【概(gai)要(yao)描(miao)述(shu)】人胎(tai)盤(pan)絨(rong)毛膜滋養(yang)層(ceng)細胞公(gong)司(si)正在出(chu)售(shou)的產(chan)品：U87MG+RFP人腦星(xing)形膠(jiao)質(zhi)母(mu)細胞瘤+RFP小鼠(shu)乳(ru)腺腫(zhong)瘤細胞C127（種屬鑒(jian)定）人胰(yi)腺癌細胞PANC 05.04(STR鑒(jian)定正確)Ph+急淋白(bai)血病細胞 Sup-b15(STR鑒(jian)定正確)人B細胞淋巴(ba)瘤細胞 SU-DHL-10(STR鑒(jian)定正確)大鼠(shu)腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(高(gao)分(fen)化(hua))PC-12(高(gao)分(fen)化(hua))（種屬鑒(jian)定）絨(rong)猴(hou)EBV轉化(hua)的(de)白(bai)細胞B95-8（種屬鑒(jian)定）人肺癌

本公司(si)所有產(chan)品僅(jin)供科學(xue)實驗，不做(zuo)其他(ta)科學(xue)實驗外(wai)的使(shi)用！

人胎(tai)盤(pan)絨(rong)毛膜滋養(yang)層(ceng)分(fen)離(li)自(zi)胎(tai)盤(pan)組(zu)織(zhi)；胎(tai)盤(pan)（placenta）是哺乳(ru)動物妊娠(shen)期間由(you)胚(pei)胎(tai)的胚(pei)膜和(he)母(mu)體子(zi)宮內(nei)膜聯(lian)合長(chang)成的(de)母(mu)子(zi)間交換物質(zhi)的過(guo)渡性(xing)器(qi)官，由(you)羊(yang)膜、葉(ye)狀(zhuang)絨毛膜和(he)底(di)蛻(tui)膜構成。胎(tai)兒在子(zi)宮中發(fa)育，依(yi)靠(kao)胎(tai)盤(pan)從母(mu)體取得(de)營(ying)養，而雙方(fang)保(bao)持(chi)相(xiang)當(dang)的(de)獨立性(xing)。胎(tai)盤(pan)還(hai)產(chan)生多種維持(chi)妊娠(shen)的(de)激(ji)素，是壹個(ge)重(zhong)要的內分(fen)泌(mi)器(qi)官。有些爬(pa)行類(lei)和魚類也(ye)以胎(tai)生方(fang)式(shi)繁(fan)殖(zhi)後(hou)代，胚(pei)胎(tai)生長(chang)出壹(yi)些輔助結(jie)構如卵(luan)黃囊(nang)、鰓絲(si)等(deng)與母(mu)體組(zu)織(zhi)緊密結(jie)合，以達(da)到(dao)母(mu)子(zi)間物質(zhi)的交換，這(zhe)樣(yang)的(de)結(jie)構稱(cheng)假胎(tai)盤(pan)。絨(rong)毛膜是由(you)滋養(yang)層(ceng)和胚(pei)外(wai)中胚(pei)層(ceng)的壁層(ceng)構成。胚(pei)泡植(zhi)入子(zi)宮內(nei)膜後(hou)，在胚(pei)泡表面形成(cheng)許多(duo)絨(rong)毛樣(yang)的(de)突(tu)起，以(yi)細胞滋養(yang)層(ceng)為中軸，外(wai)裹(guo)合體滋養(yang)層(ceng)，稱(cheng)初級(ji)幹(gan)絨(rong)毛。胚(pei)外(wai)中胚(pei)層(ceng)長(chang)入初(chu)級(ji)幹(gan)絨(rong)毛的中軸，使(shi)初級(ji)幹(gan)絨(rong)毛變成了(le)次(ci)級(ji)幹(gan)絨(rong)毛。當絨(rong)毛膜的(de)胚(pei)外(wai)中胚(pei)層(ceng)內形成(cheng)血管網(wang)和結(jie)締組(zu)織(zhi)，並與胚(pei)體內的(de)血管相(xiang)通時，次(ci)級(ji)幹(gan)絨(rong)毛改稱(cheng)三級(ji)幹(gan)絨(rong)毛。三級(ji)幹(gan)絨(rong)毛末(mo)端的(de)細胞滋養(yang)層(ceng)細胞形成(cheng)細胞滋養(yang)層(ceng)殼。隨著(zhe)胚(pei)胎(tai)發(fa)育，叢(cong)密絨(rong)毛膜與基(ji)蛻(tui)膜共(gong)同構成了(le)胎(tai)盤(pan)，而平滑(hua)絨毛膜則和包(bao)蛻(tui)膜壹(yi)起逐漸(jian)與壁蛻(tui)膜融合。
方(fang)法簡(jian)介(jie)：

