【概(gai)要描(miao)述(shu)】人視(shi)網(wang)膜微(wei)血(xue)管(guan)內皮細(xi)胞(bao)公司正(zheng)在(zai)出(chu)售(shou)的(de)產品：A-431表皮鱗狀(zhuang)細(xi)胞(bao)癌(ai)細(xi)胞(bao)系(xi) >> 大鼠(shu)AR42J (大(da)鼠胰腺外分泌細(xi)胞(bao))（種(zhong)屬(shu)鑒(jian)定正(zheng)確(que)）BRL 3A (大鼠肝細(xi)胞(bao)) (種(zhong)屬(shu)鑒(jian)定正(zheng)確(que))BRL (大鼠肝細(xi)胞(bao)) (種(zhong)屬(shu)鑒(jian)定正(zheng)確(que))C6 (大鼠膠質(zhi)瘤(liu)細(xi)胞(bao)) (種(zhong)屬(shu)鑒(jian)定正(zheng)確(que))L2 (大鼠肺泡上(shang)皮細(xi)胞(bao))WB-F344 (大鼠肝上(shang)皮樣幹細(xi)胞(bao)) (種(zhong)屬(shu)鑒(jian)定正(zheng)確(que))H-4-II-E [H4-II-E] (大鼠肝細(xi)胞(bao)瘤(liu))

本公司所(suo)有產品僅供(gong)科(ke)學(xue)實(shi)驗(yan)，不做(zuo)其(qi)他(ta)科(ke)學(xue)實(shi)驗(yan)外的(de)使用(yong)！

