【概要描述】人(ren)前列腺成纖維(wei)細(xi)胞(bao)公司(si)正在出售(shou)的(de)產(chan)品(pin)：SW620+luc人(ren)結直腸腺癌細(xi)胞(bao)+luc人(ren)非(fei)小(xiao)細(xi)胞(bao)肺(fei)癌細(xi)胞(bao)NCI-H1395(STR鑒定正確(que))人(ren)胚胎滋(zi)養細(xi)胞(bao)HTR-8/Svneo (STR鑒定正確(que))人(ren)乳腺癌細(xi)胞(bao)帶紅(hong)色(se)熒光(guang)MDA-MB-468+RFP(STR鑒(jian)定(ding)正確(que))小(xiao)鼠胰(yi)島β細(xi)胞(bao)株(zhu)Min6（種(zhong)屬(shu)鑒(jian)定(ding)）豬(zhu)腎細(xi)胞(bao)系PK15（種屬(shu)鑒(jian)定(ding)）人(ren)肺(fei)腺癌(ai)耐(nai)株(zhu)帶(dai)熒光(guang)酶(mei)A549+DDP+LUC (STR鑒(jian)定正確(que))人(ren)腎癌Wil

人(ren)前列腺成纖維(wei)分(fen)離(li)自前(qian)列(lie)腺(xian)組織；前(qian)列腺（Prostate）是雄(xiong)性的(de)性(xing)腺(xian)器(qi)官(guan)；前(qian)列(lie)腺是不成對的(de)實(shi)質性(xing)器(qi)宮(gong)，由(you)腺(xian)組織和(he)肌組織構成。前(qian)列腺(xian)如栗(li)子，底(di)朝(chao)上(shang)，與膀胱(guang)相貼，尖朝(chao)下(xia)，抵泌(mi)尿生(sheng)殖膈(ge)，前(qian)面貼恥骨(gu)聯(lian)合，後面依直腸。前列腺腺(xian)體(ti)的(de)中(zhong)間(jian)有尿道(dao)穿(chuan)過(guo)，扼守(shou)著尿(niao)道(dao)上(shang)口，所以(yi)，前(qian)列腺(xian)有問題(ti)時，排(pai)尿首(shou)先(xian)受影(ying)響。前列(lie)腺是機(ji)體非(fei)常少(shao)有的(de)，具有內、外(wai)雙重分(fen)泌(mi)功(gong)能的(de)性(xing)分(fen)泌(mi)腺。作(zuo)為外(wai)分(fen)泌(mi)腺，前(qian)列腺每(mei)天分(fen)泌(mi)前列(lie)腺液(ye)，是構成精(jing)液(ye)主要成分(fen)；作(zuo)為內(nei)分(fen)泌(mi)腺，前(qian)列腺分(fen)泌(mi)的(de)激(ji)素稱(cheng)為“前(qian)列(lie)腺素"。成纖維(wei)細(xi)胞(bao)（Fibroblast）是疏松結締組織的(de)主要細(xi)胞(bao)成分(fen)，由(you)胚胎(tai)時期(qi)的(de)間(jian)充質細(xi)胞(bao)分(fen)化而來(lai)。成纖維(wei)細(xi)胞(bao)較(jiao)大(da)，輪(lun)廓(kuo)清(qing)楚(chu)，多(duo)為突起的(de)紡錘形或星(xing)形(xing)的(de)扁(bian)平(ping)狀(zhuang)結構，其(qi)細(xi)胞(bao)核(he)呈規則的(de)卵(luan)圓(yuan)形，核(he)仁大(da)而明(ming)顯。成纖維(wei)細(xi)胞(bao)功(gong)能活動(dong)旺(wang)盛，細(xi)胞(bao)質嗜弱(ruo)堿(jian)性，具明(ming)顯的(de)蛋(dan)白質合(he)成和(he)分(fen)泌(mi)活動(dong)，在壹(yi)定(ding)條(tiao)件下，它(ta)可(ke)以實(shi)現(xian)跟纖維(wei)細(xi)胞(bao)的(de)互(hu)相轉(zhuan)化；成纖維(wei)細(xi)胞(bao)對不同程度(du)的(de)細(xi)胞(bao)變(bian)性(xing)、壞死(si)和(he)組織缺損(sun)的(de)修(xiu)復有著十(shi)分(fen)重要的(de)作(zuo)用(yong)。剛(gang)分(fen)離(li)的(de)前(qian)列(lie)腺(xian)成纖維(wei)細(xi)胞(bao)呈圓形(xing)、折(zhe)光(guang)性(xing)良(liang)好(hao)，懸浮(fu)於(yu)培(pei)養基(ji)中(zhong)。30min細(xi)胞(bao)貼壁，其(qi)中(zhong)部分(fen)開(kai)始伸出(chu)偽(wei)足(zu)，表(biao)現為小(xiao)的(de)突起；6h後細(xi)胞(bao)基本貼壁wan全，伸展成梭(suo)形，胞(bao)核(he)清(qing)晰，分(fen)布(bu)較(jiao)均勻，散在生長(chang)，不聚(ju)集成團(tuan)；細(xi)胞(bao)生長迅速(su)，5-7天(tian)即呈融合狀(zhuang)態(tai)，細(xi)胞(bao)排(pai)列緊(jin)密(mi)，有的(de)交(jiao)叉(cha)重疊(die)生(sheng)長，平(ping)坦(tan)、胞體較(jiao)大(da)，細(xi)胞(bao)質透(tou)明(ming)，細(xi)胞(bao)核(he)較(jiao)大(da)，呈橢圓形，顏色(se)淡(dan)。細(xi)胞(bao)融合，並彼(bi)此(ci)連(lian)接(jie)成網(wang)狀(zhuang)；細(xi)胞(bao)呈突起的(de)紡錘形或星(xing)形(xing)的(de)扁(bian)平(ping)分(fen)布(bu)。
方(fang)法(fa)簡介(jie)：

