【概(gai)要(yao)描述(shu)】人(ren)胎盤羊膜細胞(bao)公司(si)正(zheng)在(zai)出售(shou)的(de)產品(pin)：U87MG人(ren)腦星(xing)形膠質(zhi)母細(xi)胞(bao)瘤結腸腺癌(ai)細(xi)胞SW48(STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確(que))人(ren)多(duo)發性(xing)骨髓(sui)瘤細(xi)胞(bao)OPM-2(STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確(que))人(ren)腎上皮(pi)細胞Hkb20 (STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確(que))人(ren)肺(fei)成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞HFL1(STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確(que))草(cao)魚腎臟細胞(CIK)（種(zhong)屬鑒(jian)定(ding)）人(ren)葡(pu)萄膜黑色瘤92-1(STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確(que))人(ren)永生化表皮(pi)細胞HaCaT(STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確(que))永生化人(ren)子宮(gong)內(nei)膜異位癥(zheng)細(xi)胞12Z(STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確(que))人(ren)

人(ren)胎盤羊膜分離自(zi)胎(tai)盤組織；胎(tai)盤（placenta）是(shi)哺(bu)乳動物妊娠(shen)期間由(you)胚(pei)胎(tai)的(de)胚(pei)膜和(he)母體(ti)子(zi)宮(gong)內(nei)膜聯合(he)長(chang)成的(de)母子(zi)間(jian)交(jiao)換(huan)物質(zhi)的(de)過(guo)渡性(xing)器(qi)官，由(you)羊膜、葉狀絨毛膜和(he)底蛻(tui)膜構成(cheng)。胎(tai)兒(er)在(zai)子宮(gong)中(zhong)發育，依靠胎盤從母體(ti)取(qu)得營(ying)養，而(er)雙方(fang)保持(chi)相(xiang)當(dang)的(de)獨(du)立(li)性(xing)。胎(tai)盤還(hai)產生多(duo)種(zhong)維(wei)持(chi)妊(ren)娠的(de)激素，是(shi)壹個(ge)重(zhong)要的(de)內(nei)分泌(mi)器(qi)官。有(you)些爬(pa)行(xing)類(lei)和(he)魚類(lei)也(ye)以(yi)胎生(sheng)方(fang)式(shi)繁殖(zhi)後(hou)代(dai)，胚(pei)胎(tai)生(sheng)長(chang)出壹些輔(fu)助(zhu)結構如(ru)卵黃囊、鰓(sai)絲(si)等與母體(ti)組(zu)織緊密(mi)結合，以(yi)達到(dao)母子(zi)間(jian)物質(zhi)的(de)交(jiao)換(huan)，這樣的(de)結構稱(cheng)假(jia)胎盤。羊膜是胎(tai)盤的(de)最內(nei)層，與眼結膜組織(zhi)結構相似(si)，含(han)有(you)眼表上皮(pi)細胞，包括結膜細胞(bao)和(he)角膜上皮(pi)細胞生長所需要的(de)物質(zhi)，其(qi)光(guang)滑(hua)，無血管(guan)、神(shen)經及(ji)淋(lin)巴(ba)，具(ju)有壹定(ding)的(de)彈性(xing)；在(zai)電鏡(jing)下(xia)，其(qi)分為(wei)五(wu)層：上(shang)皮(pi)層、基(ji)底(di)膜、致(zhi)密(mi)層、纖(xian)維(wei)母細(xi)胞(bao)層和(he)海綿層，羊(yang)膜基底(di)膜和(he)羊膜羊膜基質(zhi)層含(han)有(you)大量(liang)不同(tong)的(de)膠元(yuan)，主要為(wei)Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ型膠原(yuan)和(he)纖維(wei)粘(zhan)連蛋(dan)白、層粘(zhan)連蛋(dan)白等(deng)成份(fen)。羊膜細胞(bao)主要由(you)羊膜上皮(pi)細胞和(he)羊膜間充質(zhi)細胞組成，均具(ju)有多(duo)分化潛能(neng)，可(ke)轉(zhuan)化為神(shen)經元(yuan)，且還(hai)有合成、釋放生(sheng)物活性(xing)物質(zhi)和(he)神(shen)經營養(yang)因子的(de)功(gong)能(neng)。
方(fang)法簡(jian)介(jie)：

公司(si)實驗(yan)室分離的(de)人(ren)胎盤羊膜采用yi蛋(dan)白酶(mei)-膠原(yuan)酶聯(lian)合消(xiao)化法制(zhi)備(bei)而來，細(xi)胞(bao)總量約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量檢(jian)測(ce)：