人(ren)視(shi)網(wang)膜微(wei)血(xue)管(guan)內皮分離自視(shi)網(wang)膜組織(zhi)；視(shi)網(wang)膜居(ju)於眼(yan)球(qiu)壁的(de)內層，是壹層透明的(de)薄膜。視(shi)網(wang)膜由(you)色素(su)上(shang)皮層和視(shi)網(wang)膜感(gan)覺(jiao)層組成(cheng)，兩(liang)層間在(zai)病理情況下可分開(kai)，稱(cheng)為視(shi)網(wang)膜脫(tuo)離。色(se)素(su)上(shang)皮層與(yu)脈絡(luo)膜緊(jin)密相(xiang)連(lian)，由色(se)素(su)上(shang)皮細(xi)胞(bao)組成(cheng)，它(ta)們具(ju)有支(zhi)持(chi)和營養(yang)光感(gan)受器細(xi)胞(bao)、遮(zhe)光、散(san)熱以(yi)及再(zai)生(sheng)和(he)修復(fu)等作用。組織(zhi)學上(shang)視(shi)網(wang)膜分為10層，由外向內分別為：色(se)素上(shang)皮層、視(shi)錐、視(shi)桿細(xi)胞(bao)層、外界膜、外(wai)顆粒(li)層、外叢狀(zhuang)層、內顆粒層、內叢狀(zhuang)層、神(shen)經節(jie)細(xi)胞(bao)層、神(shen)經纖(xian)維(wei)層、內界膜。視(shi)網(wang)膜內層為襯(chen)於血(xue)管(guan)膜內面的(de)壹層薄膜，有感(gan)光作用；後部鼻(bi)側有壹視(shi)神(shen)經乳頭。視(shi)網(wang)膜上(shang)的(de)感(gan)覺(jiao)層是由三個(ge)神(shen)經元(yuan)組成(cheng)。神(shen)經元(yuan)是(shi)視(shi)細(xi)胞(bao)層，專(zhuan)司感(gan)光，它包括錐細(xi)胞(bao)和桿細(xi)胞(bao)。視(shi)桿細(xi)胞(bao)主要在(zai)離(li)中(zhong)心(xin)凹(ao)較(jiao)遠的(de)視(shi)網(wang)膜上(shang)，而(er)視(shi)錐細(xi)胞(bao)則在(zai)中(zhong)心(xin)凹(ao)處(chu)最(zui)多(duo)。第(di)二層叫雙(shuang)節(jie)細(xi)胞(bao)，約有10到數(shu)百(bai)個視(shi)細(xi)胞(bao)通過(guo)雙(shuang)節(jie)細(xi)胞(bao)與(yu)壹個神(shen)經節(jie)細(xi)胞(bao)相(xiang)聯(lian)系(xi)，負責(ze)聯絡(luo)作用(yong)。第(di)三(san)層叫節(jie)細(xi)胞(bao)層，專(zhuan)管傳(chuan)導(dao)。視(shi)網(wang)膜是(shi)壹層菲薄的(de)但又(you)非(fei)常(chang)復(fu)雜的(de)結構(gou)，它(ta)貼於眼(yan)球(qiu)的(de)後壁部，傳(chuan)遞來自視(shi)網(wang)膜感(gan)受器沖動(dong)的(de)神(shen)經纖(xian)維(wei)跨(kua)越視(shi)網(wang)膜表面，經由(you)視(shi)神(shen)經到(dao)達出(chu)口。視(shi)網(wang)膜的(de)分辨(bian)力(li)是(shi)不均(jun)勻的(de)，在(zai)黃(huang)斑(ban)區，其(qi)分辨(bian)能力強。它(ta)是組成(cheng)血(xue)管(guan)腔面單(dan)層扁(bian)平(ping)上(shang)皮樣細(xi)胞(bao)，它所(suo)產(chan)生(sheng)和(he)分泌的(de)生(sheng)物(wu)活(huo)性物(wu)質(zhi)對(dui)維持(chi)血(xue)管(guan)張(zhang)力、調(tiao)節(jie)血(xue)壓(ya)、抗血(xue)栓(shuan)形成(cheng)等有重(zhong)要作(zuo)用，在(zai)視(shi)網(wang)膜血(xue)管(guan)疾(ji)病的(de)發(fa)病機(ji)制中(zhong)有重(zhong)要病理生(sheng)理學意(yi)義(yi)。由於從(cong)不(bu)同(tong)的(de)組織(zhi)和器(qi)官獲得(de)的(de)內皮細(xi)胞(bao)具(ju)有不同(tong)的(de)特性，在(zai)腦(nao)和(he)視(shi)網(wang)膜中(zhong)，這些(xie)內皮細(xi)胞(bao)具(ju)有內屏障的(de)功能，在(zai)調(tiao)節(jie)血(xue)管(guan)生(sheng)理狀(zhuang)態(tai)，釋(shi)放(fang)血(xue)管(guan)活(huo)性物(wu)質(zhi)以(yi)及新生(sheng)血(xue)管(guan)的(de)形成(cheng)中(zhong)發(fa)揮(hui)著(zhe)重(zhong)要作(zuo)用，體外(wai)分離培養RCEC對(dui)研(yan)究視(shi)網(wang)膜血(xue)管(guan)性疾(ji)病發(fa)生(sheng)發(fa)展(zhan)的(de)病理生(sheng)理機(ji)制以(yi)及疾(ji)病的(de)早期(qi)防治(zhi)具(ju)有重(zhong)要臨(lin)床意(yi)義(yi)。
方(fang)法簡(jian)介：

公司實(shi)驗(yan)室分離的(de)人視(shi)網(wang)膜微(wei)血(xue)管(guan)內皮采用(yong)膠原(yuan)酶(mei)-中(zhong)性dan白酶(mei)混(hun)合(he)消化法(fa)結合(he)密度梯度離心(xin)法(fa)、最後通過(guo)內皮細(xi)胞(bao)專(zhuan)用培(pei)養基(ji)培(pei)養(yang)篩選制備而來，細(xi)胞(bao)總量約為5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量檢測：

公司實(shi)驗(yan)室分離的(de)人視(shi)網(wang)膜微(wei)血(xue)管(guan)內皮經CD31免(mian)疫熒(ying)光鑒(jian)定，純度可達90%以(yi)上(shang)，且(qie)不含有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體、細(xi)菌、酵母(mu)和真菌等。

包(bao)被條(tiao)件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培(pei)養基(ji) 含(han)FBS、生(sheng)長(chang)添(tian)加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

