【概(gai)要描述】人(ren)子(zi)宮內(nei)膜上(shang)皮(pi)細胞公司(si)正(zheng)在(zai)出(chu)售(shou)的(de)產品(pin)：WPMY-1人(ren)正常(chang)前(qian)列(lie)腺(xian)基(ji)質永生化(hua)細(xi)胞小(xiao)鼠精(jing)母細(xi)胞(bao)系(xi)GC-2 spd（種(zhong)屬(shu)鑒(jian)定(ding)）人(ren)黑色(se)瘤(liu)細(xi)胞(bao)A375.S2(STR鑒(jian)定(ding)正確(que))人(ren)血液(ye)白血病(bing)細胞(bao)TF-1 (STR鑒(jian)定(ding)正確(que))大(da)鼠β胰(yi)島(dao)瘤(liu)細(xi)胞(bao)RIN-M5F（種(zhong)屬(shu)鑒(jian)定(ding)）人(ren)單核細胞(bao)白血病(bing)THP-1(STR鑒(jian)定(ding)正確(que))人(ren)類胚(pei)胎(tai)幹(gan)細胞(bao)H9(STR鑒(jian)定(ding)正確(que))小(xiao)鼠腦(nao)神經(jing)膠(jiao)質(zhi)母細(xi)胞(bao)瘤(liu)株(zhu)帶(dai)綠(lv)色(se)熒光G422+GFP （種(zhong)屬(shu)鑒(jian)定(ding)）雲南(nan)宣威(wei)

人(ren)子(zi)宮內(nei)膜上(shang)皮(pi)分離(li)自(zi)子(zi)宮組(zu)織(zhi)；子(zi)宮是(shi)孕育胎兒的(de)器(qi)官(guan)，位(wei)於盆(pen)腔(qiang)中部(bu)，膀胱(guang)與直腸之(zhi)間，其(qi)位(wei)置可隨膀胱(guang)與直腸的(de)充(chong)盈(ying)程(cheng)度或(huo)體(ti)位(wei)而有變化(hua)。子(zi)宮的(de)正(zheng)常(chang)位(wei)置主(zhu)要(yao)依靠(kao)子(zi)宮諸(zhu)韌(ren)帶(dai)、盆(pen)膈(ge)、尿(niao)生殖(zhi)膈(ge)及(ji)會陰(yin)中心(xin)腱等結構維持，這些結構受損或(huo)松(song)弛時，可以引起子(zi)宮脫(tuo)垂。子(zi)宮內(nei)膜即(ji)黏(nian)膜，由(you)上(shang)皮(pi)（屬(shu)單層柱(zhu)狀(zhuang)上(shang)皮(pi)，有分泌細(xi)胞(bao)和(he)纖(xian)毛細(xi)胞(bao)二(er)種(zhong)）和固(gu)有膜（由結締組(zu)織(zhi)構(gou)成(cheng)，其(qi)內(nei)有大(da)量的(de)星(xing)形(xing)細胞(bao)，稱(cheng)為(wei)基質(zhi)細(xi)胞）組(zu)成(cheng)，子(zi)宮內(nei)膜可分為(wei)淺(qian)表的(de)功(gong)能(neng)膜(mo)和深部的(de)基(ji)底(di)層，功(gong)能(neng)層(ceng)較(jiao)厚，約(yue)占內(nei)膜(mo)厚度的(de)4/5；基(ji)底(di)層較(jiao)薄(bo)較(jiao)致(zhi)密(mi)，約(yue)占1/5，功(gong)能(neng)層(ceng)可剝脫，而基(ji)底(di)層不(bu)可剝脫。子(zi)宮內(nei)膜上(shang)皮(pi)細胞主要(yao)功(gong)能(neng)：①子(zi)宮內(nei)膜亦(yi)稱(cheng)子(zi)宮黏(nian)膜，是(shi)指構成哺乳類(lei)子(zi)宮內(nei)壁的(de)壹(yi)層；②子(zi)宮內(nei)膜對(dui)動情素和(he)孕(yun)激(ji)素(su)都起反(fan)應(ying)，因此(ci)可隨著性周(zhou)期(qi)（發(fa)情周(zhou)期(qi)、月(yue)經(jing)周(zhou)期(qi)）發(fa)生顯(xian)著的(de)變(bian)化(hua)。子(zi)宮內(nei)膜與胚胎附(fu)植(zhi)密(mi)切(qie)相(xiang)關(guan)，在(zai)生殖(zhi)生理(li)的(de)研究(jiu)中占(zhan)重要(yao)地位(wei)。在(zai)胚(pei)胎(tai)與母體(ti)“對(dui)話(hua)"的(de)過(guo)程(cheng)中，子(zi)宮內(nei)膜上(shang)皮(pi)細胞充當(dang)了(le)極(ji)其(qi)重要(yao)的(de)角(jiao)色。子(zi)宮內(nei)膜構(gou)成雌性哺乳動物(wu)子(zi)宮壁的(de)最(zui)內(nei)層，位(wei)於子(zi)宮腔(qiang)面，在(zai)動(dong)物(wu)生殖(zhi)生理(li)活(huo)動(dong)中占(zhan)有重要(yao)地位(wei)。子(zi)宮和(he)子(zi)宮內(nei)膜是(shi)維持雌性動物(wu)生理(li)功(gong)能(neng)和(he)生育(yu)能(neng)力(li)的(de)重要(yao)器(qi)官(guan)，子(zi)宮內(nei)膜的(de)再生修(xiu)復(fu)是(shi)子(zi)宮的(de)重要(yao)生理(li)功(gong)能(neng)。體(ti)外培(pei)養(yang)的(de)子(zi)宮內(nei)膜上(shang)皮(pi)細胞對於(yu)研究(jiu)其(qi)生理(li)功(gong)能(neng)、藥(yao)物(wu)作用以及(ji)各(ge)種(zhong)致(zhi)病(bing)因素(su)作用下(xia)的(de)病(bing)理生理(li)改(gai)變(bian)具(ju)重要(yao)意義。
方(fang)法簡(jian)介：

