【概要(yao)描(miao)述(shu)】人腦成(cheng)纖維細(xi)胞(bao)公司正(zheng)在(zai)出售(shou)的(de)產品(pin)：ZF4斑(ban)馬魚細(xi)胞(bao)bEnd.3 [BEND3] (小鼠腦微(wei)血管(guan)內皮(pi)細(xi)胞(bao)) (種(zhong)屬(shu)鑒(jian)定正(zheng)確(que))GC-1 spg (小鼠精原細(xi)胞(bao)) (種(zhong)屬(shu)鑒(jian)定正(zheng)確(que))B16-F0 (小鼠黑色(se)瘤(liu)細(xi)胞(bao)) (種(zhong)屬(shu)鑒(jian)定正(zheng)確(que))B82 (小鼠腫(zhong)瘤細(xi)胞(bao)系) (種(zhong)屬(shu)鑒(jian)定正(zheng)確(que))HL-1 (小鼠心肌細(xi)胞(bao)) (種(zhong)屬(shu)鑒(jian)定正(zheng)確(que))15P-1 (小鼠睪丸(wan)上皮(pi)細(xi)胞(bao)) (種(zhong)屬(shu)鑒(jian)定正(zheng)確(que))HC11 (小鼠乳腺(xian)上皮(pi)細(xi)胞(bao)) (種(zhong)屬(shu)

本公司所(suo)有(you)產品(pin)僅供科學(xue)實驗，不(bu)做(zuo)其他科學(xue)實驗外(wai)的(de)使(shi)用！

人(ren)腦成(cheng)纖維分(fen)離(li)自(zi)腦組(zu)織(zhi)；大(da)腦(nao)分(fen)左右(you)兩個半(ban)球，大(da)腦(nao)皮(pi)質(zhi)（灰質(zhi)）覆(fu)蓋(gai)著(zhe)每(mei)個大(da)腦(nao)半球的(de)大(da)部(bu)分(fen)，它是(shi)神(shen)經元胞(bao)體集(ji)中(zhong)的(de)地方。內部(bu)則(ze)是(shi)由(you)神(shen)經纖維或髓(sui)鞘(qiao)構(gou)成(cheng)的(de)白質(zhi)。每(mei)壹個半(ban)球都(dou)有(you)三個面(mian)，即(ji)外(wai)側面(mian)（約占(zhan)整個皮(pi)質(zhi)面(mian)積(ji)的(de)1/3）、內(nei)側面(mian)和底(di)面(mian)（占(zhan)2/3的(de)面(mian)積(ji)）；半球表面(mian)有(you)很多(duo)深(shen)淺不等(deng)的(de)溝或裂，溝或裂之間(jian)的(de)隆起叫回，它們(men)大(da)大(da)增(zeng)加了大(da)腦(nao)的(de)表面(mian)積(ji)；大(da)腦(nao)外(wai)側面(mian)重(zhong)要(yao)的(de)溝、裂有(you)大(da)腦(nao)外(wai)側裂、頂枕(zhen)裂和中(zhong)央溝。由(you)於(yu)三溝裂之界隔(ge)，使(shi)大(da)腦(nao)皮(pi)質(zhi)組分(fen)為(wei)額葉、頂葉、顳(nie)葉、枕葉四(si)大(da)部(bu)分(fen)。成纖維細(xi)胞(bao)（Fibroblast）是疏(shu)松(song)結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)的(de)主要(yao)細(xi)胞(bao)成分(fen)，由(you)胚(pei)胎時(shi)期(qi)的(de)間(jian)充(chong)質(zhi)細(xi)胞(bao)分(fen)化而來(lai)；成纖維細(xi)胞(bao)較大(da)，輪(lun)廓清(qing)楚，多為(wei)突(tu)起的(de)紡錘(chui)形(xing)或星形(xing)的(de)扁平狀(zhuang)結(jie)構，其細(xi)胞(bao)核呈(cheng)規(gui)則(ze)的(de)卵圓(yuan)形(xing)，核仁(ren)大(da)而明(ming)顯(xian)。成(cheng)纖維細(xi)胞(bao)功能(neng)活(huo)動(dong)旺(wang)盛(sheng)，細(xi)胞(bao)質嗜(shi)弱堿(jian)性(xing)，具明(ming)顯(xian)的(de)蛋白(bai)質(zhi)合(he)成(cheng)和分(fen)泌(mi)活(huo)動(dong)，在(zai)壹定條件下，它可以實(shi)現跟(gen)纖維細(xi)胞(bao)的(de)互相(xiang)轉(zhuan)化(hua)；成纖維細(xi)胞(bao)對不(bu)同(tong)程(cheng)度(du)的(de)細(xi)胞(bao)變(bian)性(xing)、壞(huai)死和組(zu)織(zhi)缺損的(de)修(xiu)復有(you)著(zhe)十分(fen)重要(yao)的(de)作用(yong)。剛(gang)分(fen)離(li)的(de)腦成(cheng)纖維細(xi)胞(bao)呈圓(yuan)形(xing)、折光(guang)性(xing)良好(hao)，懸浮(fu)於培養(yang)基中(zhong)。30min細(xi)胞(bao)貼壁，其中(zhong)部分(fen)開始伸(shen)出(chu)偽足，表現為(wei)小的(de)突(tu)起；6h後細(xi)胞(bao)基本貼壁wan全(quan)，伸(shen)展成(cheng)梭形(xing)，胞(bao)核清(qing)晰，分(fen)布(bu)較均(jun)勻(yun)，散在(zai)生長，不聚集成(cheng)團；細(xi)胞(bao)生長迅速(su)，5-7天(tian)即(ji)呈融合狀態(tai)，細(xi)胞(bao)排列(lie)緊(jin)密，有(you)的(de)交叉(cha)重(zhong)疊(die)生長，平坦(tan)、胞(bao)體較(jiao)大(da)，細(xi)胞(bao)質透(tou)明(ming)，細(xi)胞(bao)核較(jiao)大(da)，呈(cheng)橢圓形(xing)，顏(yan)色(se)淡(dan)。細(xi)胞(bao)融合(he)，並(bing)彼此連接成網(wang)狀；細(xi)胞(bao)呈突(tu)起的(de)紡錘(chui)形(xing)或星形(xing)的(de)扁平分(fen)布(bu)。
方法簡(jian)介：

