【概(gai)要描(miao)述】鼠(shu)抗(kang)人(ren)b澱粉樣(yang)蛋(dan)白單(dan)克(ke)隆抗(kang)體 Beta Amyloid 免(mian)疫印(yin)跡(ji)對已(yi)知(zhi)表達蛋(dan)白，可用(yong)相應(ying)抗(kang)體作為(wei)壹抗(kang)進行(xing)檢測，對新基因(yin)的(de)表達產物(wu)，可(ke)通(tong)過融(rong)合(he)部分(fen)的抗(kang)體檢(jian)測。

鼠(shu)抗(kang)人(ren)b澱粉樣(yang)蛋(dan)白單(dan)克(ke)隆抗(kang)體    Beta Amyloid    Western Blot技(ji)術(shu):
壹、 原理(li)
與(yu)Southern或(huo)Northern雜(za)交(jiao)方法類似(si)，但Western Blot采(cai)用(yong)的是(shi)聚(ju)丙(bing)烯(xi)酰胺凝(ning)膠電(dian)泳(yong)，被(bei)檢測物(wu)是(shi)蛋(dan)白質(zhi)，“探針”是(shi)抗(kang)體，“顯色(se)”用(yong)標(biao)記(ji)的二(er)抗(kang)。經過PAGE分離的蛋(dan)白質(zhi)樣品，轉移(yi)到(dao)固相(xiang)載體（例如(ru)硝#纖(xian)維(wei)素薄(bo)膜(mo)）上(shang)，固(gu)相(xiang)載體以(yi)非(fei)共(gong)價(jia)鍵(jian)形(xing)式(shi)吸附(fu)蛋(dan)白質(zhi)，且能保持電(dian)泳(yong)分(fen)離的多肽(tai)類型及其生(sheng)物(wu)學(xue)活(huo)性(xing)不變。以固相載體上(shang)的蛋(dan)白質(zhi)或(huo)多肽(tai)作為(wei)抗(kang)原，與(yu)對應(ying)的抗(kang)體起(qi)免(mian)疫反應(ying)，再與(yu)酶(mei)或(huo)同(tong)位(wei)素標(biao)記(ji)的第二(er)抗(kang)體起(qi)反應(ying)，經過底(di)物(wu)顯色(se)或(huo)放射(she)自(zi)顯影以(yi)檢測電(dian)泳(yong)分(fen)離的特(te)異(yi)性(xing)目(mu)的基因(yin)表達的蛋(dan)白成分(fen)。該技(ji)術(shu)也(ye)廣泛應(ying)用(yong)於(yu)檢(jian)測蛋(dan)白水平的表達。
二(er)、分類
現(xian)常(chang)用(yong)的有(you)底(di)物(wu)化(hua)學(xue)發(fa)光(guang)ECL和(he)底(di)物(wu)DAB呈(cheng)色(se)，體同(tong)水平和(he)實(shi)驗條(tiao)件(jian)的是用(yong)*種(zhong)方法，目(mu)前(qian)發(fa)表文(wen)章(zhang)通(tong)常(chang)是用(yong)底(di)物(wu)化(hua)學(xue)發(fa)光(guang)ECL。只(zhi)要買現(xian)成(cheng)的(de)試劑(ji)盒(he)就(jiu)行(xing)，操(cao)作也(ye)比較簡單(dan)，原(yuan)理(li)如(ru)下(xia)（二(er)抗(kang)用(yong)HRP標(biao)記(ji)）：反應(ying)底(di)物(wu)為(wei)過氧(yang)化(hua)物(wu)+魯(lu)米諾，如(ru)遇(yu)到(dao)HRP，即(ji)發(fa)光，可(ke)使(shi)膠(jiao)片(pian)曝(pu)光，就(jiu)可(ke)洗(xi)出(chu)條(tiao)帶。
