【概(gai)要(yao)描述】人肺微血管(guan)內(nei)皮(pi)細胞公司正(zheng)在出售(shou)的產品：雞卵泡基膜(mo)細(xi)胞(bao)Anaerostipes hadrus人肺大動脈內(nei)皮(pi)細胞Apibacter raozihei小鼠肺血(xue)管(guan)平(ping)滑肌(ji)細(xi)胞Arthrographis kalrae豬(zhu)脂肪間(jian)充質(zhi)幹(gan)細(xi)胞Aspergillus udagawae大鼠肺血(xue)管(guan)平(ping)滑肌(ji)細(xi)胞B646L gene in pet-20b(+)0大腸桿(gan)菌(jun)

本(ben)公司所有(you)產品僅供(gong)科(ke)學實(shi)驗，不做(zuo)其(qi)他科學實(shi)驗外的(de)使(shi)用(yong)！

人肺微血管(guan)內(nei)皮(pi)分離(li)自(zi)肺組織(zhi)；肺是(shi)機體的(de)呼(hu)吸(xi)器官，位(wei)於胸(xiong)腔(qiang)，左(zuo)右各(ge)壹(yi)，覆蓋於心之(zhi)上(shang)。肺(fei)有(you)分(fen)葉，左(zuo)二(er)右三(san)，共五葉。肺經(jing)肺(fei)系(指氣(qi)管(guan)、支(zhi)氣(qi)管(guan)等(deng))與(yu)喉(hou)、鼻(bi)相連，故稱喉(hou)為肺(fei)之(zhi)門戶(hu)，鼻(bi)為(wei)肺(fei)之(zhi)外(wai)竅(qiao)。微血管(guan)內(nei)皮(pi)細胞密(mi)切(qie)參與(yu)包括(kuo)再(zai)生(sheng)、發育、傷(shang)口(kou)愈(yu)合(he)等壹(yi)系列生(sheng)理及(ji)炎(yan)癥(zheng)反應(ying)。細胞呈梭形(xing)或多(duo)角(jiao)形(xing)，形(xing)成單層後(hou)呈鵝卵石(shi)樣或(huo)鋪(pu)路石(shi)樣排(pai)列。肺(fei)微血管(guan)內(nei)皮(pi)細胞構(gou)成半選擇(ze)性(xing)屏障(zhang)，該(gai)屏(ping)障(zhang)對於(yu)肺(fei)氣體交(jiao)換(huan)，調節液體和可(ke)溶(rong)物(wu)在血(xue)液與肺(fei)間質之(zhi)間(jian)的(de)流(liu)動(dong)具有(you)重(zhong)要(yao)意義(yi)。

方法簡(jian)介(jie)：

實驗室分(fen)離(li)的(de)人肺微血管(guan)內(nei)皮(pi)采(cai)用組織(zhi)貼塊(kuai)法並結(jie)合(he)內(nei)皮(pi)細胞專(zhuan)用(yong)培養(yang)基培養(yang)篩選制(zhi)備而來(lai)，細(xi)胞總量(liang)約(yue)為(wei)5×10⁵cells/瓶(ping)。

質(zhi)量(liang)檢(jian)測(ce)：

實(shi)驗室分(fen)離(li)的(de)人肺微血管(guan)內(nei)皮(pi)經CD31免疫(yi)熒(ying)光鑒(jian)定，純(chun)度可(ke)達(da)90%以(yi)上(shang)，且(qie)不(bu)含有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體、細(xi)菌(jun)、酵母和真菌(jun)等(deng)。

包(bao)被(bei)條件(jian)PLL（0.1mg/ml）或明(ming)膠(jiao)（0.1%）

培養(yang)基含(han)FBS、生(sheng)長添(tian)加劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液頻率每(mei)2-3天換(huan)液壹(yi)次(ci)

生(sheng)長特(te)性(xing)貼壁(bi)

細胞形態(tai)內(nei)皮(pi)細胞樣(yang)

傳(chuan)代(dai)特(te)性可(ke)傳(chuan)2-3代(dai)