公司實(shi)驗(yan)室(shi)分(fen)離(li)的(de)人腦(nao)成(cheng)纖維采用(yong)yi蛋白(bai)酶(mei)-膠(jiao)原酶(mei)混(hun)合(he)消(xiao)化法結合(he)差速(su)貼壁法制備(bei)而來(lai)，細(xi)胞(bao)總量約為(wei)5×10?cells/瓶。
質(zhi)量檢(jian)測：

公司實(shi)驗(yan)室(shi)分(fen)離(li)的(de)人腦(nao)成(cheng)纖維經Vimentin免疫(yi)熒(ying)光鑒(jian)定，純(chun)度(du)可達(da)90%以上，且(qie)不含有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti)、細(xi)菌(jun)、酵(jiao)母和真(zhen)菌(jun)等(deng)。

培養(yang)基 含FBS、生長添加劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液頻率 每(mei)2-3天(tian)換液壹次

生長特性(xing) 貼壁

細(xi)胞(bao)形(xing)態 成(cheng)纖維細(xi)胞(bao)樣

傳(chuan)代(dai)特性(xing) 可傳(chuan)5代(dai)左右(you)；3代(dai)以(yi)內(nei)狀(zhuang)態(tai)

消(xiao)化液 0.25%yi蛋白(bai)酶(mei)

培養(yang)條件 氣(qi)相(xiang)：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備工作(zuo)

1. 實(shi)驗器(qi)材準(zhun)備：準(zhun)備無(wu)菌(jun)的(de)培養(yang)皿(min)、培養(yang)瓶、移(yi)液管(guan)、離(li)心(xin)管(guan)、手術器械等(deng)，並進(jin)行(xing)高(gao)壓(ya)滅菌(jun)或其他合適(shi)的(de)消毒(du)處理。

