【概(gai)要描(miao)述】豬前(qian)脂肪細胞的相關產品(pin)：HCC827+LUC人非小細(xi)胞人原(yuan)代(dai)蛻(tui)膜腺成纖維細(xi)胞人原(yuan)代(dai)臍靜脈(mai)平滑肌(ji)細(xi)胞兔原(yuan)代(dai)B淋巴細胞人原(yuan)代(dai)橫(heng)紋(wen)肌(ji)細(xi)胞小鼠(shu)原(yuan)代(dai)基質細胞人原(yuan)代(dai)支氣管(guan)上(shang)皮細胞大鼠(shu)原(yuan)代(dai)棕(zong)色脂肪幹(gan)細(xi)胞大鼠(shu)原(yuan)代(dai)杏(xing)仁核(he)神(shen)經(jing)元(yuan)細(xi)胞小鼠(shu)原(yuan)代(dai)卵巢(chao)顆粒細(xi)胞

豬前(qian)脂肪細胞

培(pei)養(yang)基 含(han)FBS、生長(chang)添加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液頻率(lv) 每2-3天(tian)換(huan)液壹(yi)次

生長(chang)特性(xing) 貼(tie)壁

細胞形(xing)態 梭形(xing)、多角(jiao)形(xing)

傳代特(te)性(xing) 可傳3代(dai)左右

消化液 0.25%yi蛋白酶

培養條(tiao)件(jian) 氣相：空(kong)氣，95%；CO2，5%

豬前(qian)脂肪分離(li)自脂肪組織(zhi)；脂肪組織(zhi)主要由(you)大(da)量(liang)群集(ji)的脂肪細胞構(gou)成，聚集成團的脂肪細胞由(you)薄(bo)層疏松結(jie)締組織(zhi)分(fen)隔(ge)成小葉(ye)；貯(zhu)存(cun)的脂肪，在需(xu)要時可迅速分解(jie)成甘(gan)油(you)和脂肪酸，經血(xue)液輸(shu)送到各(ge)組織(zhi)以(yi)供(gong)利用。它們(men)影(ying)響胰(yi)島(dao)素(su)敏(min)感性、血壓水(shui)平、內皮(pi)功能(neng)、纖溶活動及(ji)炎(yan)癥(zheng)反(fan)應(ying)，參(can)與多種(zhong)重(zhong)要病(bing)理生理(li)過程；脂肪組織(zhi)已(yi)由(you)過(guo)去(qu)單(dan)純作(zuo)為能(neng)量儲存(cun)的器官而成為壹個極其重(zhong)要的內分(fen)泌系(xi)統(tong)。脂肪組織(zhi)在體(ti)內含(han)有(you)兩種主要的細胞：壹種(zhong)是(shi)在胞漿內積聚(ju)脂滴(di)的成熟脂肪細胞；另(ling)壹種(zhong)是(shi)雖未(wei)在胞漿內積聚(ju)脂滴(di)但(dan)有(you)這(zhe)種潛(qian)能(neng)的前(qian)脂肪細胞。前(qian)脂肪細胞呈梭形(xing)，有(you)分裂和增殖(zhi)的能(neng)力(li)；成熟的脂肪細胞呈圓形(xing)，已經(jing)失去(qu)了(le)分(fen)裂及(ji)增殖(zhi)的能(neng)力(li)。由(you)於(yu)前(qian)脂肪細胞是(shi)壹類(lei)具(ju)有(you)增殖(zhi)和向脂肪細胞分化能(neng)力(li)的特異(yi)化前(qian)體(ti)細胞，與肥(fei)胖(pang)有(you)著非(fei)常(chang)密切(qie)的關系(xi)。前(qian)脂肪細胞是(shi)壹種(zhong)類(lei)成纖維細(xi)胞，在演(yan)變的過程中不斷吸收(shou)脂質，最終成為成熟的脂肪細胞。前(qian)脂肪細胞對外界(jie)機(ji)械損(sun)傷(shang)的抵抗力(li)較(jiao)強(qiang)，可望成為軟組織(zhi)缺損(sun)的有(you)益填充(chong)物。
方(fang)法簡介(jie)：

公(gong)司實(shi)驗室分離(li)的豬前(qian)脂肪采用膠(jiao)原(yuan)酶(mei)消化法制(zhi)備(bei)而來(lai)，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測(ce)：

公(gong)司實(shi)驗室分離(li)的豬前(qian)脂肪經油(you)紅(hong)O染(ran)色檢測(ce)，純度可達(da)90%以(yi)上(shang)，且不含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體(ti)、細菌、酵(jiao)母和真(zhen)菌等(deng)。

壹(yi)、細胞培養(yang)

