guo)程中(zhong)起(qi)重(zhong)要(yao)作(zuo)用，而(er)且與(yu)腫(zhong)瘤(liu)轉移密(mi)切相關(guan)。淋巴(ba)管內(nei)皮(pi)細(xi)胞主(zhu)要(yao)功能(neng)：①調節(jie)體液、蛋白(bai)和(he)組織壓(ya)力(li)平(ping)衡(heng)；②為免疫系(xi)統(tong)的重要組成部分。淋巴(ba)管內(nei)皮(pi)細(xi)胞與主(zhu)要(yao)病生理(li)變化：①囊(nang)腫(zhong)型淋巴(ba)管瘤(liu)；②淋巴(ba)管炎(yan)；③淋巴(ba)結(jie)核(he)。
方法(fa)簡介：

公(gong)司實(shi)驗(yan)室分離的人淋巴(ba)管內(nei)皮(pi)采用中(zhong)性蛋白(bai)消(xiao)化法(fa)結(jie)合(he)內(nei)皮(pi)細(xi)胞專用(yong)培(pei)養(yang)基培養篩(shai)選(xuan)制備而(er)來，細(xi)胞總量(liang)約為5×10?cells/瓶(ping)。
質量檢測：

公(gong)司實(shi)驗(yan)室分離的人淋巴(ba)管內(nei)皮(pi)經VEGFR3免(mian)疫熒(ying)光(guang)鑒(jian)定(ding)，純(chun)度(du)可(ke)達90%以上，且不含有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xi)菌、酵母和真(zhen)菌等。

包(bao)被條件(jian) PLL（0.1mg/ml），明膠(jiao)（0.1%）

培(pei)養(yang)基 含(han)FBS、生(sheng)長(chang)添加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液頻率 每2-3天(tian)換液壹次(ci)

生(sheng)長(chang)特性 貼壁

細(xi)胞形態(tai) 內(nei)皮(pi)細(xi)胞樣

傳(chuan)代特性 可(ke)傳(chuan)2-3代

消(xiao)化液 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶

培(pei)養(yang)條件(jian) 氣(qi)相：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工作(zuo)

1. 實(shi)驗(yan)器材(cai)準(zhun)備(bei)：準(zhun)備(bei)無(wu)菌的培養皿、培養瓶(ping)、移液管、離心管、手術(shu)器械(xie)等，並(bing)進(jin)行高(gao)壓(ya)滅菌或其他(ta)合適(shi)的消(xiao)毒處理(li)。

2. 試劑(ji)準(zhun)備(bei)：配(pei)制或購買合(he)適(shi)的培養基、消(xiao)化酶（如、膠(jiao)原酶等）、胎(tai)牛(niu)血清(qing)、雙(shuang)抗等試劑(ji)，確(que)保(bao)其無(wu)菌且在(zai)有(you)效期內(nei)。

3. 實(shi)驗(yan)動物或組織來源準(zhun)備(bei)：根(gen)據(ju)實(shi)驗(yan)需求(qiu)，選擇(ze)合適(shi)的動物並(bing)進(jin)行相應(ying)的麻醉(zui)或(huo)處死，獲取(qu)所(suo)需組織；或(huo)從(cong)已(yi)有(you)的組織樣(yang)本(ben)庫(ku)中(zhong)獲取(qu)組織。

取(qu)材(cai)與處理(li)

1. 取(qu)材(cai)：在無(wu)菌條件(jian)下(xia)，迅速(su)取出目(mu)標組織，盡(jin)量減(jian)少對(dui)組織的損傷，並(bing)去(qu)除(chu)多(duo)余(yu)的脂(zhi)肪(fang)、結(jie)締組織等(deng)非(fei)目(mu)的組織。

2. 清(qing)洗(xi)：將(jiang)取(qu)出的組織用(yong)預(yu)冷(leng)的無(wu)菌PBS沖洗(xi)數次(ci)，以去(qu)除血液和雜(za)質。

3. 剪切(qie)：將(jiang)組織剪成(cheng)約1 - 2mm³的小塊(kuai)，以(yi)便後續(xu)消(xiao)化。

細(xi)胞分離

1. 消(xiao)化：將(jiang)剪碎(sui)的組織塊(kuai)放(fang)入含有(you)適(shi)量消(xiao)化酶的離心管中(zhong)，在37℃恒溫(wen)搖(yao)床或培(pei)養(yang)箱中(zhong)消(xiao)化壹段時間(jian)。期間(jian)可(ke)輕輕搖(yao)晃(huang)離心管，使(shi)消(xiao)化更(geng)均(jun)勻(yun)。

2. 終(zhong)止(zhi)消(xiao)化：當(dang)組織塊(kuai)大(da)部分被消(xiao)化成單(dan)細(xi)胞懸液或小細(xi)胞團時(shi)，加(jia)入(ru)含血清(qing)的培養基終止消(xiao)化。