三(san)、主(zhu)要試劑鼠(shu)抗(kang)人(ren)b澱粉樣(yang)蛋(dan)白單(dan)克(ke)隆抗(kang)體    Beta Amyloid、 丙(bing)烯酰胺和(he)N，N’-亞(ya)甲(jia)雙丙(bing)烯酰胺，應(ying)以溫(wen)熱(re)（以(yi)利於(yu)溶解雙丙(bing)稀(xi)酰胺）的(de)去離子水(shui)配(pei)制含(han)有29%（w/v）丙稀(xi)酰胺和(he)%（w/v）N，N’-亞(ya)甲(jia)雙丙(bing)烯酰胺儲(chu)存(cun)液(ye)丙(bing)稀(xi)酰胺29g，N，N-亞(ya)甲(jia)叉(cha)雙(shuang)丙稀(xi)酰胺g，加H2O至(zhi) 00ml。）儲(chu)於(yu)棕(zong)色(se)瓶(ping)，4℃避光(guang)保(bao)存(cun)。嚴(yan)格(ge)核(he)實(shi)PH不得(de)超(chao)過7.0，因可以發(fa)生脫(tuo)氨基反(fan)應(ying)是光(guang)催(cui)化(hua)或(huo)堿(jian)催(cui)化(hua)的(de)。使(shi)用(yong)期(qi)不得(de)超(chao)過兩(liang)個(ge)月，隔幾個月須重新配(pei)制。如(ru)有(you)沈澱，可以過濾(lv)。
2、 十二(er)烷基硫(liu)#鈉(na)SDS溶液:0%（w/v）0.gSDS，mlH2O去離子水(shui)配(pei)制，室(shi)溫(wen)保存(cun)。
3、 分(fen)離(li)膠(jiao)緩沖液:.5mmol/L Tris-HCl （pH8.8）:8.5gTris和(he)48mlmol/L HCl 混(hun)合(he)，加水(shui)稀(xi)釋(shi)到(dao)00ml終體(ti)積。過濾(lv)後(hou)40℃保存(cun)。
    Beta Amyloid 4、 濃(nong)縮(suo)膠緩沖液:0.5mmol/L Tris-HCl （pH6.8）:6.05gTris溶於(yu)40mlH2O中，用(yong)約48ml mol/L HCl調(tiao)至(zhi)pH6.8加水(shui)稀(xi)釋(shi)到(dao)00ml終體(ti)積。過濾(lv)後(hou)40C保存(cun)。這(zhe)兩(liang)種(zhong)緩沖液必(bi)須使用(yong)Tris堿制備(bei)，再用(yong)HCL調節PH值(zhi)，而(er)不用(yong) Tris.CL。
5、 TEMED原溶液N，N，N’N’四甲(jia)基乙(yi)二(er)胺催(cui)化(hua)過硫#銨形成(cheng)自由(you)基而(er)加速(su)兩(liang)種(zhong)丙(bing)稀(xi)酰胺的(de)聚(ju)合(he)。PH太(tai)低時，聚(ju)合(he)反應(ying)受到(dao)抑(yi)制。0%（w/v）過硫#胺溶液。提(ti)供(gong)兩(liang)種(zhong)丙(bing)稀(xi)酰胺聚(ju)合(he)所必(bi)須的自由(you)基。去離子水(shui)配(pei)制數(shu)ml，臨(lin)用(yong)前(qian)配(pei)制.
Anti-FBN （fibrillin ）  原(yuan)纖(xian)維(wei)蛋(dan)白抗(kang)體
Anti-Fe65 protein  Fe65 蛋(dan)白抗(kang)體
Anti-FGF/aFGF/ECGF-beta/HBGF-  肝(gan)素結合(he)生長(chang)因子/酸(suan)性成纖(xian)維(wei)細(xi)胞生(sheng)長(chang)因子抗(kang)體
Anti-FGF3/Oncogene INT2（Fibroblast Growth Factor3）  纖(xian)維(wei)母(mu)細(xi)胞生(sheng)長(chang)因子3抗(kang)體
Anti-FGF3/HSTF/HBGF-4（Fibroblast Growth Factor4）  纖(xian)維(wei)母(mu)細(xi)胞生(sheng)長(chang)因子4抗(kang)體
Anti-FGF5（Fibroblast Growth Factor 4）  纖(xian)維(wei)母(mu)細(xi)胞生(sheng)長(chang)因子5抗(kang)體
Anti- KGF/FGF-7（Keratinocyte growth factor precursor）  角質(zhi)形成細(xi)胞生(sheng)長(chang)因子受(shou)體/纖(xian)維(wei)母(mu)細(xi)胞生(sheng)長(chang)因子-7抗(kang)體
Anti-FGF-8/HBGF-8 （Fibroblast growth factor 8）  成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞生(sheng)長(chang)因子-8/纖(xian)維(wei)母(mu)細(xi)胞生(sheng)長(chang)因子-8抗(kang)體