換液頻(pin)率(lv) 每(mei)2-3天(tian)換液壹次

生(sheng)長(chang)特(te)性 貼壁

細(xi)胞(bao)形態(tai) 內皮細(xi)胞(bao)樣

傳(chuan)代(dai)特(te)性 可(ke)傳(chuan)2-3代(dai)

消化液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白酶(mei)

培(pei)養條(tiao)件 氣(qi)相(xiang)：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備工(gong)作(zuo)

1. 實(shi)驗(yan)器材(cai)準(zhun)備：準(zhun)備無菌的(de)培養(yang)皿、培(pei)養(yang)瓶(ping)、移液(ye)管(guan)、離心(xin)管(guan)、手(shou)術(shu)器(qi)械等，並進行(xing)高壓滅菌或其(qi)他(ta)合(he)適(shi)的(de)消毒處(chu)理。

2. 試(shi)劑準(zhun)備：配制或(huo)購買(mai)合(he)適(shi)的(de)培養(yang)基(ji)、消化酶(mei)（如(ru)、膠原(yuan)酶(mei)等）、胎(tai)牛血(xue)清(qing)、雙(shuang)抗等試劑，確(que)保(bao)其(qi)無(wu)菌且(qie)在(zai)有效(xiao)期(qi)內。

3. 實(shi)驗(yan)動(dong)物或組織(zhi)來源(yuan)準(zhun)備：根據(ju)實(shi)驗(yan)需求，選擇合(he)適(shi)的(de)動(dong)物並進行相(xiang)應(ying)的(de)麻醉(zui)或處(chu)死(si)，獲取所(suo)需組織(zhi)；或從(cong)已有的(de)組織(zhi)樣本庫中獲取組織(zhi)。

取材與(yu)處(chu)理

1. 取材：在(zai)無(wu)菌條(tiao)件下，迅(xun)速取出(chu)目標組織(zhi)，盡量減少對(dui)組織(zhi)的(de)損傷(shang)，並(bing)去(qu)除多(duo)余(yu)的(de)脂肪(fang)、結締(di)組織(zhi)等非(fei)目的(de)組織(zhi)。

2. 清(qing)洗：將取出(chu)的(de)組織(zhi)用預(yu)冷的(de)無菌PBS沖洗數(shu)次(ci)，以(yi)去除血(xue)液(ye)和(he)雜質(zhi)。

3. 剪切：將組織(zhi)剪成約1 - 2mm³的(de)小塊(kuai)，以(yi)便後續(xu)消化。

細(xi)胞(bao)分離

1. 消化：將剪碎的(de)組織(zhi)塊放(fang)入含(han)有適(shi)量消化酶(mei)的(de)離心(xin)管(guan)中(zhong)，在(zai)37℃恒(heng)溫搖(yao)床(chuang)或(huo)培(pei)養(yang)箱中(zhong)消化壹段時間。期間可輕輕(qing)搖(yao)晃(huang)離(li)心(xin)管，使(shi)消化更均勻。

2. 終(zhong)止消化：當(dang)組織(zhi)塊大(da)部分被消化成(cheng)單(dan)細(xi)胞(bao)懸液(ye)或小(xiao)細(xi)胞(bao)團時，加(jia)入(ru)含(han)血(xue)清(qing)的(de)培養(yang)基(ji)終(zhong)止消化。

3. 過(guo)濾與(yu)離心(xin)：用(yong)細(xi)胞(bao)篩過(guo)濾細(xi)胞(bao)懸液(ye)，去除未(wei)消化的(de)組織(zhi)碎片(pian)，然後將濾液(ye)以(yi)適(shi)當的(de)轉(zhuan)速(su)離(li)心(xin)，收集細(xi)胞(bao)沈澱。

細(xi)胞(bao)觀察(cha)與(yu)檢測

1. 日常(chang)觀察(cha)：每(mei)天(tian)用(yong)倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡觀察(cha)細(xi)胞(bao)的(de)形態(tai)、生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)、密度等，記(ji)錄(lu)細(xi)胞(bao)的(de)變(bian)化情況，如(ru)發(fa)現(xian)細(xi)胞(bao)汙(wu)染(ran)或異(yi)常(chang)，及時采取相(xiang)應(ying)措施(shi)。
2. 細(xi)胞(bao)計數(shu)與(yu)活力(li)檢測：在(zai)需要時(shi)，可采用(yong)臺盼藍染(ran)色等方(fang)法對(dui)細(xi)胞(bao)進行計數(shu)和(he)活力檢測，以(yi)了解(jie)細(xi)胞(bao)的(de)生(sheng)長(chang)情(qing)況和(he)健(jian)康(kang)狀(zhuang)態(tai)。

