【概(gai)要(yao)描(miao)述】兔抗人(ren)堿性(xing)成(cheng)纖維細(xi)胞(bao)生長因(yin)子(zi)多(duo)克隆抗(kang)體，b-FGFWestern 免疫印(yin)跡(ji)對已知(zhi)表達蛋(dan)白(bai)，可(ke)用(yong)相(xiang)應(ying)抗(kang)體(ti)作(zuo)為(wei)壹(yi)抗(kang)進(jin)行(xing)檢測，對新基(ji)因的(de)表達產(chan)物(wu)，可(ke)通過(guo)融(rong)合部分的(de)抗(kang)體(ti)檢測。

兔抗人(ren)堿性(xing)成(cheng)纖維細(xi)胞(bao)生長因(yin)子(zi)多(duo)克隆抗(kang)體，b-FGFWestern Blot技(ji)術:
壹、 原理
與(yu)Southern或(huo)Northern雜(za)交(jiao)方(fang)法類(lei)似(si)，但(dan)Western Blot采(cai)用(yong)的(de)是聚(ju)丙(bing)烯酰(xian)胺凝(ning)膠(jiao)電泳，被檢測物(wu)是蛋(dan)白(bai)質，“探(tan)針(zhen)”是抗(kang)體(ti)，“顯色”用標(biao)記(ji)的(de)二(er)抗(kang)。經過PAGE分離(li)的(de)蛋(dan)白(bai)質樣品(pin)，轉(zhuan)移到(dao)固(gu)相(xiang)載(zai)體(ti)（例(li)如硝(xiao)#纖維素(su)薄膜）上(shang)，固(gu)相(xiang)載(zai)體(ti)以非(fei)共(gong)價鍵形式(shi)吸附蛋(dan)白(bai)質，且能(neng)保(bao)持(chi)電泳分離(li)的(de)多(duo)肽(tai)類(lei)型(xing)及其生物(wu)學(xue)活性(xing)不(bu)變。以固(gu)相(xiang)載(zai)體(ti)上(shang)的(de)蛋(dan)白(bai)質或(huo)多(duo)肽(tai)作(zuo)為(wei)抗(kang)原(yuan)，與(yu)對應的(de)抗(kang)體(ti)起(qi)免(mian)疫反(fan)應(ying)，再與(yu)酶或(huo)同(tong)位(wei)素標(biao)記(ji)的(de)第(di)二(er)抗(kang)體(ti)起(qi)反(fan)應，經過底物(wu)顯(xian)色(se)或(huo)放射自(zi)顯(xian)影(ying)以檢測電泳分離(li)的(de)特異(yi)性目(mu)的(de)基(ji)因表達的(de)蛋(dan)白(bai)成(cheng)分。該技(ji)術也廣泛(fan)應(ying)用於(yu)檢測蛋(dan)白(bai)水平(ping)的(de)表達。
二(er)、分類(lei)
現(xian)常(chang)用的(de)有(you)底(di)物(wu)化(hua)學(xue)發光ECL和底(di)物(wu)DAB呈(cheng)色(se)，體(ti)同(tong)水(shui)平(ping)和實(shi)驗條件的(de)是用(yong)*種(zhong)方(fang)法，目(mu)前發(fa)表文章通常(chang)是用(yong)底(di)物(wu)化(hua)學(xue)發光ECL。只(zhi)要(yao)買(mai)現(xian)成(cheng)的(de)試(shi)劑盒就(jiu)行(xing)，操作(zuo)也(ye)比(bi)較(jiao)簡(jian)單，原(yuan)理(li)如(ru)下(xia)（二(er)抗(kang)用(yong)HRP標(biao)記(ji)）：反應(ying)底(di)物(wu)為(wei)過(guo)氧化(hua)物(wu)+魯(lu)米(mi)諾(nuo)，如(ru)遇(yu)到(dao)HRP，即(ji)發光，可(ke)使膠(jiao)片(pian)曝(pu)光，就可(ke)洗出(chu)條(tiao)帶(dai)。
三、主要(yao)試劑兔抗人(ren)堿性(xing)成(cheng)纖維細(xi)胞(bao)生長因(yin)子(zi)多(duo)克隆抗(kang)體，b-FGFWestern 、 丙(bing)烯酰(xian)胺和(he)N，N’-亞甲(jia)雙(shuang)丙(bing)烯酰(xian)胺，應(ying)以溫(wen)熱（以利於(yu)溶解雙丙(bing)稀酰(xian)胺）的(de)去(qu)離(li)子(zi)水(shui)配制(zhi)含(han)有(you)29%（w/v）丙(bing)稀酰(xian)胺和(he)%（w/v）N，N’-亞甲(jia)雙(shuang)丙(bing)烯酰(xian)胺儲存(cun)液(ye)丙(bing)稀酰(xian)胺29g，N，N-亞(ya)甲(jia)叉(cha)雙(shuang)丙(bing)稀酰(xian)胺g，加(jia)H2O至 00ml。）儲於(yu)棕(zong)色瓶，4℃避(bi)光保(bao)存(cun)。嚴(yan)格(ge)核(he)實(shi)PH不得(de)超過7.0，因(yin)可(ke)以發(fa)生脫氨(an)基(ji)反應(ying)是光催化(hua)或(huo)堿催(cui)化(hua)的(de)。使用期(qi)不得(de)超過兩個(ge)月，隔(ge)幾個(ge)月須(xu)重新(xin)配制(zhi)。如(ru)有(you)沈澱，可(ke)以過(guo)濾(lv)。
