【概(gai)要(yao)描(miao)述(shu)】人卵巢(chao)成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出售的產品(pin)：WM-115人(ren)黑(hei)瘤(liu)細胞(bao)人(ren)膀胱(guang)移(yi)行細胞(bao)乳(ru)頭(tou)瘤(liu)細胞(bao) RT4(STR鑒定(ding)正(zheng)確(que))人(ren)膠(jiao)質(zhi)瘤(liu)細胞(bao)TJ905 (STR鑒定(ding)正(zheng)確(que))人(ren)主動脈(mai)血(xue)管平滑(hua)肌(ji)細胞(bao)HA-VSMC (STR鑒定(ding)正(zheng)確(que))人(ren)肝癌細胞(bao)HepG2 (STR鑒定(ding)正(zheng)確(que))大(da)鼠輸(shu)尿管上皮(pi)細胞(bao)人(ren)子宮(gong)內膜(mo)腺癌(轉(zhuan)移(yi))細胞(bao)AN3CA(STR鑒定(ding)正(zheng)確(que))大(da)鼠肺(fei)泡巨噬(shi)細胞(bao)NR8383（種(zhong)屬鑒定(ding)）人(ren)乳(ru)腺(xian)癌細胞(bao)Bcap-37(STR鑒定(ding)正(zheng)確(que)

本公(gong)司(si)所有產品(pin)僅(jin)供(gong)科(ke)學實(shi)驗(yan)，不做其他科(ke)學實(shi)驗(yan)外的使(shi)用！

