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anti-Melamine ,抗(kang)三聚氰胺抗(kang)體
抗(kang)體選(xuan)擇(ze)指(zhi)南(nan):
檢測(ce)任何(he)目(mu)的靶(ba)蛋白都有不止壹(yi)種抗體(ti)可(ke)供(gong)選(xuan)擇(ze),為縮小抗(kang)體的(de)選(xuan)擇(ze)範(fan)圍選(xuan)中合適的(de)抗(kang)體,需要(yao)考慮(lv)如下(xia)幾(ji)種因(yin)素(su):
. 分析(xi)或(huo)應用(yong)的(de)類型(xing)
2. 樣(yang)本蛋白的結(jie)構性質
3. 樣(yang)本的種屬(shu)
4. 抗體(ti)宿主(zhu)的種類
5. 抗(kang)體(ti)的標(biao)記和檢(jian)測
anti-Melamine ,抗(kang)三聚(ju)氰胺抗(kang)體分(fen)析(xi)試(shi)驗的(de)應用(yong)類(lei)型壹(yi)般抗體(ti)說(shuo)明書都(dou)列(lie)出(chu)該抗(kang)體(ti)經試(shi)驗驗(yan)證過適用(yong)於(yu)何(he)種分(fen)析(xi)類(lei)型(xing),如:
可(ke)以應用(yong)於(yu)WB IHC ICC ELASA 分析(xi)等(deng),如(ru)果抗體(ti)說明書沒有提及的應用(yong)類(lei)型,並(bing)不(bu)意味
著該抗(kang)體(ti)不適用(yong)於(yu)此(ci)種分(fen)析(xi)應用(yong)類(lei)型,而(er)僅(jin)是(shi)說(shuo)明尚未經過此(ci)種分(fen)析(xi)試(shi)驗驗(yan)證,如果抗體(ti)不適用(yong)某(mou)些(xie)分(fen)析(xi)試(shi)驗,則會在(zai)抗(kang)體說明書上標(biao)註出(chu)來不(bu)適於(yu)某(mou)分(fen)析(xi)試(shi)驗。
樣(yang)本蛋白的結(jie)構性質了解樣(yang)本蛋白的結(jie)構性質有助於(yu)選(xuan)擇(ze)zui合適的(de)抗(kang)體,至(zhi)少兩(liang)方面(mian)因(yin)素(su)需要(yao)考慮(lv)
,2-二溴-3-氯丙(bing)烷(wan) 標(biao)準品(pin) CAS號: 35407 250mg
,2-二(er)溴乙(yi)烷(wan) 標(biao)準品(pin) CAS號: 06-93-4 g
,2-二(er)氯丙(bing)烷(wan)標(biao)準品(pin) CAS號: 78-87-5 250mg
,3-二(er)氯丙(bing)烯(xi) 標(biao)準品(pin) CAS號: 542-75-6 250mg
-萘(nai)乙酸(suan) 86-87-3 g
2-(-萘(nai))乙酰胺 標(biao)準品(pin) CAS號:86-86-2 g
2,2-DPA 茅(mao)草枯 標(biao)準品(pin) CAS號:75-99-0 250mg
2,4,5-T 2,4,5-涕標(biao)準品(pin) CAS號: 93-76-5 250mg
2,4-D 2,4-滴 標(biao)準品(pin) CAS號:94-75-7 250mg
2,4-DB 2,4-滴丁(ding)酸 標(biao)準品(pin) CAS號:94-82-6 250mg
2,6-DIFLUOROBENZOIC ACID 2,6-二(er)氟苯(ben)甲(jia)酸(suan) 標(biao)準品(pin) CAS號:385-00-2 250mg
2-乙(yi)酰-5-硝(xiao)基(ji)噻(sai)唑(zuo) 標(biao)準品(pin) CAS號:40-40-9 00mg
()..待(dai)測樣本蛋白的結(jie)構域(yu):抗(kang)體(ti)是(shi)由(you)各(ge)種(zhong)不同免(mian)疫原(yuan)免(mian)疫宿(xiu)主而(er)制備(bei)得(de)來,其(qi)中的免(mian)疫原(yuan)包括:
全長(chang)蛋白、蛋白片斷、多(duo)肽、全有機體(ti)(如(ru):細菌)或(huo)細(xi)胞(bao),抗(kang)體(ti)說(shuo)明書壹(yi)般都有免(mian)疫原(yuan)的描述,如果打(da)算(suan)檢測(ce)的(de)是蛋(dan)白片斷或(huo)壹(yi)種特(te)殊的同型物或(huo)蛋(dan)白全長(chang)的某(mou)壹(yi)區(qu)域(yu),則必須(xu)選(xuan)擇(ze)用(yong)含此(ci)片段域(yu)的(de)免(mian)疫原(yuan)制備(bei)出(chu)的抗(kang)體。如(ru)果打(da)算(suan)用(yong)FACS 流式(shi)檢(jian)測活(huo)細胞(bao)的(de)表面蛋白,則需要(yao)選(xuan)擇(ze)含該表面蛋白的胞(bao)外(wai)域(yu)來免(mian)疫制(zhi)備(bei)的(de)抗體(ti)。
(2)樣本的提取或(huo)處(chu)理過程(cheng):某(mou)些(xie)抗(kang)體要(yao)求樣本經過某(mou)些(xie)特(te)殊處(chu)理,例(li)如:許(xu)多(duo)抗體(ti)只識別還原和變(bian)性的(de)、表位已暴露不受(shou)二級(ji)四級(ji)結(jie)構阻(zu)礙的(de)蛋白樣本,另壹(yi)方面(mian),某(mou)些(xie)抗(kang)體僅(jin)識(shi)別天然折疊狀(zhuang)態的(de)蛋(dan)白。當選(xuan)擇(ze)免(mian)疫組(zu)化(hua)的(de)抗體(ti)時,應註(zhu)意某(mou)些(xie)抗(kang)體只識別未固定(ding)的冷(leng)凍的(de)組(zu)織,而(er)另壹(yi)些(xie)抗(kang)體則適用(yong)於(yu)無(wu)需抗(kang)原(yuan)修(xiu)復(fu)解交(jiao)聯步(bu)聚(ju)的甲(jia)醛固定(ding)石蠟包埋(mai)的組(zu)織,這些(xie)都(dou)會在抗體(ti)說(shuo)明書上應用(yong)部(bu)分標(biao)示出(chu)來
樣(yang)本的物種(zhong) 應選(xuan)擇(ze)物種(zhong)相同或(huo)有交叉(cha)反應的(de)抗(kang)體,抗體(ti)可(ke)能與(yu)不(bu)同物種(zhong)的同種靶(ba)蛋(dan)白有交叉(cha)反應,因(yin)其(qi)氨基(ji)酸序(xu)列(lie)同源性(xing)較(jiao)高(gao),如果樣本的種類未列(lie)入(ru)抗體說(shuo)明書上的(de)交叉(cha)反應種(zhong)屬(shu)表中,並不意味著該抗(kang)體(ti)不適用(yong)於(yu)檢測(ce)該物種(zhong)的蛋(dan)白,而(er)只是表示該物種(zhong)尚未用(yong)此(ci)抗體(ti)檢測(ce)驗證(zheng)過,應通(tong)過序列(lie)比(bi)對的方法(fa)來預測(ce)交叉(cha)反應,可(ke)應用(yong)Expasy 和 NCBI BLAST 來進(jin)行(xing)不同物種(zhong)蛋白同源性(xing)比(bi)對。
壹(yi)抗宿主(zhu)物種(zhong)的選(xuan)擇(ze)壹(yi)般說來,在(zai)使(shi)用(yong)偶(ou)聯二(er)抗結(jie)合無(wu)偶(ou)聯物的(de)壹(yi)抗時,壹(yi)抗宿主(zhu)動(dong)物的(de)物種(zhong)選(xuan)擇(ze)較(jiao)為重要(yao),對於免(mian)疫組(zu)化(hua)而(er)言,盡可(ke)能選(xuan)擇(ze)與樣本不同種系(xi)物種(zhong)的壹(yi)抗,從而(er)避免(mian)二抗(kang)與樣(yang)本內源性(xing)免(mian)疫球蛋白產生交(jiao)叉(cha)反應,例(li)如(ru):檢測小(xiao)鼠樣本蛋白,則不應選(xuan)擇(ze)小鼠或(huo)大(da)鼠源的壹(yi)抗,選(xuan)兔(tu)源的壹(yi)抗,則二抗(kang)則可(ke)選(xuan)擇(ze)偶聯了檢測(ce)分(fen)子(zi)(酶、熒光(guang)素(su)、等)的抗(kang)兔(tu)IgG。