2. 試(shi)劑準(zhun)備：配(pei)制或購買(mai)合適(shi)的(de)培養(yang)基、消(xiao)化(hua)酶(mei)（如、膠(jiao)原酶(mei)等(deng)）、胎牛(niu)血清(qing)、雙(shuang)抗(kang)等(deng)試劑(ji)，確(que)保(bao)其無(wu)菌(jun)且(qie)在有(you)效期(qi)內。

3. 實(shi)驗動(dong)物(wu)或組織(zhi)來(lai)源準(zhun)備：根據(ju)實(shi)驗需求(qiu)，選擇合適(shi)的(de)動(dong)物(wu)並進行(xing)相應的(de)麻醉或處死，獲取(qu)所需(xu)組織(zhi)；或從(cong)已(yi)有(you)的(de)組織(zhi)樣本庫(ku)中(zhong)獲取(qu)組織(zhi)。

取(qu)材與處理

1. 取(qu)材：在無菌(jun)條件下，迅(xun)速(su)取(qu)出目(mu)標組織(zhi)，盡(jin)量減(jian)少(shao)對組(zu)織(zhi)的(de)損傷(shang)，並去(qu)除(chu)多(duo)余(yu)的(de)脂肪、結締組織(zhi)等(deng)非目(mu)的(de)組織(zhi)。

2. 清(qing)洗(xi)：將取(qu)出的(de)組織(zhi)用預冷的(de)無菌(jun)PBS沖洗(xi)數次(ci)，以(yi)去(qu)除(chu)血液和雜(za)質(zhi)。

3. 剪(jian)切：將組織(zhi)剪成約1 - 2mm³的(de)小塊(kuai)，以(yi)便後(hou)續(xu)消(xiao)化。

細(xi)胞(bao)分(fen)離(li)

1. 消(xiao)化：將剪碎的(de)組織(zhi)塊放(fang)入含有(you)適(shi)量消(xiao)化(hua)酶的(de)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，在37℃恒溫(wen)搖(yao)床或培養(yang)箱中(zhong)消化壹段時(shi)間(jian)。期(qi)間(jian)可輕輕(qing)搖晃(huang)離(li)心(xin)管(guan)，使(shi)消化(hua)更均勻(yun)。

2. 終(zhong)止消化：當組(zu)織(zhi)塊大(da)部(bu)分(fen)被(bei)消(xiao)化成(cheng)單(dan)細(xi)胞(bao)懸液或小細(xi)胞(bao)團時(shi)，加入含血清(qing)的(de)培養(yang)基終(zhong)止消化。

3. 過(guo)濾(lv)與離(li)心(xin)：用細(xi)胞(bao)篩過(guo)濾(lv)細(xi)胞(bao)懸液，去(qu)除(chu)未(wei)消(xiao)化(hua)的(de)組織(zhi)碎片(pian)，然(ran)後將濾(lv)液以適(shi)當的(de)轉(zhuan)速(su)離(li)心(xin)，收(shou)集細(xi)胞(bao)沈(chen)澱。

細(xi)胞(bao)觀察與(yu)檢(jian)測

1. 日(ri)常觀察：每(mei)天(tian)用倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡觀察細(xi)胞(bao)的(de)形(xing)態、生長狀態、密度(du)等(deng)，記錄(lu)細(xi)胞(bao)的(de)變(bian)化(hua)情況(kuang)，如發(fa)現(xian)細(xi)胞(bao)汙染(ran)或異常(chang)，及(ji)時(shi)采(cai)取(qu)相應措施(shi)。
2. 細(xi)胞(bao)計數與(yu)活(huo)力檢(jian)測：在需(xu)要(yao)時(shi)，可采用(yong)臺盼藍染色(se)等(deng)方法對細(xi)胞(bao)進行(xing)計數和活(huo)力檢(jian)測，以了解(jie)細(xi)胞(bao)的(de)生長情況(kuang)和健(jian)康(kang)狀態(tai)。