人卵巢(chao)成(cheng)纖維(wei)分(fen)離自卵巢(chao)組(zu)織；卵巢(chao)是雌性(xing)動物的生殖(zhi)器官，卵巢(chao)的功能(neng)是產生(sheng)卵以(yi)及(ji)類(lei)固(gu)醇激素(su)。卵巢(chao)的位置與(yu)睪(gao)丸(wan)相同，僅(jin)左側發(fa)育(yu)（右側已(yi)退化），呈(cheng)葡(pu)萄狀(zhuang)，均為(wei)處(chu)於(yu)不同發育(yu)時期的卵泡(pao)，卵泡(pao)呈(cheng)黃(huang)色(se)，卵巢(chao)表面(mian)密布(bu)血(xue)管。卵巢(chao)的大小(xiao)與年(nian)齡和產卵期有(you)關(guan)。大(da)多(duo)數脊(ji)椎(zhui)動物有兩個(ge)卵巢(chao)，但(dan)是部分(fen)魚(yu)類(lei)的兩個(ge)卵巢(chao)融(rong)合為(wei)單(dan)個(ge)結構，而所有鳥(niao)類只有左側卵巢(chao)有(you)機能(neng)。卵巢(chao)是位於(yu)子(zi)宮(gong)兩側(ce)的壹對(dui)卵圓(yuan)形的生殖(zhi)器官，它(ta)的外表有壹(yi)層上皮(pi)組(zu)織，其(qi)下(xia)方有薄(bo)層的結締(di)組(zu)織。卵巢(chao)的內部結構可(ke)分(fen)為(wei)皮(pi)質(zhi)和(he)髓(sui)質。皮(pi)質位於(yu)卵巢(chao)的周(zhou)圍(wei)部(bu)分(fen)，主要(yao)由卵泡(pao)和(he)結締(di)組(zu)織構(gou)成(cheng)；髓(sui)質位於(yu)中(zhong)央(yang)，由疏(shu)松結締(di)組(zu)織構(gou)成(cheng)，其中(zhong)有許(xu)多(duo)血(xue)管、淋巴(ba)管和(he)神經。成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)（Fibroblast）是疏(shu)松結締(di)組(zu)織的主要(yao)細胞(bao)成(cheng)分(fen)，由胚(pei)胎(tai)時期的間充(chong)質(zhi)細胞(bao)分(fen)化而來(lai)；成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)較大(da)，輪廓(kuo)清(qing)楚(chu)，多(duo)為(wei)突(tu)起(qi)的紡錘(chui)形或(huo)星(xing)形的扁平狀(zhuang)結構，其(qi)細胞(bao)核呈(cheng)規(gui)則的卵圓(yuan)形，核仁大而明(ming)顯(xian)。成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)功(gong)能活動旺(wang)盛，細胞(bao)質(zhi)嗜弱(ruo)堿(jian)性(xing)，具(ju)明(ming)顯(xian)的蛋(dan)白質(zhi)合成(cheng)和分(fen)泌活動，在壹(yi)定(ding)條件(jian)下(xia)，它(ta)可(ke)以(yi)實(shi)現跟(gen)纖(xian)維(wei)細胞(bao)的互相轉(zhuan)化；成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)對(dui)不同程度的細胞(bao)變(bian)性(xing)、壞(huai)死(si)和(he)組(zu)織缺損的修(xiu)復有著十(shi)分(fen)重(zhong)要(yao)的作用(yong)。剛(gang)分(fen)離的卵巢(chao)成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)呈(cheng)圓(yuan)形、折(zhe)光(guang)性(xing)良(liang)好(hao)，懸(xuan)浮(fu)於(yu)培(pei)養基中(zhong)。30min細胞(bao)貼壁，其中(zhong)部(bu)分(fen)開始伸出偽(wei)足，表現為(wei)小(xiao)的突(tu)起(qi)；6h後(hou)細胞(bao)基(ji)本貼壁wan全，伸展成(cheng)梭(suo)形，胞核清(qing)晰，分(fen)布較均(jun)勻，散(san)在(zai)生(sheng)長，不聚集(ji)成(cheng)團(tuan)；細胞(bao)生(sheng)長迅速(su)，5-7天(tian)即呈(cheng)融(rong)合狀(zhuang)態(tai)，細胞(bao)排列(lie)緊(jin)密(mi)，有(you)的交叉重(zhong)疊生長，平坦、胞體較大(da)，細胞(bao)質(zhi)透明(ming)，細胞(bao)核較大(da)，呈(cheng)橢(tuo)圓(yuan)形，顏(yan)色(se)淡(dan)。細胞(bao)融(rong)合，並(bing)彼(bi)此(ci)連接(jie)成(cheng)網(wang)狀(zhuang)；細胞(bao)呈(cheng)突(tu)起(qi)的紡錘(chui)形或(huo)星(xing)形的扁平分(fen)布。卵巢(chao)成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)大(da)多分(fen)布於(yu)卵巢(chao)表面(mian)，其主要(yao)特點和功(gong)能：①成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)在(zai)體外易(yi)於(yu)培(pei)養；②卵巢(chao)損傷後(hou)，成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)能(neng)修(xiu)復和重(zhong)塑(su)卵巢(chao)；③能(neng)在卵巢(chao)炎癥時有(you)效(xiao)控(kong)制炎癥擴(kuo)散(san)。
方法(fa)簡(jian)介(jie)：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室(shi)分(fen)離的人卵巢(chao)成(cheng)纖維(wei)采用(yong)yi蛋(dan)白酶-膠(jiao)原(yuan)酶混合(he)消化法(fa)結合差(cha)速(su)貼壁法(fa)制備而來(lai)，細胞(bao)總(zong)量約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質量檢(jian)測：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室(shi)分(fen)離的人卵巢(chao)成(cheng)纖維(wei)經Vimentin免疫熒(ying)光(guang)鑒定(ding)，純度可達90%以上，且(qie)不含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體、細菌(jun)、酵母(mu)和(he)真(zhen)菌(jun)等。

培養基 含(han)FBS、生長添(tian)加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等

換液(ye)頻率(lv) 每2-3天換液(ye)壹次(ci)

生長特性(xing) 貼壁

細胞(bao)形態(tai) 成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)樣

傳代(dai)特性(xing) 可傳5代(dai)左右；3代(dai)以內狀(zhuang)態(tai)