壹、取材與(yu)分離

1. 快速操作(zuo)

- 組織(zhi)取材後需立(li)即處(chu)理，避免(mian)長時間暴露(lu)於室(shi)溫或非(fei)營養環(huan)境(jing)。

- 使(shi)用無(wu)菌 PBS 或生(sheng)理鹽(yan)水沖洗組織(zhi)，去除血(xue)液(ye)、雜質(zhi)。

2. 消化酶(mei)選擇

- 根據(ju)組織(zhi)類型(xing)選擇消化酶(mei)，避免(mian)過(guo)度消化導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)損傷(shang)。

- 消化時(shi)間需嚴(yan)格(ge)控(kong)制（通常(chang) 10-30 分鐘），可通過(guo)顯(xian)微(wei)鏡觀察(cha)細(xi)胞(bao)解(jie)離(li)狀(zhuang)態(tai)。

二、培(pei)養(yang)條(tiao)件優化

1. 培(pei)養基(ji)選擇

- 使(shi)用含(han)血(xue)清(qing)或特(te)定生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)的(de)培養(yang)基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部分細(xi)胞(bao)需添加(jia)胰島(dao)素、EGF 等。

- 避免(mian)頻(pin)繁(fan)更換培養(yang)基品牌(pai)或(huo)批(pi)次(ci)，減(jian)少細(xi)胞(bao)適(shi)應(ying)壓力(li)。

2. 貼壁與(yu)傳(chuan)代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞(bao)貼壁能力較(jiao)弱，可(ke)能需要包(bao)被培(pei)養皿（如(ru)膠原(yuan)蛋(dan)白、多(duo)聚(ju)賴(lai)氨(an)酸）。

- 傳(chuan)代(dai)時(shi)密度建議控(kong)制在(zai) 70%-80%，過(guo)度匯(hui)合(he)會(hui)導致(zhi)接(jie)觸(chu)抑(yi)制(zhi)和分化。

三(san)、汙(wu)染(ran)控(kong)制

1. 無(wu)菌操作(zuo)

- 全(quan)程在(zai)超凈臺操作(zuo)，使用壹次性耗(hao)材，避免(mian)交叉(cha)汙(wu)染(ran)。

- 培(pei)養基(ji)中可(ke)添加(jia)雙(shuang)抗，但長期使用(yong)可(ke)能影(ying)響(xiang)細(xi)胞(bao)活性。

2. 支(zhi)原(yuan)體檢測

- 定期(qi)檢測支(zhi)原(yuan)體汙(wu)染(ran)（如 PCR 法(fa)），汙(wu)染(ran)後需及時丟棄(qi)細(xi)胞(bao)。

四(si)、狀(zhuang)態(tai)監(jian)控(kong)

1. 日常(chang)觀察(cha)

- 每(mei)天(tian)檢查(zha)細(xi)胞(bao)形態(tai)、密度及培養基(ji)顏(yan)色，及時更換培養(yang)基（通常(chang)每(mei) 2-3 天(tian)換液壹次）。

- 異(yi)常(chang)形態(tai)（如(ru)細(xi)胞(bao)變(bian)圓、碎片(pian)增多(duo)）可(ke)能提示(shi)汙(wu)染(ran)或營(ying)養不足(zu)。

2. 傳(chuan)代(dai)與(yu)凍存

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞(bao)分裂次數(shu)有限（壹般 5-10 代(dai)），需及時凍存早(zao)期代(dai)次(ci)細(xi)胞(bao)。

- 凍存液(ye)建議使用(yong) DMSO+血(xue)清(qing)（或專(zhuan)用凍存培(pei)養基(ji)），梯(ti)度降溫後液氮保(bao)存(cun)。