壹(yi)、取(qu)材與分(fen)離(li)

1. 快(kuai)速(su)操(cao)作

- 組(zu)織(zhi)取(qu)材後需立(li)即(ji)處理，避免長(chang)時(shi)間(jian)暴露(lu)於室(shi)溫(wen)或非營(ying)養(yang)環(huan)境(jing)。

- 使(shi)用無(wu)菌(jun) PBS 或生理鹽水沖洗(xi)組織(zhi)，去(qu)除(chu)血液、雜(za)質(zhi)。

2. 消(xiao)化酶(mei)選擇

- 根據(ju)組(zu)織(zhi)類型選擇消化(hua)酶，避免過(guo)度(du)消化(hua)導致(zhi)細(xi)胞(bao)損傷(shang)。

- 消(xiao)化時(shi)間(jian)需嚴格控制(zhi)（通常 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可通過(guo)顯(xian)微(wei)鏡觀察細(xi)胞(bao)解(jie)離(li)狀(zhuang)態。

二(er)、培養(yang)條件優化

1. 培養(yang)基選擇

- 使(shi)用含血清(qing)或特定生長因(yin)子(zi)的(de)培養(yang)基（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分(fen)細(xi)胞(bao)需添加胰島素、EGF 等(deng)。

- 避(bi)免頻(pin)繁(fan)更換培養(yang)基品(pin)牌(pai)或批次(ci)，減少(shao)細(xi)胞(bao)適(shi)應壓力(li)。

2. 貼壁與(yu)傳(chuan)代(dai)

- 原代(dai)細(xi)胞(bao)貼壁能(neng)力(li)較(jiao)弱(ruo)，可能(neng)需(xu)要(yao)包(bao)被(bei)培養(yang)皿(min)（如膠(jiao)原蛋白(bai)、多(duo)聚(ju)賴(lai)氨酸(suan)）。

- 傳(chuan)代(dai)時(shi)密(mi)度建(jian)議控制在(zai) 70%-80%，過(guo)度(du)匯合(he)會(hui)導致(zhi)接觸(chu)抑制(zhi)和分(fen)化。

三、汙染(ran)控制(zhi)

1. 無(wu)菌(jun)操(cao)作

- 全(quan)程(cheng)在(zai)超(chao)凈(jing)臺操(cao)作，使(shi)用壹(yi)次(ci)性(xing)耗材，避免交叉(cha)汙(wu)染(ran)。

- 培養(yang)基中(zhong)可添加雙(shuang)抗(kang)，但長(chang)期(qi)使(shi)用可能(neng)影(ying)響(xiang)細(xi)胞(bao)活(huo)性(xing)。

2. 支(zhi)原體(ti)檢(jian)測

- 定期(qi)檢(jian)測支原體(ti)汙(wu)染(ran)（如 PCR 法），汙染(ran)後需(xu)及(ji)時(shi)丟(diu)棄(qi)細(xi)胞(bao)。

四(si)、狀態(tai)監(jian)控

1. 日(ri)常觀察

- 每(mei)天檢(jian)查細(xi)胞(bao)形(xing)態、密(mi)度及(ji)培養(yang)基顏(yan)色(se)，及(ji)時(shi)更換培養(yang)基（通常每(mei) 2-3 天換(huan)液壹次）。

- 異(yi)常形(xing)態（如細(xi)胞(bao)變(bian)圓(yuan)、碎片(pian)增多）可能(neng)提(ti)示(shi)汙(wu)染或營(ying)養(yang)不(bu)足。

2. 傳(chuan)代(dai)與凍(dong)存

- 原代(dai)細(xi)胞(bao)分(fen)裂次數有(you)限（壹般(ban) 5-10 代），需及(ji)時(shi)凍(dong)存早(zao)期(qi)代次(ci)細(xi)胞(bao)。

- 凍(dong)存液建(jian)議使(shi)用 DMSO+血清(qing)（或專用(yong)凍(dong)存培養(yang)基），梯(ti)度(du)降溫(wen)後(hou)液氮保(bao)存。