公(gong)司(si)實驗室分(fen)離(li)的人胎(tai)盤(pan)絨(rong)毛膜滋養(yang)層(ceng)采用(yong)yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)-DNA酶(mei)聯合消化(hua)法結(jie)合密度(du)梯度(du)離(li)心法制(zhi)備(bei)而來(lai)，細胞總(zong)量(liang)約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量(liang)檢測：

公(gong)司(si)實驗室分(fen)離(li)的人胎(tai)盤(pan)絨(rong)毛膜滋養(yang)層(ceng)經(jing)Cytokeratin-7免疫熒光鑒(jian)定(ding)，純(chun)度可達(da)90%以(yi)上(shang)，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌(jun)、酵(jiao)母(mu)和真(zhen)菌(jun)等(deng)。

包(bao)被(bei)條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yang)基(ji) 含FBS、生(sheng)長(chang)添加劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液頻率 每2-3天(tian)換液壹(yi)次(ci)

生(sheng)長(chang)特性(xing) 貼(tie)壁

細胞形態(tai) 梭(suo)形、多(duo)角形

傳(chuan)代特性(xing) 可傳(chuan)3代(dai)左(zuo)右(you)

消化(hua)液 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)

培養(yang)條件 氣(qi)相(xiang)：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準備(bei)工(gong)作(zuo)

1. 實(shi)驗器(qi)材準備(bei)：準備(bei)無菌(jun)的培養(yang)皿(min)、培養(yang)瓶(ping)、移液管(guan)、離心管(guan)、手(shou)術器(qi)械(xie)等(deng)，並進行高(gao)壓滅(mie)菌(jun)或(huo)其他(ta)合適(shi)的消毒處理(li)。

2. 試(shi)劑(ji)準備(bei)：配制(zhi)或(huo)購(gou)買合適(shi)的培養(yang)基(ji)、消化(hua)酶(mei)（如、膠(jiao)原酶(mei)等(deng)）、胎(tai)牛(niu)血清、雙(shuang)抗(kang)等(deng)試(shi)劑(ji)，確(que)保(bao)其無菌(jun)且在有效期內(nei)。

3. 實(shi)驗動物或(huo)組(zu)織(zhi)來(lai)源(yuan)準備(bei)：根據實驗需求，選(xuan)擇合適(shi)的動(dong)物並(bing)進行相(xiang)應(ying)的(de)麻醉或(huo)處死，獲(huo)取所需組(zu)織(zhi)；或(huo)從已有的組(zu)織(zhi)樣(yang)本庫(ku)中獲(huo)取組(zu)織(zhi)。

取材與處理(li)

1. 取材：在無菌(jun)條件下(xia)，迅(xun)速(su)取出目標(biao)組(zu)織(zhi)，盡量(liang)減(jian)少對(dui)組(zu)織(zhi)的損(sun)傷(shang)，並去(qu)除多余(yu)的脂(zhi)肪、結(jie)締組(zu)織(zhi)等(deng)非(fei)目的(de)組(zu)織(zhi)。

2. 清(qing)洗(xi)：將(jiang)取出的(de)組(zu)織(zhi)用預(yu)冷的無菌(jun)PBS沖(chong)洗(xi)數(shu)次(ci)，以(yi)去(qu)除血液和(he)雜質。

3. 剪(jian)切(qie)：將(jiang)組(zu)織(zhi)剪成約(yue)1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊(kuai)，以(yi)便(bian)後續消化(hua)。

細胞分(fen)離(li)

1. 消化(hua)：將(jiang)剪碎(sui)的(de)組(zu)織(zhi)塊放入含有適(shi)量(liang)消化(hua)酶(mei)的離(li)心管(guan)中，在37℃恒(heng)溫搖(yao)床或(huo)培養(yang)箱(xiang)中消化(hua)壹(yi)段(duan)時間。期間可輕輕搖(yao)晃(huang)離心管(guan)，使(shi)消化(hua)更(geng)均勻。

2. 終(zhong)止(zhi)消化(hua)：當(dang)組(zu)織(zhi)塊大部分(fen)被(bei)消化(hua)成(cheng)單細胞懸液或(huo)小細胞團(tuan)時，加入含血清的(de)培養(yang)基(ji)終止(zhi)消化(hua)。

3. 過(guo)濾(lv)與離心：用(yong)細胞篩過(guo)濾(lv)細胞懸液，去(qu)除未消化(hua)的(de)組(zu)織(zhi)碎(sui)片(pian)，然(ran)後(hou)將濾(lv)液以(yi)適(shi)當的(de)轉(zhuan)速(su)離心，收(shou)集(ji)細胞沈澱(dian)。