如(ru)果選(xuan)擇(ze)有偶聯物的(de)壹(yi)抗則不適用(yong)上述情(qing)況,除免(mian)疫組(zu)化(hua)外(wai)的其(qi)它(ta)對不含內源性(xing)免(mian)疫球蛋白樣本的檢測方法(fa),則抗體(ti)宿(xiu)主物種(zhong)的影(ying)響不(bu)大(da),如對不含IgG 的細(xi)胞(bao)裂解物樣(yang)本的western blotting檢測,盡管如(ru)此(ci),含有血清的組(zu)織裂解物和組(zu)織培(pei)養(yang)上清中含有免(mian)疫球蛋白,還原(yuan)變性(xing)樣(yang)本中含IgG,在western blot 檢(jian)測(ce)中則結(jie)合出現(xian)IgG 分(fen)子(zi)50 and 25 kDa 的(de)重鏈和輕(qing)鏈條(tiao)帶。
二(er)抗(kang)的選(xuan)擇(ze) 二抗應選(xuan)用(yong)與(yu)使用(yong)的(de)壹(yi)抗相同的物種(zhong)來源(yuan),例(li)如:如(ru)果妳的壹(yi)抗是小(xiao)鼠的單(dan)克隆(long)抗(kang)體(ti),二抗(kang)則選(xuan)抗(kang)小鼠的二抗anti-mouse secondary。建(jian)議檢(jian)查二抗(kang)說(shuo)明書確(que)保(bao)該抗(kang)體(ti)適用(yong)於(yu)妳的檢測應用(yong), 二(er)抗壹(yi)般連(lian)接熒光(guang)素(su)FITC 或(huo)發(fa)光(guang)團。
雙重染色抗體(ti)的(de)選(xuan)擇(ze)用(yong)未偶聯壹(yi)抗進行(xing)細胞(bao)培(pei)養(yang)物或(huo)組(zu)織切(qie)片的雙重免(mian)疫染(ran)色要(yao)求壹(yi)抗來源(yuan)於(yu)不同物種(zhong)並且(qie)二抗(kang)分別識別其中之(zhi)壹(yi),二抗說(shuo)明書應描述其與其它(ta)物種(zhong)來源(yuan)的(de)免(mian)疫球蛋有否有交叉(cha)吸(xi)附(fu)。
熒光(guang)和化(hua)學(xue)發(fa)光(guang)標(biao)記連(lian)接於二抗(kang)的標(biao)記物是(shi)為了檢測(ce)抗(kang)體(ti)的(de)結(jie)合,選(xuan)擇(ze)標(biao)記物依賴於(yu)幾(ji)個(ge)參(can)數(shu):檢測(ce)方法(fa):熒光(guang)或(huo)著色(se)沈(chen)澱(dian),熒(ying)光(guang)標(biao)記物用(yong)特(te)殊波長(chang)的光(guang)激發(fa)時發(fa)射出(chu)可(ke)見光(guang)。
熒光(guang)素(su)標(biao)記物要(yao)求水性封(feng)片介質,藻(zao)紅蛋(dan)白(藻青素(su) / 藻紅素(su)要(yao)求不添加(jia)甘(gan)油(you)的(de)水(shui)性(xing)封(feng)片介
質,因(yin)其(qi)有淬(cui)滅熒光(guang)的效(xiao)應,化(hua)的(de)抗體(ti)通(tong)常(chang)用(yong)於(yu)加(jia)強親和素(su)--酶或(huo)熒(ying)光(guang)素(su)復合物(ABC 試(shi)劑 或(huo)親和素(su)或(huo)鏈黴(mei)親和素(su)連(lian)接酶或(huo)熒(ying)光(guang)素(su)的信號)
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