公司(si)實(shi)驗(yan)室(shi)分離(li)的(de)人(ren)子(zi)宮內(nei)膜上(shang)皮(pi)采用膠(jiao)原(yuan)酶(mei)消(xiao)化(hua)法(fa)，結合上(shang)皮(pi)細胞專用(yong)培(pei)養(yang)基(ji)培(pei)養(yang)篩選(xuan)制備(bei)而來(lai)，細胞(bao)總量約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量檢測：

公司(si)實(shi)驗(yan)室(shi)分離(li)的(de)人(ren)子(zi)宮內(nei)膜上(shang)皮(pi)經Cytokeratin-19免(mian)疫熒光鑒(jian)定(ding)，純度可達90%以上(shang)，且不含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體(ti)、細菌、酵母和(he)真(zhen)菌等。

本公司(si)所有產品(pin)僅供(gong)科(ke)學(xue)實(shi)驗(yan)，不(bu)做(zuo)其(qi)他(ta)科學(xue)實(shi)驗(yan)外的(de)使(shi)用(yong)！

包(bao)被(bei)條(tiao)件(jian) 鼠尾(wei)膠原(yuan)Ⅰ（2-5μg/cm2）

培(pei)養(yang)基(ji) 含(han)FBS、生長(chang)添加劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液頻(pin)率(lv) 每(mei)2-3天(tian)換液(ye)壹(yi)次(ci)

生長(chang)特(te)性 貼壁

細(xi)胞形(xing)態 上(shang)皮(pi)細胞樣(yang)

傳(chuan)代特性 可傳2-3代(dai)

消(xiao)化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白酶

培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian) 氣相(xiang)：空氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備工作

1. 實(shi)驗(yan)器(qi)材(cai)準備：準備無(wu)菌的(de)培(pei)養(yang)皿(min)、培(pei)養(yang)瓶(ping)、移液管(guan)、離(li)心管(guan)、手術器(qi)械(xie)等，並進(jin)行(xing)高壓(ya)滅(mie)菌或(huo)其(qi)他(ta)合適(shi)的(de)消(xiao)毒處(chu)理。