細胞觀察與檢測

1. 日(ri)常(chang)觀察：每天(tian)用(yong)倒置顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀察細胞的(de)形態(tai)、生長(chang)狀態(tai)、密度(du)等(deng)，記錄細胞的(de)變化情況(kuang)，如發(fa)現細胞汙(wu)染(ran)或(huo)異常(chang)，及(ji)時采取相(xiang)應(ying)措(cuo)施。
2. 細胞計數(shu)與活力(li)檢測：在需(xu)要(yao)時，可采用臺(tai)盼(pan)藍(lan)染(ran)色等(deng)方(fang)法對(dui)細胞進行計數(shu)和活(huo)力(li)檢測，以(yi)了(le)解細胞的(de)生長(chang)情況(kuang)和(he)健(jian)康(kang)狀(zhuang)態。

壹(yi)、取材與分(fen)離(li)

1. 快速(su)操(cao)作(zuo)

- 組(zu)織(zhi)取材後(hou)需(xu)立即處理(li)，避免長(chang)時間暴(bao)露(lu)於(yu)室溫或(huo)非(fei)營(ying)養環境(jing)。

- 使(shi)用無菌(jun) PBS 或(huo)生理(li)鹽(yan)水沖(chong)洗(xi)組(zu)織(zhi)，去(qu)除血液、雜(za)質。

2. 消化(hua)酶(mei)選(xuan)擇

- 根據組(zu)織(zhi)類型選(xuan)擇消化(hua)酶(mei)，避免過(guo)度消化(hua)導(dao)致細胞損(sun)傷(shang)。

- 消化(hua)時(shi)間需嚴格控制(zhi)（通常(chang) 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可通過(guo)顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀察細胞解(jie)離狀態。

二(er)、培養(yang)條件優(you)化(hua)

1. 培養(yang)基(ji)選(xuan)擇

- 使(shi)用含血清或(huo)特定生長(chang)因(yin)子(zi)的培養(yang)基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分(fen)細胞需(xu)添加胰(yi)島(dao)素、EGF 等(deng)。

- 避免頻繁更換培養(yang)基(ji)品牌(pai)或(huo)批次(ci)，減(jian)少細胞適(shi)應壓(ya)力(li)。

2. 貼(tie)壁與傳(chuan)代

- 原代細胞貼(tie)壁能(neng)力(li)較弱(ruo)，可能(neng)需要(yao)包被培養(yang)皿(min)（如膠(jiao)原蛋白(bai)、多(duo)聚(ju)賴氨(an)酸）。

- 傳(chuan)代時(shi)密度(du)建(jian)議(yi)控(kong)制(zhi)在 70%-80%，過(guo)度匯(hui)合會(hui)導致接觸抑制(zhi)和分(fen)化(hua)。

三(san)、汙(wu)染(ran)控制(zhi)

1. 無菌(jun)操(cao)作(zuo)

- 全(quan)程(cheng)在超凈(jing)臺(tai)操(cao)作(zuo)，使(shi)用壹(yi)次(ci)性(xing)耗(hao)材，避免交叉汙(wu)染(ran)。

- 培養(yang)基(ji)中可添加雙抗(kang)，但長(chang)期使(shi)用可能(neng)影響(xiang)細胞活(huo)性(xing)。

2. 支原體檢測

- 定(ding)期檢測支原體汙(wu)染(ran)（如 PCR 法），汙(wu)染(ran)後需(xu)及時(shi)丟棄細胞。

四(si)、狀(zhuang)態(tai)監(jian)控

1. 日(ri)常(chang)觀察

- 每天(tian)檢查(zha)細胞形態(tai)、密度(du)及(ji)培養(yang)基(ji)顏(yan)色(se)，及(ji)時(shi)更換培養(yang)基(ji)（通常(chang)每 2-3 天(tian)換液壹(yi)次(ci)）。

- 異(yi)常(chang)形態(tai)（如細胞變圓(yuan)、碎(sui)片(pian)增多(duo)）可能(neng)提示(shi)汙(wu)染(ran)或(huo)營(ying)養不足。

2. 傳(chuan)代與凍(dong)存(cun)

- 原代細胞分(fen)裂(lie)次(ci)數(shu)有限（壹般 5-10 代(dai)），需(xu)及(ji)時凍(dong)存(cun)早(zao)期代(dai)次(ci)細胞。

- 凍(dong)存(cun)液建(jian)議(yi)使(shi)用 DMSO+血清（或(huo)專用(yong)凍(dong)存(cun)培養(yang)基(ji)），梯度(du)降(jiang)溫後液氮(dan)保存(cun)。