公司(si)實驗(yan)室分離的(de)人(ren)胎盤羊膜經PCK免(mian)疫熒(ying)光(guang)鑒(jian)定(ding)，純(chun)度可(ke)達90%以(yi)上，且不(bu)含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體(ti)、細(xi)菌、酵(jiao)母和(he)真(zhen)菌(jun)等。

本(ben)公司(si)所有產品(pin)僅(jin)供科(ke)學(xue)實驗(yan)，不做(zuo)其(qi)他(ta)科(ke)學(xue)實驗(yan)外(wai)的(de)使用！

包被(bei)條件 PLL（0.1mg/ml）

培(pei)養基(ji) 含(han)FBS、生(sheng)長添(tian)加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液(ye)頻(pin)率 每(mei)2-3天(tian)換(huan)液(ye)壹次

生(sheng)長特(te)性(xing) 貼壁(bi)

細(xi)胞形(xing)態(tai) 梭(suo)形、多(duo)角(jiao)形(xing)

傳(chuan)代(dai)特(te)性(xing) 可(ke)傳(chuan)3代(dai)左(zuo)右(you)

消(xiao)化液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白酶(mei)

培(pei)養條件 氣相：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備工作(zuo)

1. 實(shi)驗(yan)器(qi)材準(zhun)備：準備無菌的(de)培養皿、培養(yang)瓶(ping)、移液(ye)管(guan)、離心管(guan)、手(shou)術器(qi)械等，並(bing)進(jin)行(xing)高壓(ya)滅(mie)菌或其(qi)他(ta)合(he)適(shi)的(de)消(xiao)毒(du)處理(li)。

2. 試(shi)劑準備(bei)：配(pei)制(zhi)或購(gou)買(mai)合(he)適(shi)的(de)培養基、消(xiao)化酶（如(ru)、膠原(yuan)酶等(deng)）、胎牛(niu)血清(qing)、雙抗等(deng)試(shi)劑，確(que)保其(qi)無菌且在(zai)有效(xiao)期(qi)內(nei)。

3. 實(shi)驗(yan)動物或組織來源準(zhun)備(bei)：根據實驗(yan)需求，選擇合適(shi)的(de)動物並(bing)進(jin)行(xing)相(xiang)應(ying)的(de)麻醉或處死(si)，獲取所需組織(zhi)；或從已(yi)有(you)的(de)組織樣本庫中(zhong)獲取組織。

取(qu)材與處理(li)

1. 取(qu)材：在(zai)無菌條件下(xia)，迅速(su)取出(chu)目標組織(zhi)，盡(jin)量(liang)減(jian)少(shao)對組織(zhi)的(de)損(sun)傷，並(bing)去(qu)除(chu)多(duo)余(yu)的(de)脂肪(fang)、結締組織(zhi)等(deng)非(fei)目的(de)組織。

2. 清(qing)洗：將(jiang)取(qu)出(chu)的(de)組織用預冷的(de)無菌PBS沖(chong)洗數(shu)次，以(yi)去除(chu)血液(ye)和(he)雜(za)質(zhi)。

3. 剪切：將(jiang)組織(zhi)剪成約(yue)1 - 2mm³的(de)小塊，以(yi)便(bian)後(hou)續(xu)消(xiao)化。

細(xi)胞分離

1. 消(xiao)化：將剪碎(sui)的(de)組織塊放入(ru)含(han)有(you)適(shi)量(liang)消(xiao)化酶的(de)離心管(guan)中(zhong)，在(zai)37℃恒(heng)溫搖(yao)床(chuang)或培養箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化壹段(duan)時(shi)間(jian)。期(qi)間可(ke)輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃(huang)離心管(guan)，使消(xiao)化更(geng)均勻。

2. 終(zhong)止(zhi)消(xiao)化：當(dang)組織塊大部(bu)分被(bei)消(xiao)化成單(dan)細(xi)胞(bao)懸液(ye)或小細胞(bao)團時(shi)，加(jia)入(ru)含(han)血清(qing)的(de)培養基終止(zhi)消(xiao)化。

3. 過(guo)濾與離心：用(yong)細胞篩過(guo)濾細胞懸液(ye)，去(qu)除未(wei)消(xiao)化的(de)組織碎(sui)片，然後(hou)將(jiang)濾液(ye)以(yi)適當(dang)的(de)轉(zhuan)速離心，收(shou)集(ji)細胞沈澱(dian)。

細(xi)胞觀(guan)察(cha)與檢(jian)測(ce)