公司(si)實(shi)驗(yan)室分(fen)離(li)的(de)人(ren)前列腺成纖維(wei)采用(yong)yi蛋白酶(mei)-膠(jiao)原酶(mei)混(hun)合消化法(fa)結合差速(su)貼壁法(fa)制(zhi)備(bei)而來(lai)，細(xi)胞(bao)總量(liang)約(yue)為5×10?cells/瓶(ping)。
質量(liang)檢測：

公司(si)實(shi)驗(yan)室分(fen)離(li)的(de)人(ren)前列腺成纖維(wei)經Vimentin免疫(yi)熒光(guang)鑒(jian)定(ding)，純度(du)可(ke)達90%以(yi)上(shang)，且(qie)不含有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體、細(xi)菌(jun)、酵母和(he)真(zhen)菌(jun)等。

本公司(si)所有產品(pin)僅(jin)供科學(xue)實(shi)驗(yan)，不做其(qi)他(ta)科學(xue)實(shi)驗(yan)外(wai)的(de)使用(yong)！

培(pei)養基(ji) 含FBS、生長(chang)添(tian)加劑、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液(ye)頻(pin)率(lv) 每(mei)2-3天換(huan)液(ye)壹(yi)次(ci)

生長(chang)特(te)性(xing) 貼壁

細(xi)胞(bao)形態(tai) 成纖維(wei)細(xi)胞(bao)樣

傳代(dai)特(te)性(xing) 可(ke)傳5代左(zuo)右(you)；3代以(yi)內(nei)狀(zhuang)態(tai)

消化液(ye) 0.25%yi蛋白酶(mei)

培(pei)養條(tiao)件 氣相：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備工(gong)作

1. 實驗(yan)器(qi)材(cai)準(zhun)備：準(zhun)備無(wu)菌的(de)培(pei)養皿(min)、培(pei)養瓶(ping)、移(yi)液(ye)管(guan)、離(li)心(xin)管(guan)、手(shou)術(shu)器械等(deng)，並(bing)進行高壓(ya)滅菌(jun)或其(qi)他(ta)合適(shi)的(de)消(xiao)毒(du)處(chu)理。