2、 十二烷(wan)基(ji)硫(liu)#鈉SDS溶液(ye):0%（w/v）0.gSDS，mlH2O去離(li)子(zi)水(shui)配制(zhi)，室(shi)溫(wen)保(bao)存(cun)。
3、 分離(li)膠(jiao)緩(huan)沖(chong)液(ye):.5mmol/L Tris-HCl （pH8.8）:8.5gTris和48mlmol/L HCl 混(hun)合(he)，加(jia)水稀(xi)釋到，b-FGFWestern  4、 濃(nong)縮(suo)膠(jiao)緩(huan)沖(chong)液(ye):0.5mmol/L Tris-HCl （pH6.8）:6.05gTris溶於(yu)40mlH2O中(zhong)，用約(yue)48ml mol/L HCl調(tiao)至pH6.8加(jia)水稀(xi)釋到00ml終體積。過(guo)濾(lv)後40C保(bao)存(cun)。這(zhe)兩種(zhong)緩(huan)沖(chong)液(ye)必(bi)須(xu)使用Tris堿制(zhi)備(bei)，再用HCL調(tiao)節PH值(zhi)，而不(bu)用(yong) Tris.CL。
5、 TEMED原溶液(ye)N，N，N’N’四(si)甲(jia)基(ji)乙二(er)胺催(cui)化過硫(liu)#銨形(xing)成(cheng)自由(you)基(ji)而加(jia)速兩種(zhong)丙(bing)稀酰(xian)胺的(de)聚(ju)合(he)。PH太(tai)低(di)時(shi)，聚合反應受到抑(yi)制(zhi)。0%（w/v）過(guo)硫(liu)#胺溶液(ye)。提(ti)供兩種(zhong)丙(bing)稀酰(xian)胺聚(ju)合所必(bi)須(xu)的(de)自(zi)由(you)基(ji)。去離(li)子(zi)水(shui)配制(zhi)數(shu)ml，臨(lin)用(yong)前(qian)配制(zhi).
Anti-ET-（Endothelin-）  內(nei)皮(pi)素-抗體
anti-ets/E26 （E-twenty six ）   Ets轉(zhuan)錄因(yin)子(zi)家(jia)族(zu)ets抗(kang)體
Anti-Eukaryotic aspartyl protease（Rice）  天冬(dong)氨(an)酸(suan)蛋(dan)白(bai)酶家族(zu)蛋(dan)白(bai)抗體（水(shui)稻蛋(dan)白(bai)的(de)壹(yi)種(zhong)）
Anti-EV7（Human enterovirus 7）  腸(chang)道(dao)病(bing)毒7型(xing)/手足口病(bing)病(bing)毒抗(kang)體(ti)
Anti-EXPB-2（beta-expansin）death inducer-obliterator-2  植(zhi)物(wu)延(yan)展(zhan)素(su)-β
Anti-Fabp2 （fatty acid binding protein 2, intestinal）  脂肪酸(suan)結合蛋(dan)白(bai)2抗體
Anti-FABP（brain） （Fatty acid-binding protein brain）  腦型(xing)脂肪(fang)酸結合蛋(dan)白(bai)抗體
Anti-factor VIII（FVIII）  第(di)八因子(zi)相(xiang)關抗原(yuan)抗體
Anti-factor VIII（FVIII）  第(di)八因子(zi)相(xiang)關抗原(yuan)抗體
Anti-FADD （Fas-associated protein with death domain）  Fas死亡(wang)結構域相(xiang)關(guan)蛋(dan)白(bai)
Anti-FAM3B/PANDER（PANcreatic DERived factor）  胰(yi)腺衍(yan)生因子(zi)抗(kang)體
Anti-FAS/Apo-a/CD95（TNFR superfamily member;FasL receptor）（mouse rat）  載脂(zhi)蛋(dan)白(bai)A抗體