1. 日常觀(guan)察(cha)：每(mei)天(tian)用(yong)倒置顯(xian)微鏡(jing)觀(guan)察(cha)細胞的(de)形態(tai)、生長(chang)狀態(tai)、密(mi)度等(deng)，記錄(lu)細胞(bao)的(de)變化情況，如(ru)發現細胞汙(wu)染或異常，及(ji)時(shi)采取相(xiang)應(ying)措施(shi)。
2. 細(xi)胞(bao)計數(shu)與活(huo)力檢(jian)測(ce)：在(zai)需要時(shi)，可(ke)采用臺盼(pan)藍染(ran)色等(deng)方(fang)法對細胞(bao)進(jin)行(xing)計數(shu)和(he)活力檢(jian)測(ce)，以(yi)了解(jie)細胞(bao)的(de)生長情況和(he)健康(kang)狀態(tai)。

壹、取(qu)材(cai)與分離

1. 快速操作(zuo)

- 組(zu)織取(qu)材後(hou)需立即處理(li)，避免(mian)長時(shi)間(jian)暴(bao)露於(yu)室溫或非(fei)營養(yang)環(huan)境(jing)。

- 使(shi)用無菌 PBS 或生理鹽(yan)水(shui)沖洗組(zu)織(zhi)，去(qu)除(chu)血液(ye)、雜(za)質(zhi)。

2. 消(xiao)化酶選擇

- 根據組織類(lei)型選擇消(xiao)化酶，避免(mian)過(guo)度消(xiao)化導致(zhi)細(xi)胞(bao)損(sun)傷。

- 消(xiao)化時(shi)間(jian)需嚴(yan)格(ge)控(kong)制（通常 10-30 分鐘(zhong)），可(ke)通(tong)過(guo)顯(xian)微鏡(jing)觀(guan)察(cha)細胞解離狀態(tai)。

二(er)、培(pei)養條件優化

1. 培(pei)養基(ji)選擇

- 使(shi)用含(han)血清(qing)或特(te)定生長因子的(de)培養基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分細(xi)胞(bao)需添加(jia)胰(yi)島素(su)、EGF 等。

- 避免(mian)頻(pin)繁更(geng)換(huan)培養基品(pin)牌或批次，減少(shao)細(xi)胞(bao)適應(ying)壓(ya)力。

2. 貼壁(bi)與傳(chuan)代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細胞(bao)貼壁(bi)能(neng)力較弱，可(ke)能(neng)需要包被(bei)培養(yang)皿（如(ru)膠原(yuan)蛋(dan)白、多(duo)聚賴(lai)氨酸）。

- 傳(chuan)代(dai)時(shi)密(mi)度建(jian)議(yi)控制(zhi)在(zai) 70%-80%，過(guo)度匯合會(hui)導(dao)致(zhi)接觸抑制(zhi)和(he)分化。

三(san)、汙(wu)染控制

1. 無菌操(cao)作(zuo)

- 全(quan)程在(zai)超凈臺操作(zuo)，使(shi)用壹次性(xing)耗(hao)材(cai)，避免(mian)交(jiao)叉(cha)汙(wu)染。

- 培(pei)養基(ji)中(zhong)可(ke)添(tian)加(jia)雙抗，但長期(qi)使用(yong)可(ke)能(neng)影(ying)響(xiang)細胞(bao)活(huo)性(xing)。

2. 支(zhi)原(yuan)體(ti)檢(jian)測(ce)

- 定(ding)期檢(jian)測(ce)支(zhi)原(yuan)體(ti)汙(wu)染（如(ru) PCR 法），汙(wu)染後(hou)需及(ji)時(shi)丟(diu)棄(qi)細胞(bao)。

四(si)、狀態(tai)監控(kong)

1. 日常觀(guan)察(cha)

- 每(mei)天(tian)檢(jian)查(zha)細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)、密(mi)度及(ji)培養(yang)基顏(yan)色，及(ji)時(shi)更(geng)換(huan)培養基（通常每(mei) 2-3 天(tian)換(huan)液(ye)壹次）。

- 異常形態(tai)（如(ru)細胞(bao)變圓(yuan)、碎(sui)片增多(duo)）可(ke)能(neng)提示(shi)汙(wu)染或營養不(bu)足。

2. 傳(chuan)代(dai)與凍(dong)存

- 原(yuan)代(dai)細胞(bao)分裂(lie)次數(shu)有限(xian)（壹般(ban) 5-10 代(dai)），需及(ji)時(shi)凍(dong)存早(zao)期代(dai)次細胞(bao)。

- 凍(dong)存液(ye)建(jian)議(yi)使用(yong) DMSO+血清(qing)（或專用(yong)凍存培養基(ji)），梯度降(jiang)溫後(hou)液(ye)氮(dan)保存。