1取材(cai) 在無(wu)菌環境下(xia)從(cong)機(ji)體取(qu)出某種(zhong)組織(zhi)細(xi)胞（視(shi)實(shi)驗目(mu)的而定），經過壹(yi)定的處理（如(ru)消化分散細胞、分離(li)等(deng)）後(hou)接入培養(yang)器血中，這(zhe)壹過(guo)程稱為取材(cai)。如(ru)是(shi)細胞株(zhu)的擴大培(pei)養(yang)則(ze)無(wu)取材(cai)這(zhe)壹過(guo)程。機(ji)體取(qu)出的組織(zhi)細(xi)胞的培養稱為原(yuan)代(dai)培養。2培養 將取(qu)得(de)的組織(zhi)細(xi)胞接入培養(yang)瓶或(huo)培(pei)養(yang)板(ban)中的過程稱為培養(yang)。3凍存(cun)及(ji)復(fu)蘇(su)（可參(can)閱後(hou)面有(you)關章節）為了保存(cun)細(xi)胞，特別(bie)是(shi)不易獲(huo)得(de)的突變型(xing)細胞或(huo)細(xi)胞株(zhu)，要將細(xi)胞凍存(cun)。凍存(cun)的溫度壹(yi)般(ban)用(yong)液氮的溫度－196℃，將細(xi)胞收(shou)集至(zhi)凍存(cun)管(guan)中加入含(han)保護劑（壹般(ban)為二甲(jia)亞(ya)碸(feng)或(huo)甘(gan)油(you)）的培養基，以壹定的冷卻速度凍存(cun)，最(zui)終保存(cun)於(yu)液氮中。在極(ji)低的溫度下(xia)，細胞保存(cun)的時間幾乎(hu)是(shi)無(wu)限的。復蘇壹般(ban)采用快融(rong)方(fang)法，即(ji)從(cong)液氮中取出凍存(cun)管(guan)後(hou)，立即(ji)放(fang)入37℃水中，使(shi)之在壹(yi)分鐘內迅速融解(jie)。然(ran)後(hou)將細(xi)胞轉入培養(yang)器皿中進行培養(yang)。

二、原(yuan)代(dai)細胞分離(li)

凡是(shi)來(lai)源(yuan)於胚(pei)胎、組織(zhi)器官及(ji)外周(zhou)血，經特殊(shu)分離(li)方(fang)法制(zhi)備(bei)而來(lai)的原(yuan)初(chu)培(pei)養的細胞稱之為原(yuan)代(dai)細胞。1懸浮(fu)細胞的分離(li)方(fang)法組織(zhi)材(cai)料(liao)若來(lai)自血(xue)液、羊水(shui)、胸水(shui)或(huo)腹(fu)水(shui)的懸液材(cai)料(liao)，的方(fang)法是(shi)采用1000r/min的低速離(li)心10分鐘。經離(li)心後(hou)由(you)於(yu)各(ge)種細(xi)胞的比(bi)重(zhong)不同可在分(fen)層液中形(xing)成不同層，這(zhe)樣可根(gen)據(ju)需(xu)要收(shou)獲(huo)目(mu)的細胞。2實(shi)體(ti)組織(zhi)材(cai)料(liao)的分離(li)方(fang)法對(dui)於實(shi)體(ti)組織(zhi)材(cai)料(liao)，由(you)於(yu)細(xi)胞間結合(he)緊密(mi)，為了使(shi)組織(zhi)中的細胞充(chong)分分(fen)散，形(xing)成細胞懸液，可采用機(ji)械分散法（物(wu)理(li)裂解(jie)）和消化分離(li)法。

三、細胞增殖(zhi)檢(jian)測技(ji)術

目(mu)前(qian)主要有(you)兩種用於檢(jian)測細胞增殖(zhi)能(neng)力(li)的方(fang)法。壹(yi)種是(shi)直接的方(fang)法，通(tong)過直接測(ce)定進行分(fen)裂

的細胞數來(lai)評價(jia)細(xi)胞的增殖(zhi)能(neng)力(li)。另(ling)壹種(zhong)是(shi)間接的方(fang)法，即(ji)細(xi)胞活力(li)（cell viability）檢(jian)測(ce)方(fang)法，通(tong)過檢測樣品(pin)中健康細(xi)胞的數目來(lai)評價(jia)細(xi)胞的增殖(zhi)能(neng)力(li)。顯(xian)然(ran)，細(xi)胞活力(li)檢(jian)測(ce)法(fa)並(bing)不能(neng)最終證明檢(jian)測(ce)樣品(pin)中的細胞是(shi)否在增殖(zhi)。如(ru)細(xi)胞在某壹(yi)培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)下會自發(fa)啟(qi)動雕亡(wang)程序，但藥(yao)物的幹(gan)擾(rao)可抑(yi)制(zhi)雕亡(wang)的發(fa)生；這(zhe)時若采用細(xi)胞活力(li)檢(jian)測(ce)法(fa)，顯(xian)然可以區分兩種條(tiao)件(jian)下的細胞數量(liang)，但(dan)我(wo)們(men)並(bing)不能(neng)從(cong)藥(yao)物幹(gan)擾(rao)組細胞數大(da)於(yu)對照組的事實(shi)說明藥(yao)物可促進(jin)細胞增殖(zhi)的結論。所以最(zui)直接的證據(ju)應(ying)該采用方(fang)法壹(yi)。