因(yin)子(zi)受體/纖維母(mu)細胞(bao)生長因(yin)子(zi)-7抗(kang)體
Anti-FGF-8/HBGF-8 （Fibroblast growth factor 8）  成(cheng)纖維細(xi)胞(bao)生長因(yin)子(zi)-8/纖維母(mu)細胞(bao)生長因(yin)子(zi)-8抗(kang)體
anti-FGF-0（Fibroblast Growth Factor-0）  成(cheng)纖維細(xi)胞(bao)生長因(yin)子(zi)-0/纖維母(mu)細胞(bao)生長因(yin)子(zi)-0抗(kang)體
Anti-KGFR（kilodalton growth factor receptors）  角質(zhi)形成(cheng)細胞(bao)生長因(yin)子(zi)受體抗體
Anti-FGFR（Fibroblast Growth Factor Receptor ）  纖維母(mu)細胞(bao)生長因(yin)子(zi)受體抗體
Anti-FGFR2（Fibroblast Growth Factor Receptor 2）  成(cheng)纖維細(xi)胞(bao)生長因(yin)子(zi)受體2抗體
Anti-FGFR3（Fibroblast Growth Factor Receptor 3）  成(cheng)纖維細(xi)胞(bao)生長因(yin)子(zi)受體3抗體
6、 SDS- PAGE加(jia)樣緩(huan)沖(chong)液(ye):pH6.8 0.5mol/L Tris緩(huan)沖(chong)液(ye)8ml，甘(gan)油(you)6.4ml，0%SDS 2.8ml，巰基(ji)乙醇(chun)3.2ml，0.05%溴(xiu)酚藍.6ml，H2O 32ml混勻備(bei)用(yong)。按:或(huo):2比(bi)例(li)與(yu)蛋(dan)白(bai)質樣品(pin)混(hun)合，在沸水(shui)終煮(zhu)3min混勻後再上(shang)樣，壹(yi)般(ban)為20-25ul，總蛋(dan)白(bai)量(liang)00μg。
7、 Tris-甘(gan)氨(an)#電泳緩(huan)沖(chong)液(ye):30.3gTris，88g甘(gan)氨(an)#，0gSDS，用(yong)蒸(zheng)餾(liu)水(shui)溶解至000ml，得(de)0.25mol/L Tris-.92mol/L甘(gan)氨(an)#電極(ji)緩(huan)沖(chong)液(ye)。臨(lin)用(yong)前(qian)稀(xi)釋0倍。
8、 轉(zhuan)移緩(huan)沖(chong)液(ye)：配制(zhi)L轉(zhuan)移緩(huan)沖(chong)液(ye)，需稱(cheng)取(qu)2.9g甘(gan)氨(an)#、5.8gTris堿、0.37g SDS，並(bing)加(jia)入(ru)200ml甲(jia)醇(chun)，加(jia)水至(zhi)總量(liang)L。
9、 麗(li)春(chun)紅(hong)染(ran)液(ye)儲存(cun)液(ye)：麗春(chun)紅(hong)S 2g 三#乙#30g 磺(huang)基(ji)水楊(yang)# 30g 加(jia)水至(zhi)00ml 用時上(shang)述儲存(cun)液(ye)稀釋(shi)0倍(bei)即(ji)成(cheng)麗春(chun)紅(hong)S使用液(ye)。使用後(hou)應予(yu)以廢(fei)棄。
0、 脫(tuo)脂(zhi)奶粉(fen)5%（w/v）。
、 NaN3 0.02% 疊(die)氮(dan)鈉（有(you)毒，戴(dai)手套操(cao)作(zuo)），溶於(yu)磷(lin)#緩(huan)沖(chong)鹽溶液(ye)（PBS）。
2、 Tris緩(huan)沖(chong)鹽溶液(ye)（TBS）:20mmol/LTris/HCl（pH7.5），500mmol/LnaCl。
3、 Tween20（5）鼠抗(kang)人(ren)-MMP-9（6）鼠(shu)抗人(ren)-TIMP-。
4、 過(guo)氧化(hua)物(wu)酶(mei)標(biao)記(ji)的(de)第(di)二(er)抗(kang)體(ti)。
5、 NBT（溶於(yu)70%二(er)甲(jia)基(ji)甲(jia)酰(xian)胺，75mg/ml）。
6、 BCIP（溶於(yu)00%二(er)甲(jia)基(ji)甲(jia)酰(xian)胺，50mg/ml）。
7、 00mmol/LTris-HCl（pH9.5）。
8、 00mmol/L NaCl。
9、 50mmol/LTris-HCl（pH7.5），5mmol/L EDTA。（可(ke)以參(can)看(kan)分子(zi)克(ke)隆）