消化(hua)液0.25%

準(zhun)備工作

1. 實(shi)驗器材準(zhun)備：準(zhun)備無(wu)菌(jun)的(de)培養(yang)皿(min)、培養(yang)瓶(ping)、移液管(guan)、離(li)心(xin)管(guan)、手(shou)術器械(xie)等，並(bing)進(jin)行(xing)高壓滅菌或其他合(he)適的(de)消毒處(chu)理。

2. 試(shi)劑(ji)準(zhun)備：配(pei)制(zhi)或購買(mai)合(he)適(shi)的(de)培養(yang)基、消化(hua)酶(mei)（如(ru)、膠(jiao)原酶(mei)等(deng)）、胎(tai)牛(niu)血清、雙抗等(deng)試(shi)劑(ji)，確(que)保其(qi)無菌(jun)且(qie)在有(you)效(xiao)期內(nei)。

3. 實(shi)驗動物(wu)或(huo)組織(zhi)來源(yuan)準(zhun)備：根(gen)據實驗需求，選擇(ze)合(he)適的動(dong)物(wu)並進(jin)行(xing)相應的(de)麻醉或(huo)處(chu)死(si)，獲(huo)取(qu)所需組織(zhi)；或從已(yi)有(you)的(de)組織(zhi)樣本(ben)庫中(zhong)獲(huo)取(qu)組織(zhi)。

取(qu)材(cai)與(yu)處(chu)理

1. 取(qu)材(cai)：在無(wu)菌(jun)條件(jian)下，迅速取(qu)出目(mu)標組織(zhi)，盡量(liang)減(jian)少(shao)對組織(zhi)的損(sun)傷，並(bing)去除(chu)多(duo)余(yu)的(de)脂肪、結(jie)締組織(zhi)等非(fei)目(mu)的組織(zhi)。

2. 清洗：將(jiang)取(qu)出的(de)組織(zhi)用預冷(leng)的無(wu)菌(jun)PBS沖(chong)洗數次(ci)，以(yi)去除(chu)血液和雜質。

3. 剪(jian)切(qie)：將(jiang)組織(zhi)剪成約(yue)1 - 2mm³的(de)小塊(kuai)，以(yi)便後(hou)續消化(hua)。

細胞(bao)分離(li)

1. 消化(hua)：將(jiang)剪碎(sui)的組織(zhi)塊(kuai)放(fang)入(ru)含有(you)適(shi)量(liang)消化(hua)酶(mei)的(de)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，在37℃恒溫搖(yao)床(chuang)或(huo)培養(yang)箱中(zhong)消化(hua)壹(yi)段時間(jian)。期(qi)間可(ke)輕(qing)輕(qing)搖晃(huang)離(li)心(xin)管(guan)，使(shi)消化(hua)更均勻(yun)。

2. 終止(zhi)消化(hua)：當(dang)組織(zhi)塊(kuai)大部分(fen)被(bei)消化(hua)成單細胞(bao)懸液或小細胞(bao)團時(shi)，加入(ru)含血清的培養(yang)基終止(zhi)消化(hua)。

3. 過濾(lv)與離(li)心(xin)：用細胞篩過濾(lv)細胞(bao)懸液，去除(chu)未消化(hua)的組織(zhi)碎片(pian)，然後將(jiang)濾(lv)液以(yi)適當(dang)的(de)轉(zhuan)速離(li)心(xin)，收(shou)集(ji)細(xi)胞沈(chen)澱(dian)。

細(xi)胞觀(guan)察與檢(jian)測(ce)

1. 日常(chang)觀(guan)察：每(mei)天用(yong)倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀(guan)察細胞(bao)的(de)形態(tai)、生(sheng)長狀(zhuang)態(tai)、密(mi)度等(deng)，記錄細胞(bao)的變(bian)化(hua)情(qing)況，如(ru)發(fa)現(xian)細(xi)胞汙(wu)染(ran)或(huo)異常(chang)，及(ji)時采(cai)取(qu)相應措(cuo)施。
2. 細胞計數(shu)與活力(li)檢測(ce)：在需要時(shi)，可(ke)采(cai)用臺盼藍染(ran)色(se)等(deng)方法對細(xi)胞(bao)進(jin)行(xing)計(ji)數(shu)和活力(li)檢測(ce)，以(yi)了(le)解細(xi)胞(bao)的生(sheng)長情(qing)況和健(jian)康(kang)狀態(tai)。