2. 試(shi)劑(ji)準備(bei)：配制或(huo)購(gou)買合(he)適(shi)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)、消(xiao)化(hua)酶(mei)（如(ru)、膠原(yuan)酶(mei)等）、胎牛(niu)血(xue)清(qing)、雙抗(kang)等試劑(ji)，確保(bao)其(qi)無(wu)菌且在(zai)有效期(qi)內(nei)。

3. 實(shi)驗(yan)動(dong)物(wu)或(huo)組(zu)織(zhi)來(lai)源(yuan)準備：根(gen)據實(shi)驗(yan)需(xu)求，選(xuan)擇合(he)適(shi)的(de)動(dong)物(wu)並進(jin)行(xing)相(xiang)應(ying)的(de)麻(ma)醉(zui)或(huo)處(chu)死，獲(huo)取(qu)所需(xu)組(zu)織(zhi)；或(huo)從已有的(de)組(zu)織(zhi)樣(yang)本庫中獲(huo)取(qu)組(zu)織(zhi)。

取(qu)材(cai)與處(chu)理

1. 取(qu)材(cai)：在(zai)無(wu)菌條(tiao)件(jian)下，迅(xun)速取(qu)出(chu)目標組(zu)織(zhi)，盡量減少對組(zu)織(zhi)的(de)損(sun)傷，並去(qu)除多余的(de)脂肪(fang)、結締組(zu)織(zhi)等非目的(de)組(zu)織(zhi)。

2. 清(qing)洗：將取(qu)出(chu)的(de)組(zu)織(zhi)用(yong)預冷(leng)的(de)無(wu)菌PBS沖(chong)洗(xi)數(shu)次(ci)，以去(qu)除血液和(he)雜質。

3. 剪(jian)切：將組(zu)織(zhi)剪(jian)成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊，以便(bian)後(hou)續消(xiao)化(hua)。

細(xi)胞分離(li)

1. 消(xiao)化(hua)：將(jiang)剪碎(sui)的(de)組(zu)織(zhi)塊(kuai)放(fang)入含有適(shi)量消(xiao)化(hua)酶(mei)的(de)離(li)心管(guan)中，在(zai)37℃恒溫(wen)搖(yao)床(chuang)或(huo)培(pei)養(yang)箱(xiang)中消(xiao)化(hua)壹(yi)段(duan)時間。期(qi)間可輕輕搖(yao)晃(huang)離(li)心管(guan)，使消(xiao)化(hua)更(geng)均(jun)勻(yun)。

2. 終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)：當(dang)組(zu)織(zhi)塊(kuai)大(da)部分被消(xiao)化(hua)成(cheng)單細胞懸液(ye)或(huo)小(xiao)細胞(bao)團時，加入含血清的(de)培(pei)養(yang)基(ji)終止(zhi)消(xiao)化(hua)。

3. 過(guo)濾與離(li)心：用(yong)細胞篩過(guo)濾細胞(bao)懸液(ye)，去(qu)除未消(xiao)化(hua)的(de)組(zu)織(zhi)碎(sui)片，然(ran)後(hou)將濾液以適(shi)當(dang)的(de)轉(zhuan)速離(li)心，收(shou)集細胞沈澱。

細(xi)胞觀察(cha)與檢測

1. 日(ri)常(chang)觀察(cha)：每(mei)天(tian)用倒(dao)置顯(xian)微鏡(jing)觀察(cha)細胞的(de)形(xing)態、生長(chang)狀(zhuang)態、密(mi)度等，記錄細胞(bao)的(de)變(bian)化(hua)情(qing)況(kuang)，如(ru)發(fa)現細胞汙(wu)染或(huo)異(yi)常(chang)，及(ji)時采取(qu)相(xiang)應(ying)措施。
2. 細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)與活力(li)檢測(ce)：在(zai)需(xu)要時(shi)，可采用臺盼藍染色(se)等方(fang)法對細(xi)胞進(jin)行(xing)計(ji)數(shu)和活(huo)力(li)檢測(ce)，以了(le)解細(xi)胞(bao)的(de)生長(chang)情(qing)況(kuang)和(he)健(jian)康(kang)狀(zhuang)態。

壹(yi)、取(qu)材(cai)與分離(li)