消化液 0.25%yi蛋(dan)白酶

培養條件(jian) 氣相：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準備(bei)工作

1. 實(shi)驗(yan)器材(cai)準備(bei)：準備(bei)無菌(jun)的培養皿(min)、培養瓶、移(yi)液(ye)管、離心(xin)管、手(shou)術(shu)器械等，並(bing)進(jin)行高(gao)壓滅(mie)菌(jun)或(huo)其(qi)他合適(shi)的消毒處(chu)理(li)。

2. 試劑準備(bei)：配(pei)制或(huo)購買(mai)合(he)適(shi)的培養基、消化酶（如、膠(jiao)原(yuan)酶等）、胎牛(niu)血(xue)清(qing)、雙抗(kang)等試(shi)劑，確保(bao)其(qi)無菌(jun)且(qie)在(zai)有效期內。

3. 實(shi)驗(yan)動物或(huo)組(zu)織來(lai)源準備(bei)：根據(ju)實(shi)驗(yan)需求(qiu)，選(xuan)擇合適(shi)的動物並(bing)進(jin)行相應的麻(ma)醉(zui)或(huo)處(chu)死(si)，獲取所需組(zu)織；或(huo)從(cong)已(yi)有的組(zu)織樣本(ben)庫中(zhong)獲取組(zu)織。

取材(cai)與(yu)處(chu)理(li)

1. 取材(cai)：在(zai)無菌(jun)條件(jian)下(xia)，迅速取(qu)出目標組(zu)織，盡量減少對(dui)組(zu)織的損傷，並(bing)去(qu)除(chu)多(duo)余(yu)的脂肪(fang)、結締(di)組(zu)織等(deng)非目的組(zu)織。

2. 清(qing)洗(xi)：將(jiang)取(qu)出(chu)的組(zu)織用(yong)預冷(leng)的無菌(jun)PBS沖(chong)洗(xi)數(shu)次(ci)，以(yi)去(qu)除(chu)血(xue)液和雜(za)質(zhi)。

3. 剪切(qie)：將(jiang)組(zu)織剪(jian)成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的小(xiao)塊(kuai)，以便(bian)後(hou)續消化。

細胞(bao)分(fen)離

1. 消化：將(jiang)剪(jian)碎(sui)的組(zu)織塊(kuai)放入(ru)含(han)有(you)適(shi)量消化酶的離心(xin)管中(zhong)，在37℃恒(heng)溫搖床或(huo)培(pei)養箱中(zhong)消化壹段(duan)時間。期間可輕輕搖晃離心(xin)管，使(shi)消化更均勻(yun)。

2. 終(zhong)止(zhi)消化：當組(zu)織塊(kuai)大部(bu)分(fen)被(bei)消化成(cheng)單細胞(bao)懸(xuan)液或(huo)小(xiao)細胞(bao)團(tuan)時，加(jia)入(ru)含(han)血(xue)清(qing)的培養基終(zhong)止(zhi)消化。

3. 過濾與(yu)離心(xin)：用(yong)細胞(bao)篩過濾細胞(bao)懸(xuan)液，去(qu)除(chu)未(wei)消化的組(zu)織碎(sui)片(pian)，然後(hou)將(jiang)濾液(ye)以(yi)適(shi)當(dang)的轉(zhuan)速(su)離心(xin)，收(shou)集(ji)細胞(bao)沈(chen)澱(dian)。

細胞(bao)觀察與(yu)檢(jian)測

1. 日(ri)常(chang)觀察：每(mei)天用倒置顯(xian)微(wei)鏡觀察細胞(bao)的形態(tai)、生長狀(zhuang)態(tai)、密度等(deng)，記錄細胞(bao)的變化情(qing)況，如(ru)發(fa)現細胞(bao)汙(wu)染或(huo)異(yi)常，及(ji)時采取(qu)相應措施(shi)。
2. 細胞(bao)計(ji)數(shu)與(yu)活力檢(jian)測：在需要(yao)時，可(ke)采用(yong)臺盼(pan)藍染色(se)等(deng)方法(fa)對(dui)細胞(bao)進(jin)行計(ji)數(shu)和(he)活力檢(jian)測，以了解(jie)細胞(bao)的生長情(qing)況和(he)健(jian)康狀(zhuang)態(tai)。