2. 試劑準(zhun)備：配(pei)制或購(gou)買(mai)合(he)適(shi)的(de)培(pei)養基(ji)、消(xiao)化酶（如、膠原(yuan)酶(mei)等(deng)）、胎牛(niu)血清(qing)、雙抗(kang)等(deng)試劑，確保(bao)其(qi)無(wu)菌(jun)且(qie)在有效(xiao)期(qi)內(nei)。

3. 實驗(yan)動(dong)物或組織來(lai)源準(zhun)備：根(gen)據實(shi)驗(yan)需(xu)求(qiu)，選(xuan)擇(ze)合(he)適(shi)的(de)動(dong)物並(bing)進行相應(ying)的(de)麻(ma)醉(zui)或處(chu)死(si)，獲(huo)取所需(xu)組織；或從已(yi)有的(de)組織樣(yang)本庫中獲(huo)取組織。

取材與處(chu)理

1. 取材：在無菌(jun)條件下，迅速(su)取出目(mu)標組織，盡(jin)量(liang)減少(shao)對組織的(de)損(sun)傷，並去除多余(yu)的(de)脂(zhi)肪(fang)、結締組織等(deng)非(fei)目(mu)的(de)組織。

2. 清洗：將(jiang)取出的(de)組織用(yong)預(yu)冷(leng)的(de)無(wu)菌(jun)PBS沖(chong)洗數(shu)次(ci)，以去(qu)除血液(ye)和(he)雜質。

3. 剪切：將(jiang)組織剪成約(yue)1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊(kuai)，以(yi)便(bian)後續(xu)消(xiao)化。

細(xi)胞(bao)分(fen)離(li)

1. 消化：將(jiang)剪碎(sui)的(de)組織塊(kuai)放入含有適量(liang)消(xiao)化酶的(de)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，在37℃恒溫(wen)搖(yao)床或培(pei)養箱(xiang)中(zhong)消化壹(yi)段(duan)時間(jian)。期(qi)間(jian)可(ke)輕(qing)輕(qing)搖晃(huang)離(li)心(xin)管(guan)，使消化更均勻。

2. 終止(zhi)消(xiao)化：當(dang)組織塊(kuai)大(da)部分(fen)被(bei)消化成單細(xi)胞(bao)懸液(ye)或小細(xi)胞(bao)團時，加入含血清(qing)的(de)培(pei)養基(ji)終止(zhi)消(xiao)化。

3. 過(guo)濾與離(li)心(xin)：用(yong)細(xi)胞(bao)篩(shai)過(guo)濾細(xi)胞(bao)懸液(ye)，去(qu)除未(wei)消化的(de)組織碎(sui)片(pian)，然(ran)後將(jiang)濾(lv)液(ye)以(yi)適(shi)當(dang)的(de)轉(zhuan)速(su)離(li)心(xin)，收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)沈澱。

細(xi)胞(bao)觀(guan)察(cha)與檢測

1. 日常觀(guan)察(cha)：每(mei)天用(yong)倒(dao)置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)的(de)形(xing)態(tai)、生長(chang)狀(zhuang)態(tai)、密(mi)度(du)等，記錄細(xi)胞(bao)的(de)變(bian)化情(qing)況(kuang)，如發現(xian)細(xi)胞(bao)汙染或異(yi)常，及時采取相應(ying)措施。
2. 細(xi)胞(bao)計數(shu)與活力檢測：在需要時，可(ke)采用(yong)臺(tai)盼藍染色(se)等(deng)方(fang)法(fa)對細(xi)胞(bao)進行計(ji)數(shu)和(he)活力檢測，以了(le)解細(xi)胞(bao)的(de)生(sheng)長(chang)情(qing)況(kuang)和(he)健康(kang)狀(zhuang)態(tai)。