anti-FGF-0（Fibroblast Growth Factor-0）  成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞生(sheng)長(chang)因子-0/纖(xian)維(wei)母(mu)細(xi)胞生(sheng)長(chang)因子-0抗(kang)體
Anti-KGFR（kilodalton growth factor receptors）  角質(zhi)形成細(xi)胞生(sheng)長(chang)因子受(shou)體抗(kang)體
Anti-FGFR（Fibroblast Growth Factor Receptor ）  纖(xian)維(wei)母(mu)細(xi)胞生(sheng)長(chang)因子受(shou)體抗(kang)體
Anti-FGFR2（Fibroblast Growth Factor Receptor 2）  成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞生(sheng)長(chang)因子受(shou)體2抗(kang)體
Anti-FGFR3（Fibroblast Growth Factor Receptor 3）  成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞生(sheng)長(chang)因子受(shou)體3抗(kang)體
6、 SDS- PAGE加樣(yang)緩沖液:pH6.8 0.5mol/L Tris緩沖液8ml，甘(gan)油(you)6.4ml，0%SDS 2.8ml，巰基乙(yi)醇3.2ml，0.05%溴(xiu)酚藍(lan).6ml，H2O 32ml混勻(yun)備(bei)用(yong)。按:或(huo):2比(bi)例與蛋(dan)白質(zhi)樣品混(hun)合(he)，在沸(fei)水終(zhong)煮3min混(hun)勻(yun)後(hou)再上(shang)樣，壹般為(wei)20-25ul，總(zong)蛋(dan)白量(liang)00μg。
7、 Tris-甘氨(an)#電(dian)泳(yong)緩沖液:30.3gTris，88g甘(gan)氨#，0gSDS，用(yong)蒸(zheng)餾水(shui)溶解至(zhi)000ml，得(de)0.25mol/L Tris-.92mol/L甘(gan)氨(an)#電(dian)極(ji)緩沖液。臨(lin)用(yong)前(qian)稀(xi)釋(shi)0倍。
8、 轉移(yi)緩沖液：配(pei)制L轉移(yi)緩沖液，需(xu)稱取(qu)2.9g甘氨#、5.8gTris堿、0.37g SDS，並加入200ml甲(jia)醇，加水(shui)至(zhi)總(zong)量(liang)L。
9、 麗春紅(hong)染液(ye)儲(chu)存(cun)液(ye)：麗春紅(hong)S 2g 三(san)#乙(yi)#30g 磺(huang)基水(shui)楊(yang)# 30g 加水(shui)至(zhi)00ml 用(yong)時上(shang)述儲存(cun)液(ye)稀(xi)釋(shi)0倍即(ji)成(cheng)麗春紅(hong)S使用(yong)液。使(shi)用(yong)後(hou)應(ying)予以(yi)廢(fei)棄(qi)。
0、 脫(tuo)脂奶粉5%（w/v）。
、 NaN3 0.02% 疊(die)氮(dan)鈉（有(you)毒，戴(dai)手套(tao)操作），溶於(yu)磷#緩沖鹽(yan)溶液（PBS）。
2、 Tris緩沖鹽(yan)溶液（TBS）:20mmol/LTris/HCl（pH7.5），500mmol/LnaCl。
3、 Tween20（5）鼠(shu)抗(kang)人(ren)-MMP-9（6）鼠(shu)抗(kang)人(ren)-TIMP-。
4、 過氧(yang)化(hua)物(wu)酶(mei)標(biao)記(ji)的第二(er)抗(kang)體。
5、 NBT（溶於(yu)70%二(er)甲(jia)基甲(jia)酰胺，75mg/ml）。
6、 BCIP（溶於(yu)00%二(er)甲(jia)基甲(jia)酰胺，50mg/ml）。
7、 00mmol/LTris-HCl（pH9.5）。
8、 00mmol/L NaCl。
9、 50mmol/LTris-HCl（pH7.5），5mmol/L EDTA。（可(ke)以參(can)看(kan)分(fen)子克(ke)隆）