壹、取(qu)材(cai)與分(fen)離

1. 快速操作

- 組(zu)織取(qu)材後(hou)需立(li)即處(chu)理(li)，避免長時間暴(bao)露於(yu)室(shi)溫或(huo)非營養環(huan)境(jing)。

- 使(shi)用無菌(jun) PBS 或(huo)生(sheng)理(li)鹽(yan)水沖(chong)洗(xi)組(zu)織，去(qu)除(chu)血(xue)液、雜(za)質(zhi)。

2. 消化酶選(xuan)擇

- 根據(ju)組(zu)織類(lei)型選(xuan)擇消化酶，避免過度(du)消化導致(zhi)細胞(bao)損傷。

- 消化時間需嚴格(ge)控(kong)制（通常 10-30 分(fen)鐘），可(ke)通過(guo)顯微(wei)鏡觀察細胞(bao)解(jie)離狀(zhuang)態(tai)。

二(er)、培(pei)養條件(jian)優化

1. 培養基選(xuan)擇

- 使(shi)用含(han)血(xue)清(qing)或(huo)特定(ding)生(sheng)長因(yin)子(zi)的培養基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分(fen)細胞(bao)需添(tian)加(jia)胰(yi)島素(su)、EGF 等。

- 避免(mian)頻繁更換培(pei)養基品(pin)牌或(huo)批(pi)次(ci)，減(jian)少細胞(bao)適(shi)應壓力。

2. 貼壁與傳代(dai)

- 原代(dai)細胞(bao)貼壁能力較弱(ruo)，可能(neng)需要(yao)包(bao)被(bei)培(pei)養皿(min)（如膠(jiao)原(yuan)蛋(dan)白、多(duo)聚賴(lai)氨(an)酸）。

- 傳代(dai)時密(mi)度(du)建(jian)議(yi)控(kong)制在 70%-80%，過度匯合(he)會(hui)導致(zhi)接觸(chu)抑(yi)制和分(fen)化。

三、汙(wu)染(ran)控(kong)制

1. 無菌(jun)操作

- 全程在超凈臺操作，使(shi)用壹次(ci)性(xing)耗(hao)材(cai)，避(bi)免(mian)交叉汙(wu)染(ran)。

- 培養基中(zhong)可添(tian)加(jia)雙抗(kang)，但長期使(shi)用可能(neng)影(ying)響(xiang)細胞(bao)活性(xing)。

2. 支原(yuan)體檢(jian)測

- 定(ding)期檢(jian)測支原體汙染(ran)（如(ru) PCR 法(fa)），汙染(ran)後(hou)需及(ji)時丟(diu)棄(qi)細胞(bao)。

四(si)、狀(zhuang)態(tai)監控(kong)

1. 日(ri)常(chang)觀察

- 每天(tian)檢(jian)查(zha)細胞(bao)形態(tai)、密度及(ji)培(pei)養基顏(yan)色(se)，及(ji)時更(geng)換培(pei)養基（通(tong)常每(mei) 2-3 天換液(ye)壹次(ci)）。

- 異(yi)常形態(tai)（如細胞(bao)變(bian)圓(yuan)、碎(sui)片(pian)增多(duo)）可(ke)能(neng)提(ti)示(shi)汙染(ran)或(huo)營(ying)養不足。

2. 傳代(dai)與凍(dong)存(cun)

- 原代(dai)細胞(bao)分(fen)裂次(ci)數有(you)限（壹般(ban) 5-10 代(dai)），需及(ji)時凍(dong)存(cun)早期代(dai)次細胞(bao)。

- 凍存(cun)液建(jian)議(yi)使(shi)用 DMSO+血(xue)清(qing)（或(huo)專(zhuan)用(yong)凍存(cun)培養基），梯(ti)度降(jiang)溫後(hou)液氮保(bao)存(cun)。