壹(yi)、取(qu)材(cai)與(yu)分(fen)離(li)

1. 快(kuai)速(su)操作

- 組織(zhi)取(qu)材(cai)後(hou)需立即(ji)處理，避(bi)免(mian)長時(shi)間(jian)暴露(lu)於室溫(wen)或非(fei)營(ying)養(yang)環境(jing)。

- 使(shi)用(yong)無菌(jun) PBS 或(huo)生理鹽(yan)水沖洗組織(zhi)，去除(chu)血液、雜質。

2. 消化(hua)酶(mei)選擇(ze)

- 根(gen)據組織(zhi)類型(xing)選擇(ze)消化(hua)酶(mei)，避(bi)免(mian)過度消化(hua)導致細(xi)胞(bao)損傷(shang)。

- 消化(hua)時間(jian)需嚴格控(kong)制(zhi)（通(tong)常(chang) 10-30 分鐘），可(ke)通(tong)過顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀(guan)察細胞(bao)解離(li)狀(zhuang)態(tai)。

二(er)、培養(yang)條件(jian)優化(hua)

1. 培養(yang)基選擇(ze)

- 使(shi)用(yong)含血(xue)清或特(te)定(ding)生長因(yin)子的(de)培養(yang)基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分(fen)細(xi)胞(bao)需添(tian)加胰(yi)島素、EGF 等(deng)。

- 避(bi)免(mian)頻繁更換培養(yang)基品(pin)牌或(huo)批(pi)次(ci)，減(jian)少(shao)細(xi)胞(bao)適(shi)應壓力(li)。

2. 貼壁(bi)與傳(chuan)代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞貼壁(bi)能力(li)較(jiao)弱，可(ke)能需要包(bao)被(bei)培養(yang)皿(min)（如(ru)膠(jiao)原蛋(dan)白、多(duo)聚(ju)賴氨酸(suan)）。

- 傳(chuan)代(dai)時(shi)密度建(jian)議控(kong)制(zhi)在 70%-80%，過度匯合(he)會(hui)導致接(jie)觸(chu)抑制(zhi)和分化(hua)。

三(san)、汙(wu)染(ran)控(kong)制(zhi)

1. 無菌操(cao)作(zuo)

- 全程(cheng)在超凈臺操作，使(shi)用(yong)壹(yi)次(ci)性(xing)耗材，避免(mian)交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran)。

- 培養(yang)基中(zhong)可(ke)添(tian)加雙抗，但(dan)長期(qi)使(shi)用(yong)可(ke)能影響(xiang)細(xi)胞(bao)活性。

2. 支(zhi)原(yuan)體檢(jian)測(ce)

- 定期(qi)檢測支(zhi)原(yuan)體汙(wu)染(ran)（如(ru) PCR 法），汙(wu)染(ran)後(hou)需及(ji)時丟(diu)棄細(xi)胞(bao)。

四、狀(zhuang)態(tai)監(jian)控(kong)

1. 日常(chang)觀(guan)察

- 每(mei)天檢(jian)查細胞(bao)形態(tai)、密(mi)度及(ji)培養(yang)基顏色(se)，及(ji)時更換培養(yang)基（通(tong)常(chang)每(mei) 2-3 天換(huan)液壹(yi)次(ci)）。

- 異(yi)常形態(tai)（如(ru)細(xi)胞(bao)變(bian)圓(yuan)、碎(sui)片(pian)增(zeng)多(duo)）可(ke)能提示汙(wu)染(ran)或(huo)營(ying)養(yang)不(bu)足。

2. 傳(chuan)代(dai)與(yu)凍存

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞分裂次(ci)數(shu)有(you)限(xian)（壹(yi)般(ban) 5-10 代(dai)），需及(ji)時凍存早(zao)期代(dai)次(ci)細(xi)胞。

- 凍存液建(jian)議使(shi)用(yong) DMSO+血清（或專(zhuan)用(yong)凍存培養(yang)基），梯(ti)度降(jiang)溫後(hou)液氮保存。