1. 快速操(cao)作

- 組(zu)織(zhi)取(qu)材(cai)後(hou)需(xu)立即(ji)處(chu)理，避(bi)免長時(shi)間暴(bao)露(lu)於室溫或(huo)非(fei)營養(yang)環境(jing)。

- 使(shi)用無(wu)菌 PBS 或(huo)生理(li)鹽(yan)水(shui)沖(chong)洗(xi)組(zu)織(zhi)，去(qu)除血液、雜(za)質。

2. 消(xiao)化(hua)酶(mei)選(xuan)擇

- 根(gen)據組(zu)織(zhi)類(lei)型選(xuan)擇消(xiao)化(hua)酶(mei)，避(bi)免過(guo)度消(xiao)化(hua)導(dao)致(zhi)細胞(bao)損(sun)傷。

- 消(xiao)化(hua)時(shi)間需(xu)嚴(yan)格(ge)控制（通常(chang) 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可通過(guo)顯(xian)微鏡(jing)觀察(cha)細胞解離(li)狀態。

二(er)、培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)優化(hua)

1. 培(pei)養(yang)基(ji)選(xuan)擇

- 使(shi)用含血清或(huo)特(te)定(ding)生長(chang)因(yin)子(zi)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部分(fen)細胞(bao)需(xu)添加胰(yi)島(dao)素(su)、EGF 等。

- 避(bi)免頻(pin)繁更(geng)換培(pei)養(yang)基(ji)品(pin)牌或(huo)批次(ci)，減(jian)少細胞適(shi)應(ying)壓(ya)力(li)。

2. 貼壁與傳代

- 原(yuan)代(dai)細胞(bao)貼壁能(neng)力(li)較(jiao)弱(ruo)，可能(neng)需(xu)要包(bao)被(bei)培(pei)養(yang)皿(min)（如(ru)膠原(yuan)蛋(dan)白、多聚賴(lai)氨(an)酸(suan)）。

- 傳(chuan)代時密(mi)度建(jian)議控制在(zai) 70%-80%，過(guo)度匯(hui)合會導(dao)致(zhi)接觸(chu)抑制和(he)分化(hua)。

三(san)、汙(wu)染控制

1. 無(wu)菌操(cao)作

- 全程(cheng)在(zai)超(chao)凈(jing)臺操(cao)作，使用(yong)壹(yi)次(ci)性耗(hao)材(cai)，避(bi)免交叉汙(wu)染。

- 培(pei)養(yang)基(ji)中可添加雙抗(kang)，但(dan)長(chang)期(qi)使(shi)用(yong)可能(neng)影(ying)響(xiang)細胞活(huo)性。

2. 支原(yuan)體(ti)檢測(ce)

- 定(ding)期(qi)檢(jian)測(ce)支原(yuan)體(ti)汙(wu)染（如(ru) PCR 法），汙(wu)染後(hou)需(xu)及(ji)時丟(diu)棄(qi)細(xi)胞。

四、狀(zhuang)態監(jian)控

1. 日(ri)常(chang)觀察(cha)

- 每(mei)天(tian)檢查(zha)細胞(bao)形(xing)態、密(mi)度及(ji)培(pei)養(yang)基(ji)顏(yan)色(se)，及(ji)時更(geng)換培(pei)養(yang)基(ji)（通常(chang)每(mei) 2-3 天(tian)換液(ye)壹(yi)次(ci)）。

- 異(yi)常(chang)形(xing)態（如(ru)細胞(bao)變(bian)圓(yuan)、碎(sui)片增多）可能(neng)提(ti)示汙(wu)染或(huo)營養(yang)不(bu)足(zu)。

2. 傳(chuan)代與凍(dong)存

- 原(yuan)代(dai)細胞(bao)分裂(lie)次(ci)數(shu)有限（壹(yi)般(ban) 5-10 代(dai)），需(xu)及(ji)時凍(dong)存早(zao)期(qi)代(dai)次(ci)細(xi)胞。

- 凍(dong)存液(ye)建(jian)議使(shi)用 DMSO+血(xue)清(qing)（或(huo)專(zhuan)用凍(dong)存培(pei)養(yang)基(ji)），梯度降溫後(hou)液氮保(bao)存。