壹(yi)、取材與分(fen)離(li)

1. 快速(su)操(cao)作(zuo)

- 組織取材後需立即處(chu)理，避(bi)免長時間(jian)暴(bao)露(lu)於(yu)室溫(wen)或非(fei)營養環境(jing)。

- 使用(yong)無(wu)菌(jun) PBS 或生理鹽水沖洗組織，去(qu)除血液(ye)、雜(za)質。

2. 消化酶選(xuan)擇(ze)

- 根(gen)據組織類(lei)型選(xuan)擇(ze)消(xiao)化酶，避免過(guo)度(du)消化導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)損(sun)傷。

- 消化時間(jian)需(xu)嚴(yan)格(ge)控制(zhi)（通(tong)常 10-30 分(fen)鐘），可(ke)通過(guo)顯微(wei)鏡(jing)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)解離(li)狀(zhuang)態(tai)。

二、培(pei)養條(tiao)件優化

1. 培(pei)養基(ji)選(xuan)擇(ze)

- 使用(yong)含血清(qing)或特(te)定(ding)生(sheng)長(chang)因子的(de)培(pei)養基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部分(fen)細(xi)胞(bao)需添(tian)加胰島素、EGF 等(deng)。

- 避免頻(pin)繁更換(huan)培(pei)養基(ji)品(pin)牌(pai)或批次(ci)，減少(shao)細(xi)胞(bao)適應壓力。

2. 貼壁與傳代(dai)

- 原代(dai)細(xi)胞(bao)貼壁能力較(jiao)弱(ruo)，可(ke)能需(xu)要包被(bei)培(pei)養皿(min)（如(ru)膠原蛋白、多(duo)聚(ju)賴氨(an)酸）。

- 傳代(dai)時密(mi)度(du)建議控制(zhi)在 70%-80%，過(guo)度(du)匯(hui)合會導(dao)致(zhi)接(jie)觸抑(yi)制(zhi)和(he)分(fen)化。

三、汙(wu)染(ran)控制(zhi)

1. 無菌(jun)操(cao)作(zuo)

- 全程(cheng)在超凈(jing)臺(tai)操(cao)作(zuo)，使用(yong)壹(yi)次(ci)性耗(hao)材，避(bi)免交叉汙染。

- 培(pei)養基(ji)中(zhong)可(ke)添(tian)加雙抗(kang)，但(dan)長期(qi)使用(yong)可(ke)能影(ying)響細(xi)胞(bao)活性。

2. 支(zhi)原(yuan)體檢測

- 定期(qi)檢測支(zhi)原(yuan)體汙染（如(ru) PCR 法(fa)），汙(wu)染(ran)後需及時丟棄(qi)細(xi)胞(bao)。

四、狀(zhuang)態(tai)監控

1. 日常觀(guan)察(cha)

- 每(mei)天檢查(zha)細(xi)胞(bao)形態(tai)、密(mi)度(du)及培(pei)養基(ji)顏(yan)色，及時更換(huan)培(pei)養基(ji)（通(tong)常每(mei) 2-3 天換(huan)液(ye)壹(yi)次(ci)）。

- 異(yi)常形態(tai)（如細(xi)胞(bao)變(bian)圓(yuan)、碎(sui)片(pian)增多(duo)）可(ke)能提(ti)示(shi)汙染或營養不足(zu)。

2. 傳代(dai)與凍(dong)存(cun)

- 原代(dai)細(xi)胞(bao)分(fen)裂次(ci)數(shu)有限（壹(yi)般 5-10 代(dai)），需及時凍(dong)存(cun)早期(qi)代(dai)次(ci)細(xi)胞(bao)。

- 凍(dong)存(cun)液(ye)建議使用(yong) DMSO+血(xue)清(qing)（或專用(yong)凍(dong)存(cun)培(pei)養基(ji)），梯(ti)度(du)降(jiang)溫(wen)後液(ye)氮(dan)保(bao)存(cun)。