取(qu)材：首(shou)先(xian)，用培(pei)養(yang)液濕(shi)潤(run)所取的組織(zhi)材(cai)料(liao)，並用鋒(feng)利的眼科剪(jian)去(qu)除(chu)附在其(qi)上(shang)的脂肪和結締(di)組織(zhi)。接(jie)著用(yong)平衡液（如(ru)PBS或(huo)Hanks液）漂(piao)洗，再(zai)用(yong)眼科彎(wan)剪(jian)將組織(zhi)塊(kuai)剪(jian)成小塊(kuai)。多次用PBS或(huo)Hanks液漂(piao)洗，直到液體(ti)清亮(liang)、無(wu)油滴(di)為止。

接(jie)種：用濕(shi)潤的吸管吸取切(qie)碎(sui)的組織(zhi)塊(kuai)，輕輕吹到培養瓶皿中，並按壹(yi)定間距均勻(yun)放(fang)在培(pei)養瓶底壁上(shang)。註意不要過(guo)多，確(que)保組織(zhi)塊(kuai)切(qie)面(mian)貼(tie)在培(pei)養瓶底壁上(shang)。

培(pei)養：將培(pei)養(yang)瓶翻(fan)轉，使(shi)瓶底朝上(shang)，在種(zhong)植了(le)組織(zhi)塊(kuai)壹側的對側面加(jia)足培養(yang)液，避(bi)免組織(zhi)塊(kuai)與培養(yang)液接(jie)觸，然後(hou)塞(sai)緊(jin)瓶塞(sai)。將種(zhong)植(zhi)了組織(zhi)塊(kuai)的壹側朝上(shang)，靜置於(yu)37℃培養(yang)箱(xiang)中。待組織(zhi)塊(kuai)貼(tie)壁1到3小時後(hou)翻(fan)瓶，使(shi)貼(tie)壁的組織(zhi)塊(kuai)浸(jin)沒在培(pei)養液中，繼續靜(jing)置(zhi)。換(huan)液：每隔(ge)2到3天更換(huan)壹次培養液，或(huo)者(zhe)根(gen)據(ju)培養(yang)瓶種顏色(se)的變化確定換(huan)液時間。

壹、原(yuan)代(dai)細胞計數(shu)

將血(xue)球計數(shu)板(ban)及(ji)蓋(gai)片(pian)用擦(ca)試幹(gan)凈(jing)，並(bing)將蓋(gai)片(pian)蓋(gai)在計數(shu)板(ban)上(shang)。

將細(xi)胞懸液吸出少(shao)許(xu)，滴(di)加(jia)在蓋(gai)片(pian)邊緣(yuan)，使(shi)懸(xuan)液充(chong)滿蓋(gai)片(pian)和計數(shu)板(ban)之間。

靜置(zhi)3分(fen)鐘。

鏡下(xia)觀察(cha)，計算(suan)計數(shu)板(ban)四(si)大(da)格細(xi)胞總數，壓線(xian)細胞只計左側和上(shang)方(fang)的。然後(hou)按下(xia)式(shi)計算(suan)：

細胞數/ml＝4大(da)格細(xi)胞總數/ 4×10000

註意：鏡下(xia)偶見由(you)兩個以上(shang)細胞組成的細胞團，應(ying)按單(dan)個細胞計算(suan)，若細胞團占(zhan)10%以(yi)上(shang)，說明分(fen)散不好，需(xu)重(zhong)新制(zhi)備(bei)細(xi)胞懸液。

二、原(yuan)代(dai)細胞活力(li)

將細(xi)胞懸液以(yi)0.5ml加(jia)入試管(guan)中。

加入0.5ml 0.4%臺盼蘭(lan)染液，染(ran)色(se)2壹3分(fen)鐘。

吸取少(shao)許(xu)懸液塗於載玻片(pian)上(shang)，加上(shang)蓋(gai)片(pian)。

鏡下(xia)取(qu)幾(ji)個任意視(shi)野(ye)分別(bie)計死(si)細(xi)胞和活細(xi)胞數，計細(xi)胞活力(li)。

死(si)細(xi)胞能(neng)被(bei)臺盼蘭(lan)染上(shang)色，鏡下(xia)可見深(shen)蘭色的細胞，活細(xi)胞不被(bei)染色(se)，鏡(jing)下呈無(wu)色透明狀(zhuang)。

活(huo)力(li)測(ce)定可以和細胞計數(shu)合(he)起來(lai)進行(xing)，但(dan)要考(kao)慮(lv)到染液對(dui)原(yuan)細(xi)胞懸液的加倍(bei)稀(xi)釋作(zuo)用(yong)。