3. 過(guo)濾(lv)與離心：用細(xi)胞篩(shai)過(guo)濾(lv)細(xi)胞懸液，去除未消(xiao)化的組織碎(sui)片(pian)，然後(hou)將(jiang)濾(lv)液以適(shi)當(dang)的轉速(su)離心，收集(ji)細(xi)胞沈澱。

細(xi)胞觀察與檢測

1. 日常觀(guan)察：每天用倒(dao)置(zhi)顯微鏡(jing)觀察細(xi)胞的形態(tai)、生(sheng)長(chang)狀態、密(mi)度(du)等(deng)，記錄(lu)細(xi)胞的變化情況(kuang)，如(ru)發(fa)現(xian)細(xi)胞汙染(ran)或異常，及時采取相應(ying)措施(shi)。
2. 細(xi)胞計數(shu)與(yu)活力(li)檢測：在需要(yao)時，可(ke)采用臺(tai)盼(pan)藍(lan)染(ran)色等方法(fa)對細(xi)胞進(jin)行計(ji)數(shu)和活力(li)檢測，以了(le)解細(xi)胞的生長(chang)情況(kuang)和(he)健(jian)康狀態。

壹、取材與(yu)分離

1. 快(kuai)速(su)操作

- 組織取(qu)材(cai)後需立(li)即處理(li)，避(bi)免(mian)長(chang)時間(jian)暴露於室溫(wen)或非(fei)營(ying)養(yang)環(huan)境。

- 使(shi)用無(wu)菌 PBS 或生(sheng)理(li)鹽水沖(chong)洗(xi)組織，去(qu)除(chu)血液、雜(za)質。

2. 消(xiao)化酶選擇(ze)

- 根(gen)據(ju)組織類(lei)型(xing)選擇消(xiao)化酶，避(bi)免(mian)過度(du)消(xiao)化導致(zhi)細(xi)胞損傷。

- 消(xiao)化時間(jian)需嚴格(ge)控(kong)制（通(tong)常 10-30 分鐘(zhong)），可通(tong)過(guo)顯微(wei)鏡(jing)觀察細(xi)胞解離狀態。

二(er)、培養條件(jian)優(you)化

1. 培(pei)養(yang)基選擇

- 使(shi)用含(han)血清(qing)或(huo)特定生長(chang)因子的培養基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細(xi)胞需添(tian)加胰(yi)島素、EGF 等。

- 避(bi)免(mian)頻繁更(geng)換培養(yang)基品牌(pai)或批(pi)次(ci)，減(jian)少細(xi)胞適(shi)應(ying)壓(ya)力(li)。

2. 貼壁與(yu)傳代

- 原代細(xi)胞貼壁能(neng)力(li)較弱(ruo)，可能(neng)需要(yao)包(bao)被培(pei)養(yang)皿（如膠(jiao)原蛋白(bai)、多(duo)聚(ju)賴氨酸(suan)）。

- 傳(chuan)代時密(mi)度(du)建(jian)議控制在 70%-80%，過(guo)度(du)匯(hui)合會導致(zhi)接觸抑制和分化。

三、汙染(ran)控制

1. 無(wu)菌操作(zuo)

- 全程(cheng)在(zai)超凈臺(tai)操作(zuo)，使(shi)用壹次(ci)性耗材(cai)，避(bi)免(mian)交叉(cha)汙染(ran)。

- 培(pei)養(yang)基中(zhong)可添加(jia)雙抗(kang)，但(dan)長(chang)期使(shi)用可(ke)能(neng)影響(xiang)細(xi)胞活性。

2. 支原體檢測

- 定(ding)期檢測支原體汙染(ran)（如 PCR 法(fa)），汙染(ran)後需及時丟(diu)棄(qi)細(xi)胞。

四(si)、狀態監控(kong)

1. 日常觀(guan)察

- 每天檢查細(xi)胞形態(tai)、密(mi)度(du)及培養(yang)基顏色，及時更(geng)換培養(yang)基（通(tong)常每 2-3 天換液壹次(ci)）。

- 異常形態(tai)（如(ru)細(xi)胞變圓(yuan)、碎(sui)片(pian)增多(duo)）可能(neng)提示汙染(ran)或營(ying)養(yang)不(bu)足(zu)。

2. 傳(chuan)代與凍(dong)存(cun)

- 原代細(xi)胞分裂次(ci)數有(you)限（壹般(ban) 5-10 代），需及時凍(dong)存(cun)早(zao)期代次(ci)細(xi)胞。

- 凍(dong)存(cun)液建議使(shi)用 DMSO+血清(qing)（或(huo)專用凍(dong)存(cun)培養基），梯度(du)降溫(wen)後液氮保(bao)存(cun)。